1、,临床检验根底,第一页，共六十一页。,临床检验根底是采用各种实验室检查方法和技术，对来自机体的血液、尿液、粪便以及分泌物和排泄物等标本进行一般性状观察，理学、化学、免疫学、病原学和显微镜等检查，为疾病筛查和诊断提供简便、快速的检测结果。,第二页，共六十一页。,第一节概述,血液生理概要,标本采集、送检、保存与处理,标本抗凝,血涂片的制备,血细胞染色方法,血细胞显微镜计数法,第三页，共六十一页。,教学目标,掌握：血液标本采集的方法及评价，抗凝剂的选择应用，血涂片制备方法和染色原理，血细胞显微镜计数方法。熟悉：血液生理概述和标本保存。,第四页，共六十一页。,一 血液生理概要,1.血液的组成血浆：血液
2、加抗凝剂后别离出来的液体局部。血清：血液离休后自然凝固别离出来的液体。,45%,血尘,55%,89%,9192%,第五页，共六十一页。,2.血液的理化性质血量：正常人血液量7010ml/kg体重，成人45L，占体重的6%8%。颜色：动脉血鲜红色 HbO2 静脉血暗红色 Hbred 贫血病人 红色变浅 CO、氰化物中毒 樱红色红细胞悬浮稳定性 唾液酸根形成Zeta电位,第六页，共六十一页。,黏滞性 血细胞比容 红细胞数量 血浆粘度 血浆蛋白浓度 比密 血液比密与红细胞相关 男1.0551.063 女1.0511.060 血浆比密与血浆蛋白相关 1.0251.030渗透压 血浆渗透压 290310
3、mOsm/kgH2OPH 7.357.45凝固性 凝血因子激活,第七页，共六十一页。,3.血液的功能 运输功能 协调功能 维持内环境的稳定 防御功能,第八页，共六十一页。,二、血标本的采集、送检、保存与处理,一血标本的采集,采血,静脉采血,毛细血管采血,普通采血法,真空采血法,第九页，共六十一页。,静 脉 采 血 法(venipuncture for blood collection),凡需血量较多的检查0.5ml如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。,部位 浅表静脉均可,常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝部，幼儿可用颈外静脉。体位 坐位或卧位捆扎时间 1min,第十页，共六十一页。,第十一页
4、，共六十一页。,二、静脉采血法,【采血方法】准备选择静脉消毒扎压脉带穿刺、松压脉带抽血拔针止血注入试管。如以下视频所示,第十二页，共六十一页。,静脉采血法,第十三页，共六十一页。,普通采血法,1.防止溶血,器具枯燥,防止气泡2.先拔针头,再缓缓注入试管3.与抗凝剂混匀时轻轻颠倒4.严格消毒5.抽血时只能外抽不能内推,第十四页，共六十一页。,真空采血法40年代，美国BD公司,套筒式和头皮静脉式两种优点：血样无需容器之间的转移，减少溶血现象，保持 血液标本的完整性，使检验结果更加准确，也有 利于防止医院内血源性传染病的交叉感染和环境 保护。缺点：真空采血管价格较高注意:采血后,先拔下刺塞针端的采血
5、试管,后拔穿刺针。,第十五页，共六十一页。,I.采血针,2022-10-21,第十六页，共六十一页。,II.持针器,2022-10-21,2022-10-21,第十七页，共六十一页。,III.真空采血管,2022-10-21,第十八页，共六十一页。,第十九页，共六十一页。,血量0.1ml的检验工程：RBC计数、WBC计数、BPC计数、Hb测定等,毛细血管采血法,Skin puncture for blood collection,第二十页，共六十一页。,采血部位WHO推荐采取毛细血管血以左手中指或无名指指尖内侧为宜1手指采血：优点：方便获较多血量检查结果比较恒定 缺点：与静脉血仍在某些差异。2
6、耳垂采血：优点：痛感轻 方便 适用于反复采集 缺点：血循环差受气温影响大检查结果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，特别是冬季。,第二十一页，共六十一页。,3、其他部位：拇指、拇趾或足底外侧缘采血 半岁以下婴幼儿 皮肤完整处 严重烧伤者,采血针 三棱针或专用的“采血针为好，使用前者应高压灭菌，一人一针。,第二十二页，共六十一页。,2022-10-21,第二十三页，共六十一页。,第二十四页，共六十一页。,本卷须知1、采血部位皮肤完整。2、无菌技术操作：防采血部位感染，一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：BPC计数RBC计数、Hb测
7、定WBC计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入 堵塞仪器。,第二十五页，共六十一页。,两种采血方法的优缺点比较,毛细血管采血,静脉采血,缺点,限制了重复实验和追加实验，标本量少，局部炎症可得假结果，组织液可混入,不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响有形成分的形态,优点,价廉、快速、操作简便，标本可直接测定,标本代表性大，无组织液影响，适于临床研究，可重复实验和追加其他实验,第二十六页，共六十一页。,1.血标本运输2.血标本保存3.检验后标本处理,二血液标本运输、保存与处理,第二十七页，共六十一页。,三、血标本的抗凝,1、枸橼酸钠柠檬酸钠,a.抗凝原理：螯合钙离子,使用方
8、法 配成 109 mmol/L的浓度和血液1：9 配成 105 mmol/L的浓度和血液1：4,化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸三钠盐,c.适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液毒性小,d.不适用于：血细胞计数,第二十八页，共六十一页。,2.乙二胺四乙酸EDTA盐,a.抗凝原理：螯合钙离子,b.使用方法：15g/L浓度EDTA 和血液 1：10,适用范围：对血细胞形态影响小,适合血常规检查、Hct,不适用于：影响血小板聚集和凝血因子功能,不宜凝血因子检查和血小板功能试验。,第二十九页，共六十一页。,第三十页，共六十一页。,第三十一页，共六十一页。,4.草酸钠乙二酸的钠盐,a.抗凝原理：草酸钙沉
9、淀,b.使用方法：草酸钠 0.1mol/L 和血液1：9,c.适用范围：止血学检验。,d.不适用于：对凝血因子V保护功能差，影响PT测定；沉淀物影响 自动凝血仪的使用。,第三十二页，共六十一页。,第三十三页，共六十一页。,物理方法抗凝 脱纤维蛋白：将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，使血液 不能凝固。适用于免疫学检验和红斑 性狼疮细胞检查。,第三十四页，共六十一页。,小结,血液是由血细胞和血浆组成的红色、粘稠、不透明、带腥味的混悬液。凡需血液量较少的检验工程，常用皮肤采血法，通常采手指血。采血时要注意采血部位要无病变，要擦去第一滴血，不能用力挤压。凡需血液量较多的检验工
10、程，要用静脉采血法，其采血部位常用肘前静脉。如需要抗凝抗凝血标本时，那么需要根据检验工程的要求，采用枸橼酸钠、乙二胺四乙酸盐和肝素等抗凝剂来阻止血液凝固。,第三十五页，共六十一页。,第三十六页，共六十一页。,请您练习,答案:,皮肤采血法用注意什么问题?,所选择采血部位的皮肤应完好。严格消毒皮肤，防止采血部位感染。皮肤消毒后，待乙醇挥发干后再刺针。如血流不畅，切不可用力挤压勉强采血，而应重新针刺。出血不止时，可用消毒干棉球压迫至血不再流出为止，必要时应在报告单上注明，提醒临床医生注意。进行多项细胞检查要分项采血时，采血的次序为：血小板计数、红细胞计数、白细胞计数。,第三十七页，共六十一页。,请您
11、练习,请说出静脉采血的步骤？,答案:,准备,选择静脉,消毒,扎压脉带,穿刺、松压脉带,抽血,拔针止血,注入试管。,第三十八页，共六十一页。,请您练习,答案:,请说出枸橼酸钠的抗凝原理、用途及其用量？,枸橼酸钠能与血液中的钙离子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，从而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能检查。凝血象检查常用0.109mol/L的水溶液，与血液之比通常为1：9。魏氏法血沉测定用浓度为0.105mol/L，与血液比例为1:4V：V。,第三十九页，共六十一页。,请您练习,请将以下抗凝方法和适宜的工程用线连接起来。枸橼酸钠 血细胞比容测定乙二胺四乙酸盐 红斑狼疮细胞的检
12、验 肝素 凝血象 脱纤维法 一般血液学检查,第四十页，共六十一页。,教学目标,1.表达载玻片的清洁方法、血涂片的制备方法及合格血片的标准。2.阐述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、本卷须知和染色结果的判断。3.知道吉姆萨染色法和混合染色法。,第四十一页，共六十一页。,良好血涂片的标准,厚薄适宜,头体尾清楚，细胞分布均匀,血膜边缘整齐两侧两端留有空隙,第四十二页，共六十一页。,四 血涂片的制备,血涂片染色显微镜检查用途：细胞形态检查，细胞 数量评估，网织红、异常细胞、寄生虫检验。血膜过厚：细胞重叠缩小血膜过薄：细胞分布不匀，白细胞多集中于边缘,第四十三页，共六十一页。,1.玻片清洁：a 新玻片
13、处理：用盐酸浸泡24小时。b 用过玻片处理：用洗涤剂清洗。c 使用中玻片处理：只能持玻片边缘，保持清洁、枯燥、中性、无油腻。,第四十四页，共六十一页。,操 作,30-45,血液,推玻片,载玻片,制备过程：,第四十五页，共六十一页。,角度大,角度大 速度快 血膜厚,血滴过大,血膜过厚,造成血膜厚的原因示意图,第四十六页，共六十一页。,造成血膜薄的原因示意图,角度小,血滴小 血膜薄,角度小 速度慢 血膜薄,25,第四十七页，共六十一页。,血膜分布不均：主要由于以下原因所致:,推片边缘不齐血膜出现线条样缺损,第四十八页，共六十一页。,碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天
14、青。,酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、嗜酸性颗粒成分等。,3.复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料,一染料 天然染料和人工染料 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染 组织亲合。,五 细胞常用的染色方法,第四十九页，共六十一页。,二细胞染色原理：,1.物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等,化学作用：a.染料的化学成分：助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。,第五十页，共六十一页。,瑞
15、氏染色法,一染色原理 分两相进行，第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒结合；碱性亚甲蓝与细胞中的酸性物质如核染色质、嗜碱性颗粒、血小板结合。第二相是亚甲蓝和伊红结合在适宜条件下形成紫色的亚甲蓝-伊红复合物，结果使白细胞核染色质成紫色疟原虫的染色质成红色，中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色。,第五十一页，共六十一页。,b.蛋白质的化学性质：蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基-NH2和 羧基-COOH，同时还有其他活性基团。在游离状态时，-NH2获得一个H+变成带正电的-NH3+，而-COOH失去一个H+变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。,c.周围环境的酸碱度：如
16、环境pHpI pI 为等电点，那么蛋白质带正电，结合酸性 染料；反之，pH pI，那么结合碱性染料。PHH增多易与伊红结合染色偏红 PHH减少易与美蓝结合偏蓝,第五十二页，共六十一页。,二试剂 1.Wright染液 瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml,磷酸盐缓冲液PBS：PH6.46.8 磷酸二氢钾无水0.3g，磷酸氢二钠无水0.2g,蒸馏水加到1000ml。配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。,第五十三页，共六十一页。,1,2,3,3.染色方法：a.用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。d.用清水冲洗，待干后镜检。,第五十四页，共六十一页。,本卷须知：a.血膜要干透后才能染色，否那么染色时易脱落 b.染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一般染液淡、染色时间长些效果好。c.染液不能过少，以防蒸发沉淀。d.冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料 沉着。冲洗时间也不能长。e.染色过淡，可复染。f.染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色,第五十五页，共六十一页。,第五十六页，共六十一页。