1、I C S月 4 46 5.0 2 0.3 0暑昌中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B/T 1 4 9 2 6.5 0 一1 4 9 2 6.5 5-2 0 0 1实验动物微生物学检测方法(3 L a b o r a t o r y a n i ma l-Mi c r o b i o l o g i c a l e x a mi n a t i o n me t h o d s2 0 0 1 一 0 8 一 2 9发 布2 0 0 2 一 0 5 一 0 1实施中华人民共和匡国 家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 周GB/T 1 4 9 2 6.5 01 4 9 2 6.5 5
2、-2 0 0 1目录G B/T 1 4 9 2 6.5 0-2 0 0 1 实验动物酶联免疫吸附试验 1G B/T 1 4 9 2 6.5 1-2 0 0 1 实验动物免疫酶试验.5G B/T 1 4 9 2 6.5 2-2 0 0 1 实验动物免疫荧光试验.9G B/T 1 4 9 2 6.5 3-2 0 0 1 实验动物 血凝试验 二 二”二 二 二 .1 2G B/T 1 4 9 2 6.5 4-2 0 0 1 实验动物血凝抑制试验.1 5G B/T 1 4 9 2 6.5 5-2 0 0 1 实验动物免疫酶组织化学法 .1 9G s/T 1 4 9 2 6.5 5-2 0 0 1前言本
3、标准规定了免疫酶组织化学法所用试剂、器材和操作步骤等。本标准由中华人民共和国科学技术部提出并归口。本标准起草单位:中国实验动物学会。本标准主要起草人:贺争鸣。中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准实验动物免疫酶组织化学法GB/I 1 4 9 2 6.5 5-2 0 0 1La b o r a t o r y a n i ma l-I mmu n o h i s t o c h e mi s t r y(I H)范围本标准规定了免疫酶组织化学法(I H)所用试剂、器材和操作步骤等。本标准适用于实验动物病毒抗原的检测。原理 用已知的特异性抗体与标本中待测抗原反应，如待测抗原是特异性抗体的相应抗
4、原则形成抗原抗体复合物。此抗原抗体复合物仍保持其抗原活性，可与相应的第二抗体酶结合物结合，遇酶底物产生颜色反应。在普通显微镜下，根据颜色的反应判定结果。主要试剂与器材3.，试剂3.1.1 抗病毒单克隆抗体或抗血清。3.1.2 羊或兔抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔、犬、猴 I g G抗体标记辣根过氧化物酶。3.1.3 P B S(.0 1 mo l/L,p H7.6)氯化钠8.5 g 磷酸二氢钠(N a H 2 P 0,2 H 2 0)0.2 0 g 磷酸二氢钠(N a H 2 P O a 1 2 H 2 0)3.1 2 g 蒸馏水加至1 0 0 0 m L3.1.4 底物溶液 3,3 一 二胺基
5、联苯胺盐酸盐(D AB)4 0 mg P B S 1 0 0 mL 丙酮5 mL 3%过氧化氢。.1 m L3.2 器材3.2.，石蜡切片机或冰冻切片机。3.2.2 载玻片及盖玻片。3.2.3 普通显微镜。操作步骤4 门冰冻切片风干后用丙酮固定 1 0 -1 5 m i n，石蜡切片，常规脱蜡至 P B S(切片应用白胶或铬矾明胶做粘合剂，以防脱片)。4.2 去内源酶 用。.3%过氧化氢甲醇溶液或 1%盐酸酒精 3 7 C 作用 3 0 mi n a中华人民共和国国家质f监督检验检疫总局2 0 0 1 一 0 8-2 9 批准2 0 0 2-0 5-0 1 实施 2 0G B/T 1 4 9
6、2 6.5 5-2 0 0 14.64.74.84.94.1 0 胰蛋白酶消化需要时用胰蛋白酶消化处理，以便充分暴露抗原。漂洗P B S洗 3次，每次 5 m i n.封闭5%小牛血清或 1:1 0 稀释的正常马血清,3 7 C湿盒中作用 3 0 m i n,加适当稀释的已知单抗或抗血清,3 7 C 湿盒中作用 1 h或 3 0 m i n后 4 过夜。漂洗同4.4 0加适当稀释的第二抗体酶结合物，3 7 0C 湿盒作用 1 h,漂洗同4.4,底物显色新鲜配制的 D A B溶液显色 5 1 0 mi n后漂洗。衬染苏木素或甲基绿衬染细胞核或细胞质。常规脱水、透明、封片、显微镜观察。结果判定对照片本底清晰，背景无非特异着染，被检物呈黄至徐褐色着染，即可判为阳性。