1、实验诊断课件教学,第一页，共五十九页。,第三章 出血、血栓与止血检测,第二页，共五十九页。,生理状态下，血液在血管内流动，它既不会溢出血管外引起出血，也不会在血管内凝固形成血栓，这主要是由于机体内存在着完善的止凝血与抗凝血机制，这种机制呈动态平衡状态。机体的止血机制包括，血管壁和血小板的止血作用凝血因子和抗凝血因子的止血作用纤维蛋白溶解因子和抗纤溶因子的溶栓作用等。,第三页，共五十九页。,病理状态下，止凝血和抗凝血机制的动态平衡失调，假设止凝血机制亢进或抗凝血机制减退便会形成血栓，临床上出现血栓性疾病。反之，假设止凝血机制减退，或抗凝血机制亢进，便会引起出血，临床上出现出血性疾病，本章重点介绍
2、血栓与止血的检测以及检测工程的选择和应用。,第四页，共五十九页。,第一节 血管壁检测第二节 血小板检测第三节 凝血因子检测第四节 抗凝系统检测第五节 纤溶活性检测第六节 血液流变学检测第七节 检测工程的选择和应用,本章重点、难点内容及习题,第五页，共五十九页。,第一节 血管壁检测,一出血时间 原理将毛细血管刺破，血液自然流出到自然停止所需的时间。参考值测定器法：6.92.1min，超过9min为异常。,第六页，共五十九页。,临床意义 BT延长见于：1、血小板明显减少，如血小板减少性紫癜；2、血小板功能异常；3、血管异常，如遗传性出血性毛细血管扩张症；4、药物，如服用乙酰水杨酸等。,第七页，共五
3、十九页。,二血管性血友病因子抗原测定 原理 在含血管性血友病因子抗体的琼脂凝胶板中参加一定量受检血浆，在电场作用下泳动一定时间出现抗原-抗体反响形成的火箭样沉淀峰，其高度与受检血浆中VWF浓度呈正相关，计算血浆中血管性血友病因子抗原的含量。,第八页，共五十九页。,VWFAg是血管内皮细胞促凝指标之一，它由血管内皮细胞合成和分泌，参与血小板的粘附和聚集反响，起促凝作用。,第九页，共五十九页。,1、减低：见于血管性血友病VWD，是诊断VWD及其分型的指标之一。2、增高：见于血栓性疾病，如急性冠状动脉综合症ACS，心梗，心绞痛，脑血管病变，DM，妊高症，肾小球疾病，大手术后，恶性肿瘤，免疫性疾病，感
4、染性疾病，MDS等。,第十页，共五十九页。,第二节 血小板检测,一血小板计数 二血小板相关免疫球蛋白测定PAIg 参考值PAIgG为078.8ng/107血小板；PAIgM为07.0ng/107血小板；PAIgA为02.0ng/107血小板。临床意义增高：主要见于ITP患者。也见于输血后紫癜、SLE等。观察病情：治疗有效，PAIg水平下降；复发那么升高。,第十一页，共五十九页。,三血小板粘附试验血小板粘附(PAgT)试验常用玻璃柱法、玻璃球法和玻璃器法。原理血小板具有粘附损伤的血管外表或异物外表的特性。当一定数量的血小板粘附于异物外表上，测定粘附前与粘附后血小板总数的百分率，即为血小板粘附率(
5、)。,第十二页，共五十九页。,参考值玻璃柱法:62.58.61,临床意义1.PAgT增多:见于血凝状态和血栓性疾病，如心绞痛2.PAgT减低:见于血小板无力症、血友病、巨大血小板综合征。,第十三页，共五十九页。,原理采用血小板聚集仪比浊法进行血小板聚集试验(PAgT):在富血小板血浆(PRP)中参加诱导剂时，由于血小板发生聚集，悬液的浊度就发生相应的改变，透光度增加。,四血小板聚集试验,第十四页，共五十九页。,参考值血小板聚集图像的参考值见表,临床意义 1.PAgT减低:见于血小板无力症、巨大血小板综合征。2.PAgT增多:鉴于血液高凝状态和血栓性疾病，如心肌堵塞。,第十五页，共五十九页。,第
6、三节 凝血因子测定,一活化局部凝血活酶时间测定 原理活化局部凝血活酶时间(APTT)测定，在受检血浆中参加局部凝血活酶磷脂悬液，在Ca2+的作用下观察血浆凝固所需要的时间，是内源性凝血系统的筛选试验。,第十六页，共五十九页。,参考值3243S，较正常对照值延长10S以上异常临床意义是目前推荐应用的内源凝血系统的筛选试验，又是监测肝素治疗的首先指标。,第十七页，共五十九页。,延长，见于因子、PK，HMWK和纤维蛋白原缺乏。缩短，见于血栓性疾病和血栓前状态。,第十八页，共五十九页。,二血浆凝血酶原时间测定 原理 血浆凝血酶原时间(PT)测定，在受检血浆中参加组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转变为
7、凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，观察血浆凝固所需要的时间。PT是反映外源性凝血系统的筛选试验,第十九页，共五十九页。,参考值 PT正常值为1113S,病人测定值超过对照值3s以上为异常 临床意义 1.PT延长:见于先天性凝血因子、及纤维蛋白原缺乏 2.PT缩短:见于血液高凝状态和血栓性疾病如DIC早期 3.口服抗凝剂的监测,第二十页，共五十九页。,三血浆纤维蛋白原测定原理在受检血浆中参加一定量凝血酶，后者使血浆中的纤维蛋白原转变为纤维蛋白。临床意义增高：见于DM，急性心梗，急性传染病，风湿热，急性肾小球肾炎，肾病综合症，灼伤，MM，休克，大手术后，妊高症，急性感染，恶性肿瘤以及血栓前状
8、态，局部老年人等。减低：见于DIC，原发性纤溶症，低无纤维蛋白原血症，重症肝炎和肝硬化。,第二十一页，共五十九页。,四血浆因子定性试验原理在受检血浆中参加Ca+溶液，使纤维蛋白原变成纤维蛋白凝块，将此凝块置入5mol/L尿素溶液中，如果受检血浆缺乏因子，那么形成的可溶性纤维蛋白凝块易溶于尿素溶液中。,第二十二页，共五十九页。,临床意义假设纤维蛋白凝块在24h内完全溶解，那么表示因子缺乏，见于先天性因子缺乏症和获得性因子明显减低，如肝病，SLE，DIC，原发性纤溶症，恶性肿瘤，恶性贫血，溶血性贫血以及抗抗体等。,第二十三页，共五十九页。,第四节 抗凝系统检测一血浆凝血酶时间原理TT是在受检血浆中
9、参加“标准化凝血酶溶液，测定开始出现纤维蛋白丝所需要的时间。临床意义延长：见于低无纤维蛋白原血症，和异常纤维蛋白原血症，血中FDP增高，血中有肝素或类肝素物质存在。,第二十四页，共五十九页。,二甲苯胺蓝纠正试验原理甲苯胺蓝呈碱性，有中和肝素的作用，在TT延长的受检血浆中参加少量甲苯胺蓝，再测定TT。假设延长的TT恢复到正常或明显缩短，那么表示受检血浆中有类肝素物质存在或肝素增多，假设不缩短，那么表示受检血浆中存在其他抗凝血酶类物质或缺乏纤维蛋白原。,第二十五页，共五十九页。,临床意义血中类肝素物质增多，见于严重肝病，DIC，过敏性休克，使用氮芥类药物，放疗后，肝叶切除后，肝移植后等。,第二十六
10、页，共五十九页。,三APTT交叉试验 本试验是用于鉴别凝血因子缺乏或有抗凝物质的存在，延长的APTT，假设能被1/2量的正常新鲜血浆所纠正，表示受检血浆中可能缺乏凝血因子，假设不能纠正那么表示受检血浆中可能存在抗凝物质。,第二十七页，共五十九页。,第五节 纤溶活性检测,纤溶酶可将已形成的血凝块加以溶解，产生纤维蛋白原的降解产物，从而反映纤溶活性。纤溶活性增强可致出血，纤溶活性降低可致血栓,第二十八页，共五十九页。,一优球蛋白溶解时间血浆优球蛋白组分含有纤维蛋白原,纤溶酶原和组织型纤溶酶原激活物等,但不含纤溶酶抑制物。将受检血浆参加到PH4.5的酸性溶液中使优球蛋白沉淀,经离心除去纤溶抑制物,并
11、将沉淀溶于缓冲溶液中,再参加钙或凝血酶使其凝固。在37下观察凝块完全溶解所需时间,第二十九页，共五十九页。,参考值加钙法120min 加凝血酶法为(12324)min临床意义 本实验敏感性低，特异性高1、纤维蛋白凝块70min内完全溶解2、纤维蛋白凝块在超过120min还不溶解,第三十页，共五十九页。,二D-二聚体定量试验原理 D-二聚体是交联纤维蛋白降解产物之一，为继发性纤溶特有的代谢物。将D-二聚体单抗包被在酶标反响板，参加受检血清，血浆中的D-二聚体与包被在反响板D-二聚体单抗结合，然后再加酶标记的D-二聚体抗体，与包被的D-二聚体结合，最后参加底物显色，显色深浅与血浆中D-二聚体含量呈
12、正相关。,第三十一页，共五十九页。,临床意义阴性是排除深静脉血栓和肺血栓栓塞重要试验；阳性是诊断DIC和观察溶血栓治疗的有用试验，凡有血块形成的出血，本试验均可阳性。,第三十二页，共五十九页。,三血浆纤维蛋白原降解产物定性试验原理于受检血浆中参加血浆蛋白降解产物，假设血液中FDP浓度多，胶乳颗粒发生凝集。临床意义FDP增高见于原发性纤溶和继发性纤溶，后者如DIC,恶性肿瘤，急性早幼粒白血病，肺血栓栓塞，深静脉血栓形成，肾脏疾病，肝脏疾病，器官移植排斥反响，溶血栓治疗等。,第三十三页，共五十九页。,四血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验原理在受检的血浆中参加硫酸鱼精蛋白溶液，如果血浆中存在可溶性纤维蛋白单
13、体与纤维蛋白降解产物复合物那么鱼精蛋白使其解离析出纤维蛋白单体，纤维蛋白单体自行聚合成肉眼可见的纤维状物，此为阳性反响。,第三十四页，共五十九页。,临床意义 阳性：见于DIC早中期 本试验是鉴别原发性纤溶和继发性纤溶的试验之一。,第三十五页，共五十九页。,第六节 血液流变学检测,血液流变学是应用物理和化学的手段研究血液中细胞成分与血浆成分在宏观和微观下的变形和流动特性，也是研究与血液直接接触的血管结构的流变特性。,第三十六页，共五十九页。,一、全血粘度测定临床意义增多:见于血浆球蛋白和(或)血脂增多的疾病，如多发性骨髓病、原发性巨球蛋白血症、糖尿病、高脂血症减低：见于贫血，重度纤维蛋白原和其他
14、凝血因子缺乏症。,第三十七页，共五十九页。,二、血浆黏度测定临床意义见于血浆球蛋白和血脂增高的疾病，如多发性骨髓瘤，原发性巨球蛋白血症，糖尿病，高脂血症，动脉粥样硬化等。,第三十八页，共五十九页。,第七节 检测工程的选择和应用 血栓与止血的检测主要用于临床有出血倾向、出血病患者以及血栓前状态、血栓病患者的临床诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断等，也用于抗血栓和溶血栓药物治疗的监测等。,第三十九页，共五十九页。,一一期止血缺陷筛检试验的选择和应用 一期止血缺陷是指血管壁和血小板缺陷所致出血病。选用血小板计数(PLT)和出血时间BT作为筛检试验，根据筛检试验的结果，大致由以下四种情况：,第四十页，
15、共五十九页。,1、BT和PLT都正常 除正常人外，多数是由单纯血管壁通透性和或脆性增加所致的血管性紫癜所致。临床上常见于过敏性紫癜、单纯性紫癜和其他血管性紫癜等。2、BT延长，PLT减少 多数是由血小板数量减少所致的血小板减少症。临床上多见于原发性和继发性血小板减少性紫癜。,第四十一页，共五十九页。,3、BT延长、PLT增多 多数是由血小板数量增多所致的血小板增多症。临床上多见于原发性和反响性血小板增多症。4、BT延长、PLT正常 多数是由血小板功能异常或某些凝血因子严重缺乏所致的出血病，如血小板无力症、贮藏池病以及低无纤维蛋白原血症、血管性血友病vWD等。,第四十二页，共五十九页。,二二期止
16、血缺陷筛检试验的选择和应用 二期止血缺陷是指凝血因子缺乏或病理性抗凝物质存在所致的出血病。选用APTT和PT作为筛检试验，大致有以下四种情况：1、APTT和PT都正常 除正常人外，仅见于遗传性和获得性因子缺陷症。,第四十三页，共五十九页。,2、APTT延长,PT正常 多数是由内源性凝血途径缺陷所引起的出血病，如遗传性和获得性因子、缺陷症等。3、APTT正常，PT延长 多数是由外源性凝血途径缺陷所引起的出血病，如遗传性和获得性因子缺陷症等。,第四十四页，共五十九页。,4、APTT和PT都延长 多数是由共同凝血途径缺陷所引起的出血病，如遗传性和获得性因子、凝血酶原因子和纤维蛋白原因子缺陷症。此外，临床应用肝素治疗时，APTT也相应延长；应用口服抗凝剂治疗时，PT也相应延长；同时应用肝素、华法林以及纤溶综合症、抗磷脂抗体时，APTT与PT可同时延长。,第四十五页，共五十九页。,三纤溶亢进筛检试验的选择和应用 纤溶亢进性出血指纤维蛋白原和某些凝血因子被纤溶酶降解所引起的出血。可选用FDPs和D-D作为筛检试验，大致由以下四种情况：,第四十六页，共五十九页。,1、FDPs和D-D均正常 表示纤溶