1、甘肃医药 2023 年 42 卷第 6 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.6高危型人乳头状瘤病毒感染是宫颈癌的必要因素，有关 HPV 的宫颈癌筛查方法受到广泛关注。p16 和 Ki-67 正常情况下不会同时表达，如果出现共表达的情况，常提示细胞的异常增殖及细胞周期调控失常1。研究表明 p16 和 Ki-67 阳性与宫颈高级别病变一致性高，而且 p16 和 Ki-67 双染结果判定重复性好易操作2-4。HPV E6/E7 蛋白分别通过与 p53 和 pRb 蛋白结合，触发细胞永生化及恶性转化，最终导致肿瘤发生5，是子宫颈癌筛查的特异性指标6-7。p16/
2、Ki-67 双染和HPV/E6/E7 mRNA 检测两种筛查方法应用较广，且其联合检测的应用也受到关注并在实际中应用。为评价其联合检测在宫颈病变筛查中的诊断效能，本研究对p16/Ki-67 与HPVE6/E7MRNA 联合检测的诊断价值进行 Meta 分析，以期为宫颈病变筛查提供循证依据。1资料与方法1.1文献检索策略对 CNKI、万方数据库、PubMed 数据库中公开发表的中英文文献进行检索，检索时限均为建库至 2022 年 5 月，末次检索日期为 2022 年 5 月 23日。检索主题词为：“p16/Ki-67”和“E6/E7mRNA”。同时辅以文献追溯法收集更多相关文献。1.2纳入标准和
3、排除标准纳入标准：（1）公开发表的中英文文献。（2）研究人群为参加宫颈癌筛查的妇女。（3）研究类型为诊断试验研究。（4）有宫颈 p16/Ki-67与 HPVE6/E7 mRNA 检测的结果。（5）以病理组织学诊断为金标准。（6）有完整的原始数据。进行了 p16/Ki-67与 HPV E6/E7mRNA 的联合检测，且联合检测阳性结果判定标准为任一检测结果为阳性则判定为阳性，并能直接或间接获得联合检测的真阳性值、假阳性值、假阴性值、真阴性值。排除标准：（1）研究内容不符合的文献。（2）未报告 p16/Ki-67 与 HPV E6/E7mRNA 联合检测结果的文献。（3）研究数据无法提取或转化或原
4、始数据不完整无法修正的文献。（4）综述、重复报告、会议内容等文献。1.3数据提取和质量控制收集文献资料，提取数据包括作者、研究时间、研究地区、样本量、金标准、研究设计方法、真阳性值、假阳性值、假阴性值、真阴性值等。文献由两名研究者按照纳入和排除标准对文献进行判断，统一意见后进行确定。文献质量评分依据 QUADAS-2 进行评价，主要包括病例选择、待评价试验、金标准以及病例流程和进展情况四部分。1.4统计学分析应用 Stata 12.0 软件进行统计分析。以诊断比值比作为判断研究异质性大小的指标，采用I2和 Q 检验进行异质性检验评估后确定采用固定效应模型或随机效应模型合并。合并灵敏度、特异度、
5、诊断比值比，通过比较 95%CI 是否重合判断是否存在统计学差异。拟合 SROC 曲线并计算曲线下面积及其95%CI。以 Deeks 漏斗图评价纳入研究是否存在发表偏倚。p16/Ki-67 双染联合 HPV E6/E7 mRNA 检测筛查宫颈病变的 Meta 分析廖娜王春梅刘媛北京市西城区疾病预防控制中心，北京 100120【摘要】目的：评价 p16/Ki-67 双染联合 HPV E6/E7 mRNA 检测在宫颈病变中的筛查价值。方法：检索 CNKI、万方、PubMed 数据库，收集自建库至 2022 年 5 月发表的有关 p16/Ki-67 双染和 HPV E6/E7 mRNA 联合检测进行
6、宫颈病变筛查的文献。根据纳入和排除标准进行文献筛选，应用 Stata12.0 进行诊断性试验的 Meta 分析。结果：共纳入文献 7 篇，p16/Ki-67 双染与 HPV E6/E7 mRNA 联合检测在诊断宫颈病变的合并灵敏度为 0.964（95%CI 0.9230.984），合并特异度为 0.825（95%CI 0.7880.858），合并的诊断比值比为127.623（95%CI 62.062262.444）。联合检测的灵敏度优于单项检测，诊断比值比高于 HPVE6/E7 mRNA 检测，差异有统计学意义（P0.05）。结论：在宫颈病变的诊断中，p16/Ki-67 双染与 HPV E6/
7、E7 mRNA 联合检测相对于单项检测灵敏度高，诊断比值比较好，特异度相当，具有较好的诊断价值，可以应用在宫颈病变筛查中。【关键词】宫颈癌；人乳头瘤病毒；p16/Ki-67 双染；E6/E7 mRNA；联合检测中图分类号：R737.33文献标志码：A文章编号：1004-2725（2023）06-0500-05临床研究第一作者：廖娜，女，副主任医师，从事科研教学管理和疾病控制研究工作。E-mail：500DOI:10.15975/ki.gsyy.2023.06.027甘肃医药 2023 年 42 卷第 6 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.6表 3p16
8、/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 检测及其联合检测的合并效应表 1纳入 Meta 分析的文献特征2结果2.1文献检索与纳入研究共检索到中英文文献 43篇，经去除重复文献后，按照纳入排除标准进行阅读，排除内容不相关文献、数据不完整等文献后，最终纳入文献 7 篇。见图 1。纳入的 7 项文献研究中，累计纳入研究对象 2142 人，研究特征见表 1。2.2文献质量评价运用 QUADAS-2 进行评价，纳入研究的内容偏倚风险较低。见表 2。2.3异质性检验以 DOR作为效应量，分析研究 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 检测及其联合检测的异质性。Q 检验显示，p16/Ki
9、-67 与 HPVE6/E7 mRNA 检测及其联合检测 Q 值分别为 21.261（P0.001）、21.918（P0.05），提示不存在明显的发表偏倚。见图 5。3讨论2021 年，WHO 发布 预防宫颈癌：WHO 宫颈癌前病变筛查和治疗指南（第二版）15，以期指导各国制定筛查和治疗策略，实现 2030 加速消除宫颈癌全球战略。指南将 HPV DNA 检测检测技术作为宫颈癌筛查的首选方法15，我国的一些研究也表明这是一种有效的初筛方法16-18。HPV 高危型和低危型对宫颈病变的影响不同19，世界卫生组织已明确的高危亚型 HPV有13 种，可以引起高级别的子宫颈病变，且 HPV 亚型流行率
10、有民族和地区差异20-21。在实际门诊筛查分流中，HPV DNA 检测的特异度较低，不能判定感染是一过性还是持续性的。因此，针对较高的灵敏度和特异度的HPV 检测方法受到关注。注：A 为 p16/Ki-67 检测；B 为 HPVE6/E7 mRNA 检测；C 为 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 联合检测图 2单项检测及联合检测合并灵敏度的森林图CABCAB注：A 为 p16/Ki-67 检测；B 为 HPVE6/E7 mRNA 检测；C 为 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 联合检测图 3单项检测及联合检测合并特异度的森林图CAB注：A 为 p16/Ki-
11、67 检测；B 为 HPVE6/E7 mRNA 检测；C 为 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 联合检测图 4单项检测及联合检测合并 SROC 曲线图502甘肃医药 2023 年 42 卷第 6 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.6在子宫颈病变过程中也伴随着一些分子水平的变化，这些分子标志物也可以作为筛查标志物进行检测，的准确性直接影响筛查分流效果，在癌变进程早期阶段起到预警作用。p16 的过度表达可作为 HPV 感染的指标，在 HPV 相关肿瘤中高表达22。Ki67 常被作为分子标志物用于不同肿瘤细胞诊断治疗与预后23。正常情况下
12、p16 和Ki67 蛋白的表达通常具有相互排斥的效应而不会共同发生，因此，当宫颈上皮内共同表达p16与 Ki67 时，可能出现细胞周期调控失常。研究表明，p16/Ki67 双重染色在宫颈癌筛查中具有较高的灵敏度和特异度，重复性好24-26。在宫颈上皮病变过程中，HPV 的 E6/E7 基因被激活并表达 E6/E7 癌蛋白，分别与抑癌蛋白 P53 和 PRB结合导致其失活，最终发生宫颈癌。已有研究表明，HPVE6/E7 mRNA 的高水明表达是宫颈癌的危险因素6，其定量分析具有较高的敏感性和特异性27-28。本次研究对 p16/Ki67 双染联合 HPV E6/E7 mRNA联合检测进行了 Me
13、ta 分析，共纳入文献 7 篇。结果显示 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 联合检测的灵敏度为 0.964，高于二者的单项检测的灵敏度，诊断比值比为 127.623，高于 HPVE6/E7 mRNA 单项检测，特异度三者相当，差异无统计学意义。因此，p16/Ki-67 与HPVE6/E7 mRNA 联合检测可以减少漏诊，提高诊断效能。通过对 SROC 曲线的分析，三者曲线下面积分别为 0.910，0.910，0.930，具有较高的诊断准确性。本研究共纳入 7 篇文献，文献数量较少，可能存在一定的发表偏倚。有的纳入研究未明确报告联合试验的结果判读与病理结果金标准试验结果的判读是
14、否应用了盲法。有的纳入研究未详细描述研究对象的定义和纳入排除标准，鉴于 p16/Ki-67 与 HPVE6/E7 mRNA 与宫颈病变的分级相关，因此诊断效能可能收到纳入研究对象的影响。基于现有文献的 Meta 分析结果，p16/Ki-67 与HPVE6/E7 mRNA 联合检测的灵敏度高于单项检测，具有较高的诊断比值比，SROC 曲线下面积高，具有较好的诊断价值，可以应用在宫颈癌筛查分流中。参考文献1 梁江红，罗蕊丽.p16/Ki67 细胞学双染检测对宫颈癌筛查患者的分流管理现状 J.湖北医药学院学报，2016，35（2）：228-230.2 宋明泽，程一鸣，李刚，等.p16/Ki-67 双
15、染检测技术在宫颈癌及癌前病变筛查中的价值 J.国际肿瘤学杂志，2020，47（11）：675-681.3Wentzensen N，Fetterman B，Tokugawa D，et al.Interobserver reproducibility and accuracy of p16/Ki-67 dual-stain cytology in cervicalcancerscreening J.Cancer Cytopathol，2014，122（12）：914-920.4 Aren-Cuns C，Mercado-Gutirrez M，Paniello-Alastruey I，et al.Du
16、alstaining for p16/Ki67 is a more specific test than cytology for triage ofHPV-positive women J.Virchows Arch，2018，473（5）：599-606.5 Hang D，Gao L，Sun M，et al.Functional effects of sequence variationsin the E6 and E2 genes of human papillomavirus 16 European andAsian variants J.J Med Virol，2014，86（4）：618-626.6 Ren C，Zhu Y，Yang L，et al.Diagnostic performance of HPV E6/E7mRNA assay for detection of cervical high-grade intraepithelial neoplasia and cancer among women with ASCUS Papanicolaou smears J.