1、ICS79.020B60LY中华人民共和国林业行业标准LY/T1284一2012代替LY/T1284一1998木材防腐剂对软腐菌毒性实验室试验方法Method of laboratory test for toxicity of wood preservatives to soft-rot fungus2012-02-23发布2012-07-01实施国家林业局发布LY/T1284-2012为1.03)100mL、琼脂1.5%2.0%（质量体积比），在水浴锅中加热，使琼脂溶化，分别倒入5支试管内（每支倒人量约5cm高度），塞棉花塞，试管口包防水纸，置于蒸汽灭菌器中（表压力0,1MPa,温度121
2、)，灭菌30min后，趁热取出试管，斜料放在无菌室内，冷却凝固成斜面培养基后备用。7.1.2选用马铃薯、葡萄糖试管斜面制备：洗净去皮马铃薯200g,切成小块，加水1000mL煮沸15min,滤去马铃薯块，将滤液补足至1000mL,加葡萄糖20g,琼脂15g,溶化后分装在3个500mL细口三角瓶内，在水浴锅中加热，使琼脂溶化，分别倒人试管，以下操作步骤同7.1.1。7.1.3葡萄糖，琼脂培养基制备：培养瓶可以用500L广口三角瓶或具螺纹盖的广口圆盖瓶。在培养瓶内，装人硝酸铵(NH,NO)0.3g,磷酸氢二钾(K:HPO,)0.2g,磷酸二氢钾(KH2PO,)0.25g,硫酸镁(MgSO,7H,O
3、)0.2g,琼脂2g,葡萄糖2.5g,蒸馏水100mL,如使用广口三角瓶则塞棉塞并包防水纸（如使用广口圆盖瓶则盖螺纹盖），置于灭菌器中（条件同7.1.1），灭菌30mi后，置于无菌室中冷却后接种。7.1.4选用马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基的制备：培养瓶可以用500L广口三角瓶或具螺纹盖的广口圆盖瓶。同7.1.1法制备的马铃薯滤液100mL,加葡萄糖2g,琼脂1.5g,装人培养瓶内，如使用广口三角瓶则塞棉塞并包防水纸（如使用广口圆盖瓶则盖螺纹盖），置于蒸汽灭菌器中（条件同7,1,1）灭菌30min后，取出置于无菌室中冷却后接种。7.2孢子悬浮液的制备操作的全过程应在无茵条件下进行。球毛壳菌接种在多
4、支麦芽糖（汁）试管斜面培养基上，在室温下培养3周，然后在斜面中滴人0.5L无菌蒸馏水，再用灭菌金属接种针，把斜面上的孢子铲下，再加无菌水把斜面覆盖，用力播动孢子块（也可加进无菌玻璃珠振荡），使其散碎成孢子悬浮液，倒入灭菌培养皿中，待接种用。7.3滤纸灭菌处理取6张滤纸，包防水纸，在蒸汽灭菌器中灭菌30mi,在无菌接种室冷却后用作接种。7.4滤纸接种操作的全过程应在无菌条件下进行。把孢子悬浮液倒入灭菌培养皿中，将1张灭菌滤纸迅速在培养皿中浸一下，立即放入广口三角瓶或具螺纹盖的广口圆盖瓶的培养基表面上，然后把接种的培养瓶置于温度(30士0.5)，空气相对湿度75%85%的培菌室内培养，待试菌长满培养基表面时即可把处理与对照试样放在长满菌的滤纸上，受试菌侵染。7.5试样称重试验一种防腐剂的试样取36块（选择5个梯度浓度，母个浓度6块，对照6块），每块编号后放入温度(103土2)烘箱中烘至恒重，每块称重(，)（精确到0.001g)。7.6试样浸渍处理（见图1）每一个浓度的6块试样，在真空干操器中直空（相对真空度一0.09MP)浸注处理30min(6块对照试样用溶剂处理)，用灭菌吸水纸吸去每个试样表面浮液，立即称重(2)（清确至0.001g)。7.7试样中防腐剂载药量(R)的计算木材防腐剂载药量按式(1)计算：