1、I C S 6 5.0 2 0.3 0B 4 4臀鹭中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 4 9 2 6G B/T 1 4 9 2 6G B/T 1 4 9 2 6G B/T 1 4 9 2 6.1 一1 4 9 2 6.6-2 0 0 1.8-1 4 9 2 6-1 7-2 0 0 1.4 1-2 0 0 1.4 4 一 1 4 9 2 6.4 9-2 0 0 1实验动物微生物学检测方法(2)L a b o r a t o r y a n i m a l-Mi c r o b i o l o g i c a l e x a m i n a t i o n m e t h
2、o d s2 0 0 1 一 0 8 一 2 9 发布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1 实施中华人民共和国国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 局发 布目录1.刁0门白咋才1尸刁门斗0口口户卜州J峪009户6Q八j洲门乃7曰 11n几八八八乃八JA占八峪叹UL门:Jhh户匕门了月了口U只QG B/T 1 4 9 2 6.1-2 0 0 1 实验动物沙门菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.2-2 0 0 1 实验动物单核细胞增生性李斯特杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.3-2 0 0 1 实验动物 耶尔 森菌检 测方法G B/T 1 4 9 2 6.4-2 0 0 1
3、 实验动物皮肤病原真菌检测方法 G B/T 1 4 9 2 6.5-2 0 0 1 实验动物多杀巴斯德杆菌检测方法 G B/T 1 4 9 2 6.6-2 0 0 1 实验动物支气管鲍特杆菌检测方法 G B/T 1 4 9 2 6.8-2 0 0 1 实验动物支原体检测方法 。GB/T 1 4 9 2 6.9-2 0 0 1 实验动物鼠棒状杆菌检测方法 G B/T 1 4 9 2 6.1 0-2 0 0 1 实验动物泰泽病原体检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 1-2 0 0 1 实验动物大肠埃希菌。1 1 5 a,c:K(B)检测方法 G B/T 1 4 9 2 6.1 2-2 0
4、0 1 实验动物 嗜肺巴斯德杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 3-2 0 0 1 实验动物肺炎克雷伯杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 4-2 0 0 1 实 验动物 金黄色葡萄球菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 5-2 0 0 1 实 验动物 肺炎链球菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 6-2 0 0 1 实验动物乙型溶血性链球菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.1 7-2 0 0 1 实验动物绿脓杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 1-2 0 0 1 实验动物无菌动物生活环境及粪便标本的检测方法G B/T 1 4 9 2 6
5、.4 4-2 0 0 1 实验动物念珠状链杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 5-2 0 0 1 实验动物布鲁杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 6-2 0 0 1 实验动物钩端螺旋体检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 7-2 0 0 1 实验动物志贺菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 8-2 0 0 1 实验动物结核分枝杆菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4 9-2 0 0 1 实验动物空肠弯曲杆菌检测方法GB/T 1 4 9 2 6.4-2 0 0 1前言本标准是对GB,%T 1 4 9 2 6.4-1 9 9 4 实验动物皮肤病原真菌检验
6、方法 的修订。本标准增加了猴类毛癣菌形态描述以及转种皮肤癣菌鉴别琼脂等相关内容。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:范薇。本标准于 1 9 9 4 年 1 月首次发布。中 华 人 民 共 和 国 国 家 标准实验动物皮肤病原真菌检测方法G B/T 1 4 9 2 6.4-2 0 0 1La b o r a t o r y a n i ma l-Me t h o d f o r e x a mi n a t i o n o f pa t h o g e n i c d e r ma l f u n g i代替GB/T 1 4 9 2 6
7、.4-1 9 9 4范 围本标准规定了实验动物皮肤病原真菌的检测方法。本标 准适用于小 鼠、大鼠、豚 鼠、地 鼠、兔、犬 和猴皮 肤病原真菌的检测。2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 1 4 9 2 6.4 2-2 0 0 1 实验动物细菌学检测标本采集 G B/T 1 4 9 2 6.4 3-2 0 0 1 实验动物细菌学检测染色法、培养基和试剂3原理皮肤病原真菌在培养基上有特定的生长、形态和生理生化特征;寄生于毛发上可见明显的感染抱4主要
8、设备和材料接种刀。无菌接种罩。2 8 恒温培养箱。生物显微镜。J月.门亡内月月月q5培养荃及试荆葡萄糖蛋白陈琼脂(沙氏培养基)。皮肤癣菌鉴别琼脂(D T M),氢氧化钾二甲基亚矾液。孚 L 酸酚棉蓝染色液月.门J叹dL气口民中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 1 一 0 8-2 9批准2 0 0 2一 0 5 一 0 1实施G s/T 1 4 9 2 6.4-2 0 0 16 检测程序了操作步骤了.1采样 取皮 毛、鳞屑。了.2 直接检查 取标本置于载玻片并加氢氧化钾二甲基亚矾液一滴，盖上盖玻片，置 1 0 1 5 m i n后，轻压盖玻片，吸去周围液体，置显微镜下观察7.3 分
9、离培养 将标本分三点接种于沙氏斜面，放置 2 8 恒温箱中培养，7 1 4d观察菌落形态，并将培养物涂片镜检。7.4 涂片镜检 取载玻片并加乳酸酚棉蓝染色液一滴，用接种针(环)取培养物置染色液中。然后加盖玻片，镜检7.5鉴定7.5.1 根据菌落形态及镜检结果，参照以下皮肤病原真菌形态特征，确定菌种。可引起动物皮肤癣病的病原真菌主要有以下四种，它们的形态学特点是:7.5.1 门 石膏样毛 癣菌(T r i c h o p h y t o n m e n t a g r o p h y t e s)本菌在葡萄糖蛋白膝琼脂上 2 8 C 培养，生长迅速。根据菌落形态，大致可分为以下2种类型。羊毛状或
10、绒毛状型:白色羊毛状菌丝充满斜面，绒毛状菌丝短而整齐，整个菌落只占斜面的 1/3-1/2。培养基背面颜色为淡黄或棕黄色。镜检只见较细的，分隔菌丝和卵圆形小分生抱子，小分生抱子有时集聚成葡萄状，偶见球拍菌丝和结节菌丝，无螺旋菌丝和大分生抱子 粉末状或颗粒状型:菌落表面为粉末状，色黄、充满斜面，培养基背面为棕黄或棕红色，镜检可见多种菌丝。如螺旋菌丝、球拍菌丝、结节菌丝等。小分生抱子呈球状，常聚成葡萄状。可见棒状大分生抱子，2-8 个细胞，为(4。一6 0)P in X(5 -9)n n，外壁薄而光滑。菌种鉴定可依据菌落和镜检特征。7.5.1.2 石膏样小抱子菌(M i c r o s p o r
11、u m g y p s i u m)本菌在葡萄糖蛋白脉琼脂上，2 8 C 培养，生长快，菌落初呈白色，渐变为淡黄色至棕黄色粉末状菌落。培养基背面 呈棕色。镜检可见很多大 分生 抱子，4-6 隔,(1 2 -1 3)j,m X(4 0-v 6 0)p m大小，呈纺锤形，壁薄，粗糙有刺。菌丝较少。可见少数小分生抱子，单细 胞，(3-5)k m X(2.5 -3.5)g m，呈棍棒状、1 5G s/T 1 4 9 2 6.4-2 0 0 1亦可见球拍状菌丝、破梳状菌丝、结节状菌丝及厚壁抱子。菌种鉴定主要依据菌落形态，大分生抱子等。菌落应与石膏样毛癣菌鉴别7.5-1.3 羊毛 状小抱子菌(M i c
12、r o s p o r u m Z a n o s u m)本菌在葡萄糖蛋白豚培养基上，2 8 C培养，生长快，菌落开始为绒毛状，2 周后呈羊毛状并充满斜面，菌落中央趋向粉末状。菌落颜色由白色渐变为淡棕黄色，反面呈桔黄或红棕色。镜检可见直而有隔的菌丝体，以 及很多中央宽大，两端稍 尖的纺锤形大分生抱子，大小为(1 5 2 0)p m X(6 0-1 2 5)p m、壁厚、表面粗糙有刺，尤其是抱子的尖端部分，多隔，一般4-7隔，偶见 1 2 隔者。小分生抱子较少，单细胞，呈棍棒状，(2.5.3.5)p mX(4 -7)p m。可见 球拍状菌丝、破梳状菌丝、结节菌丝和 厚壁抱子。在米粉培养基上.室
13、温培养、菌丝较密，日久变为粉末状菌落，培养基呈棕黄色，镜检可见很多大分生抱子。菌种鉴定主要依据菌落状态及大分生抱子的形态75.1.4 猴类毛 癣菌(T r i c h o p h y t o n s i m i i)在沙氏琼脂培养基室温培养生长快。菌落表面平或稍有皱褶和隆起，粉末状，边缘不整齐，呈羽毛状。正面白色、淡黄色或粉红色，背面黄色或红棕色，中央常有紫色小点。外观与石膏样毛癣菌相似。镜检可见较多棒状大分生抱子，薄壁而光滑，约5-1 0 个分隔，每隔大小不等，间隔处收缩明显，后期大分生抱子内的个别细胞扩大，壁增厚，形成厚壁抱子，又称内生厚壁抱子。内生厚壁抱子两侧的细胞常常变空破裂。游离的厚壁抱子呈凸透镜状，常带有破裂细胞的残留物，具特征性。小分生抱子侧生或顶生，短棒状，螺旋菌丝间或存在。7.5.2 转种皮肤癣菌鉴别琼脂(D T M),D TM上四种皮肤癣菌均可使培养基由黄变红。8结果报告 凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。