1、病原微生物实验室的 消毒与灭菌 湖南省疾病预防控制中心 张 红 2010.5 消毒和灭菌是保护操作人员和环境消毒和灭菌是保护操作人员和环境 不被病原微生物污染和感染的重要环不被病原微生物污染和感染的重要环节节 含有病原微生物的废物必须经过含有病原微生物的废物必须经过灭菌灭菌才能才能作为普通废物处理。作为普通废物处理。操作中可能产生的操作中可能产生的迸溅或泄漏迸溅或泄漏，必须通过，必须通过消毒消毒/灭菌达到对病原微生物的杀灭，灭菌达到对病原微生物的杀灭，-保护操作人员，保护环境。保护操作人员，保护环境。消毒和灭菌基本常识对于实验室生物安全消毒和灭菌基本常识对于实验室生物安全至关重要。至关重要。实
2、验室生物危害废物示例实验室生物危害废物示例 消毒和灭菌的基本原则消毒和灭菌的基本原则:适用于所有已知不同类别的病原微生物适用于所有已知不同类别的病原微生物 清除污染的特殊要求清除污染的特殊要求:根据根据实验工作类型实验工作类型以及所操作的以及所操作的感染性物质感染性物质的特的特性来决定性来决定 提供的一般性资料提供的一般性资料:可用于各病原微生物实验室可用于各病原微生物实验室建立标准和操作程序建立标准和操作程序，以处理特定实验室中所涉及的生物危害以处理特定实验室中所涉及的生物危害 清洁清洁 清洁剂清洁剂 消毒消毒 消毒剂消毒剂/抗菌剂抗菌剂 灭菌灭菌 灭菌剂灭菌剂/杀菌剂杀菌剂/化学灭菌剂化学
3、灭菌剂 化学方法化学方法 物理方法物理方法 基本概念基本概念 基本概念基本概念 消毒与灭菌：消毒与灭菌：-消毒和灭菌为两个不同概念消毒和灭菌为两个不同概念 -消毒处理不一定都能达到灭菌要求消毒处理不一定都能达到灭菌要求 而灭菌一定都能达到消毒目的而灭菌一定都能达到消毒目的 1 1.消毒消毒（disinfection）：通过物理或化学手段去除或杀灭病原微生物通过物理或化学手段去除或杀灭病原微生物 （不一定杀灭其孢子不一定杀灭其孢子）2 2.灭菌灭菌（sterilization）：杀灭和或去除杀灭和或去除所有所有微生物及其孢子的过程微生物及其孢子的过程 3 3抗菌剂抗菌剂（antimicrobia
4、lantimicrobial）能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂 4 4消毒剂消毒剂（disinfectantdisinfectant）用于杀灭微生物的化学品或化学混合物用于杀灭微生物的化学品或化学混合物，但不一定杀但不一定杀灭孢子灭孢子,消毒剂常用于非生命物体或其表面消毒剂常用于非生命物体或其表面 5 5化学杀菌剂化学杀菌剂（chemicalchemical germcidegermcide）用于杀灭微生物的化学品或化学混合物用于杀灭微生物的化学品或化学混合物 基本概念基本概念 6 6灭菌剂灭菌剂（microbicidemicrobici
5、de）能够杀灭微生物的化学品或化学混合物能够杀灭微生物的化学品或化学混合物，其杀灭细菌其杀灭细菌芽孢的能力达到灭菌水平的称为灭菌剂芽孢的能力达到灭菌水平的称为灭菌剂。7 7防腐剂防腐剂 （antisepticantiseptic）能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质 基本概念基本概念 基本概念基本概念 气体消毒剂与烟雾灭菌剂气体消毒剂与烟雾灭菌剂 -熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法（污染的空气、表面）清洁与预清洁清洁与预清洁去垢去垢/污剂污剂 指去除污垢、有机物和污渍 必须通过预清洁才能实现消毒和灭菌的目的
6、清除污染清除污染 指去除/杀死微生物的任何过程，清除污染的应用范围更广 消毒与灭菌的方法消毒与灭菌的方法 化学消毒灭菌化学消毒灭菌 通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体繁殖体或芽孢芽孢 对象：包括物体表面、空气和污染物等。方式：有擦洗消毒、熏蒸和浸泡等。物理消毒灭菌物理消毒灭菌 紫外线 高压蒸汽灭菌 焚烧 HEPA过滤除菌 使用方法：使用方法：刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿墩布擦洗 严重污染的物品会严重污染的物品会影响除污染剂的杀菌作用，不能被迅速地消毒或灭菌；许多杀菌剂只对经过预只对经过预清洁的物品清洁的物品才具有杀菌活性。注意！注意！预清洁时必须谨慎，以避免暴露于感染性物质;必须
7、使用与以后使用的杀菌剂化学上相容的物质;通常采用相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒;是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定 化学消毒方法化学消毒方法 清洁 化学消毒方法化学消毒方法 消毒剂与灭菌剂：消毒剂与灭菌剂：用于杀死病原微生物的化学品或化学混合物用于杀死病原微生物的化学品或化学混合物 抗菌剂与防腐剂抗菌剂与防腐剂 气体消毒剂与烟雾灭菌剂气体消毒剂与烟雾灭菌剂 （同熏蒸消毒）（同熏蒸消毒）熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法 （污染的空气、表面）（污染的空气、表面）防止过度使用消毒
8、剂防止过度使用消毒剂!正确使用化学消毒剂以确保实验场所的安全，减少来自感染性物质的危险 -选择合适的化学消毒剂 应考虑经济、控制库存以及限制环境污染等因素，尽可能减少化学消毒剂的使用量 化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异 应按产品说明书配制和使用 消毒剂的浓度（浓度越高,消毒效果越好？）消毒剂的作用时间 注意消毒剂有效期！注意消毒剂有效期！-消毒剂的有效期 消毒剂使用的有效期限 包膜病毒包膜病毒（如：（如：HSV,CMV,RSV,HIV）细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）真菌（如，念珠菌属，曲霉属）真菌（如，念珠菌属，曲霉属）非脂类或小病毒（如脊非脂类或小病毒（如脊 髓
9、灰质炎病毒髓灰质炎病毒,柯萨奇病毒，柯萨奇病毒，HBV）分枝杆菌（如分枝杆菌（如 TB，M.terrae）Cryptosporidium parvum 细菌芽孢细菌芽孢 Prions 敏感敏感 耐受耐受 低效 中效 高 效 灭菌灭菌（高，延时）（高，延时）消毒剂水平消毒剂水平 气体灭菌气体灭菌 蒸汽灭菌蒸汽灭菌 消毒剂种类（按标签说明使用）（1 1）高效）高效（水平）消毒剂：（水平）消毒剂：杀灭所有微生物，除了杀灭所有微生物，除了大量细菌芽孢大量细菌芽孢 （2 2）中效）中效：杀灭所有微生物，除了细菌芽孢杀灭所有微生物，除了细菌芽孢 （3 3）低效）低效：杀灭多数细菌繁殖体和有包膜（亲脂性）的
10、病毒杀灭多数细菌繁殖体和有包膜（亲脂性）的病毒 （4 4）最低有效浓度）最低有效浓度：液体化学杀菌剂能达到产品标明液体化学杀菌剂能达到产品标明 ，能杀灭的微生物范围的能杀灭的微生物范围的活性活性 注意产地和产家注意产地和产家 -防假冒伪劣产品防假冒伪劣产品 实际有效浓度与产品标示不同实际有效浓度与产品标示不同 常用化学灭菌剂的性能比较常用化学灭菌剂的性能比较 杀菌剂杀菌剂 使用浓度使用浓度 消毒水平消毒水平 被灭活被灭活 微生物微生物 特征特征（）（）细菌细菌 包膜病毒包膜病毒 无包膜无包膜 病毒病毒 结核分结核分 枝杆菌枝杆菌 细菌芽孢细菌芽孢 含氯含氯 高效高效+/-过氧乙过氧乙酸酸 0.
11、0010.2 高效高效 +戊二醛戊二醛 2 化学灭菌化学灭菌/高效高效+甲醛甲醛 3 8 高效高效/中效中效+/-酒精酒精 70%中效 +-+-季胺盐季胺盐 0.4 1.6 低效+-常用化学灭菌剂的安全性及特征常用化学灭菌剂的安全性及特征 杀菌剂杀菌剂 腐蚀性腐蚀性 残留物残留物 有有害害 被有机物被有机物 灭活灭活 皮肤、眼皮肤、眼 刺激性刺激性 呼吸道呼吸道 刺激性刺激性 含氯含氯 +-过氧乙酸过氧乙酸 +-+-戊二醛戊二醛 -+-+甲醛甲醛 -+-+酒精酒精 +/-+-季胺季胺 盐盐-+-（一）表面消毒 1.1.氯及氯化物氯及氯化物 广泛应用的广谱化学杀菌剂 杀灭细菌、真菌、结核杆菌、病
12、毒及芽孢 廉价、速效 （1）氯（次氯酸钠）氯作为消毒剂氯作为消毒剂/漂白剂使用时为强碱性漂白剂使用时为强碱性，具腐蚀性具腐蚀性（金属金属）1 1）更换频率取决于更换频率取决于 有机物有机物（蛋白质蛋白质）开口容器开口容器(无盖无盖)工作液的初始浓度工作液的初始浓度(储藏高浓度或使用浓度储藏高浓度或使用浓度)使用频率使用频率和特性和特性 室内条件室内条件(高温时能释放氯气高温时能释放氯气)一般情况：一般情况：一天多次浸泡一天多次浸泡、含高浓度有机物的材料含高浓度有机物的材料，应每天至少更换应每天至少更换一次；一次；使用频率较低的漂白剂溶液使用频率较低的漂白剂溶液，则可以维持一周时间则可以维持一周
13、时间。2 2）有效氯浓度）有效氯浓度 常规实验室用于消毒的有效氯浓度应为1 g/L。感染性物质的溢出以及含有大量有机物的物质，推荐使用更强作用的含5 g/L有效氯的溶液来处理。-家用漂白剂的次氯酸钠溶液含有50 g/L的有效氯 -工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近120 g/L的有效氯。（2 2）次氯酸钙）次氯酸钙 次氯酸钙Ca（ClO）2的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯；其有效氯浓度分别为1g/L和5 g/L；用颗粒或片剂配制浓度1.4 g/L或7.0 g/L溶液 不要把漂白剂当作防腐剂使用不要把漂白剂当作防腐剂使用 可以用作普通目的的消毒剂 用于浸泡非金属类浸泡非金属类的的污染材料 在紧急
14、情况下可用终浓度含12 mg/L有效氯的漂白剂消毒饮用水 注意事项 1）氯气具有强毒性！因此只能在通风良好的地方储存和使用。2）漂白剂也不能与酸混合不能与酸混合以避免氯气快速释放。3）氯的许多副产物可能对人体及环境有害对人体及环境有害，避免滥用含氯消毒剂，特别是漂白剂。（3）二氯异氰尿酸钠 二氯异氰尿酸钠（NaDCC）的粉剂含有60%的有效氯。用NaDCC粉剂配制的浓度为1.7 g/L和8.5 g/L的溶液将分别含有1 g/L和5 g/L的有效氯 NaDCC粉剂和片剂储存方便、安全 血液或其他生物危害性液体溢出时，可以使用固体NaDCC，并使其作用至少10min后再除去，然后对污染区进行进一步
15、的清理。（4 4）氯胺）氯胺 氯胺粉剂含有大约25的有效氯 -氯胺释放氯的速度比次氯酸慢 因此如果需要获得与次氯酸相同的效力，就需要较需要较高的初始浓度高的初始浓度。-有机物对氯胺溶液的影响没有次氯酸溶液那么大 在在“清洁清洁”和和“污染污染”情况下都推荐使用情况下都推荐使用2020 g/Lg/L的的浓度浓度。-在氯胺中浸泡过的物品必须要彻底清洗浸泡过的物品必须要彻底清洗，以除去加入到氯胺-T（甲苯磺酰氯醛甲酰胺钠）粉剂中的填充剂的残留物。（5）二氧化氯 二氧化氯是一种高效快速杀菌剂二氧化氯是一种高效快速杀菌剂、防腐剂和氧化剂防腐剂和氧化剂 在浓度低于漂白粉的含氯浓度时即具活性在浓度低于漂白粉
16、的含氯浓度时即具活性。气态的二氧化氯不稳定气态的二氧化氯不稳定，可分解为氯气可分解为氯气（ClCl2 2）和氧气和氧气（O O2 2），并释放热并释放热。二氧化氯溶于水二氧化氯溶于水，在水溶液中稳定在水溶液中稳定。有两种方法可获得二有两种方法可获得二氧化氯：氧化氯：1 1）将盐酸将盐酸（HClHCl）和亚氯酸钠和亚氯酸钠（NaClONaClO2 2）两种单独成分两种单独成分混合时即可生成；混合时即可生成；2 2）订购其稳定态订购其稳定态，然后在需要时随时活化生成然后在需要时随时活化生成。二氧化氯是高选择性的氧化剂（强还原有机物二氧化氯是高选择性的氧化剂（强还原有机物/硫化物）硫化物）在有机物较多的情况下，使用适量的二氧化氯比臭氧和氯在有机物较多的情况下，使用适量的二氧化氯比臭氧和氯更有效。更有效。常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度“清洁”条件下a“污染”条件下b 所需有效氯浓度所需有效氯浓度 0.1%（1 g/L）0.5%（5 g/L）次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液 （含5%有效氯）20 mL/L 100 mL/L 次氯酸钙次氯酸钙 （含70%有效氯）1.4 g/L 7