1、 GB23200.112016 代替GB/T 232012008 ICS 食品安全国家标准 桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中 413 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法 National food safety standards Determination of 413 pesticides and related chemicals residues in mulberry twig,honeysuckle,barbary wolfberry fruitand lotus leaf Liqulid chromatography-mass spectrometry 2016-12-
2、18 发布 2017-06-18 实施 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB 23200.112016 I 目 次 前言 1 范围1 2 规范性引用文件1 3 原理1 4 试剂和材料1 5 仪器和设备2 6 试样制备2 7 分析步骤2 8 结果计算和表述4 9 精密度4 10 定量限和回收率 4 附录A（资料性附录）413种农药及相关化学品中英文名称、方法定量限、分组、溶剂选择和混 合标准溶液浓度表5 附录B（资料性附录）413种农药及相关化学品监测离子对碰撞气能量、源内碎裂电压和保留时 间 1 5 附录C（资料性附录）413种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图24 附 录
3、 D（资 料 性 附 录）实 验 室 内 的 相 对 标 准 偏 差 4 2 附录E（资料性附录）实验室间的相对标准偏差43 附 录 F（资 料 性 附 录）样 品 的 添 加 浓 度 及 回 收 率 的 实 验 数 据 4 4 GB 23200.112016 II 前言前言 本标准代替GB/T 23201-2008 桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱-串联质谱法。本标准与GB/T 23201-2008相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准范围中增加“其它食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 232
4、01-2008。GB 23200.112016 1 食品安全国家标准 桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中 413 种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-质谱法 1 1 范围范围 本标准规定了桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品（参见附录A和附录E）残留量液相色谱-质谱测定方法。本标准适用于桑枝、金银花、枸杞子和荷叶中413种农药及相关化学品残留量的测定，其它食品可参照执行。2 2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763
5、 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 3 原理原理 试样用乙腈匀浆提取，盐析离心，固相萃取柱净化，用乙腈-甲苯溶液(3+1)洗脱农药及相关化学品，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4 4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682中规定的一级水。4.1 4.1 试剂试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN，75-05-8）：色谱纯。4.1.2 甲苯（C7H8，108-88-3）：色谱纯。4.1.3 甲醇（CH3OH，67-56-1/170082-17-4）：色谱纯。4.1.4 环己烷（C6H12
6、，110-82-7）：色谱纯。4.1.5 异辛烷（C8H18，540-84-1）：色谱纯。4.1.6 氯化钠（NaCl，7647-14-5）：。4.1.7 无水硫酸钠（Na2SO4，7757-82-6）：650灼烧 4h，贮于干燥器中，冷却后备用。4.4.2 2 标准品标准品 农药及相关化学品标准物质：纯度95%，参见附录 A。4.4.3 3 标准溶液配制标准溶液配制 4.4.3 3.1.1 标准储备溶液标准储备溶液 分别称取适量(精确至 0.1mg)农药及相关化学品标准物于 10mL 容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇、甲苯、环己烷或异辛烷等溶剂溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录 A)。标准
7、储备溶液避光 04保存，保存期为一年。4.4.3 3.2.2 混合标准溶液混合标准溶液（混合标准溶液 A、B、C、D、E、F 和 G）按照农药及相关化学品的性质和保留时间，将 413 种农药及相关化学品分成 A、B、C、D、E、F和 G 七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对 413 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度(参见附录 A)。依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准溶液浓度及其标准储备溶液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于 100mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光 04GB 2320
8、0.112016 2 保存，保存期为一个月。4.4.3 3.3 3 基质混合标准工作溶液基质混合标准工作溶液 农药及相关化学品基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 A、B、C、D、E、F 和 G，用于做标准工作曲线。基质混合标准工作溶液应现用现配。4.4.4 4 材料材料 4.4.1 Cleanert TPH1柱：10mL2.0g，或相当者。4.4.2 微孔过滤膜(尼龙)：13mm0.2m。5 5 仪器和设备仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。5.2 分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。5.3 均质器：最大转速
9、为 24000 r/min。5.4 离心机：最大转速为 4200 r/min。5.5 旋转蒸发器。5.6 鸡心瓶：150 mL。5.7 移液器：1 mL。5.8 具塞离心管：50 mL。5.9 样品瓶：2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。5.10 氮气吹干仪。6 6 试样制备试样制备 将桑枝、金银花和荷叶三种中草药研磨成细粉，样品全部过 425m 的标准网筛，混匀，制备好的试样均分成两份，装入清洁容器内，密封后，标明标记。枸杞可直接使用。7 7 分析步骤分析步骤 7.1 7.1 提取提取 分别称取金银花、枸杞子、荷叶和桑枝试样 2g(精确至 0.01g)于 50mL 离心管中，加入 15mL 乙腈(枸
10、杞子试样需再加入 5mL 水)，15000 r/min 匀浆提取 1min，加入 2g 氯化钠，再匀浆提取 1min，4200 r/min离心 5min，取全部上清液于 150 mL 鸡心瓶中，在离心管中再加入 15mL 乙腈，重复匀浆提取 1min，4200 r/min 离心 5min，取全部上清液与之前的提取液合并，于 40水浴旋转蒸发至 1 mL2mL，待净化。7.2 7.2 净化净化 在 Cleanert TPH 柱上加入约 2cm 高无水硫酸钠，置于固定架上。加样前先用 10mL 乙腈-甲苯溶液预洗柱，当预洗液液面到达无水硫酸钠的顶部时，迅速将上述样品浓缩液移入柱中，并用鸡心瓶接收淋
11、出液。分别用 2mL 乙腈-甲苯溶液洗涤鸡心瓶两次，洗涤液也同样转入柱中，柱上连接 25mL 贮液器，用 25mL 乙腈-甲苯溶液洗脱农药及相关化学品，洗脱液于 40水浴中旋转浓缩至 1 mL2 mL，将浓缩液置于氮气吹干仪上吹干，加入 1mL 的乙腈-水溶液，混匀，0.2m 滤膜过滤，液相色谱-串联质谱测定。7.37.3 测定测定 7.3.17.3.1 液相色谱液相色谱-串联质谱条件串联质谱条件 7.3.1.1 7.3.1.1 A A、B B、C C、D D、E E、F F 组组 LCLC-MSMS-MSMS 测定条件测定条件(ESIESI 正离子源正离子源)a)色谱柱：ZORBOX SB-
12、C18，3.5m，100mm 2.1mm(内径)或相当者；Cleanert TPH 是由 Agela 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。GB 23200.112016 3 b)流动相及梯度洗脱条件见表 1；表 1 流动相及梯度洗脱条件表 步骤 总时间/min 流速/(L/min)流动相 A(0.1%甲酸水)/流动相 B(乙腈)/0 0.00 400 99.0 1.0 1 3.00 400 70.0 30.0 2 6.00 400 60.0 40.0 3 9.00 400 60.0 40.0
13、4 15.00 400 40.0 60.0 5 19.00 400 1.0 99.0 6 23.00 400 1.0 99.0 7 23.01 400 99.0 1.0 c)柱温：40；d)进样量：10L；e)离子源：ESI；f)扫描方式：正离子扫描；g)检测方式：多反应监测；h)离子喷雾电压：4000V；i)雾化气压力：0.28MPa；j)干燥气温度：350；k)干燥气流速：10L/min；l)监测离子对，碰撞能量和源内碎裂电压参见附录 B。7.3.1.2 7.3.1.2 G G 组组 LCLC-MSMS-MSMS 测定条件测定条件(ESIESI 负离子源负离子源)a)色谱柱：ZORBOX
14、SB-C18，3.5m，100mm 2.1mm(内径)或相当者；b)流动相及梯度洗脱条件见表 2；表 2 流动相及梯度洗脱条件表 步骤 总时间/min 流速/(L/min)流动相 A(5mmol/L 乙酸铵水)/流动相 B(乙腈)/0 0.00 400 99.0 1.0 1 3.00 400 70.0 30.0 2 6.00 400 60.0 40.0 3 9.00 400 60.0 40.0 4 15.00 400 40.0 60.0 5 19.00 400 1.0 99.0 6 23.00 400 1.0 99.0 7 23.01 400 99.0 1.0 c)柱温：40；d)进样量：10
15、L；e)离子源：ESI；f)扫描方式：负离子扫描；g)检测方式：多反应监测；h)离子喷雾电压：4000V；i)雾化气压力：0.28 MPa；j)干燥气温度：350；k)干燥气流速：10L/min；l)监测离子对，碰撞能量和源内碎裂电压参见附录 B。7.3.7.3.2 2 定性测定定性测定 在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除GB 23200.112016 4 背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度50，允许20偏差；相对丰度20至 50，允许25偏差；相对丰度10至20，允许30偏
16、差；相对丰度10，允许50偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。7.3.7.3.3 3 定量测定定量测定 本标准中液相色谱-串联质谱采用外标-校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线。并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。413 种农药及相关化学品多反应监测（MRM）色谱图，参见附录 C。7.7.4 4 平行试验平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验。7.7.5 5 空白试验空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。8 8 结果计算和表述结果计算和表述 液相色谱-串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式（1）计算：Xi ci V 1000（1）m 1000 式中：Xi 试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；ci 从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；V m 样品溶液所代表试样的重量，单位为克（g）。计算结果应扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9 9 精密度精密