1、 中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准 GB 5009.1902014 食品安全国家标准 食品中指示性多氯联苯含量的测定 2014-12-01 发布 2015-05-01 实施 GB 5009.1902014 I 前 言 本标准代替 GB/T 5009.1902006食品中指示性多氯联苯含量的测定和 GB/T 223312008水产品中多氯联苯残留量的测定气相色谱法。本标准与 GB/T 5009.1902006 相比，主要变化如下：修改了标准格式。GB 5009.1902014 1 食品安全国家标准 食品中指示性多氯联苯含量的测定 1 范围 本标准第一法规定了食品中多氯联苯（polyc
2、hlorinated biphenyls，PCBs）包括全球环境监测系统/食品规划中规定的指示性PCBs（PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153和PCB180）及PCB18、PCB33、PCB44、PCB70、PCB105、PCB128、PCB170、PCB187、PCB194、PCB195、PCB199和PCB206含量的测定方法，第二法规定了PCB28、PCB52、PCB101、PCB118、PCB138、PCB153和PCB180的测定方法。本标准适用于鱼类、贝类、蛋类、肉类、奶类及其制品等动物性食品和油脂类试样中指示性PCBs的测定。第一法 稳定
3、性同位素稀释的气相色谱-质谱法 2 原理 应用稳定性同位素稀释技术，在试样中加入13C12标记的PCBs作为定量标准，经过索氏提取后的试样溶液经柱色谱层析净化、分离，浓缩后加入回收内标，使用气相色谱-低分辨质谱联用仪，以四极杆质谱选择离子监测（SIM）或离子阱串联质谱多反应监测（MRM）模式进行分析，内标法定量。3 试剂和材料 3.1 试剂 3.1.1 正己烷（C6H14）：农残级。3.1.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：农残级。3.1.3 丙酮（C3H6O）：农残级。3.1.4 甲醇（CH3OH）：农残级。3.1.5 异辛烷（C8H18）：农残级。3.1.6 无水硫酸钠（Na2SO4）：优级纯
4、。将市售无水硫酸钠装入玻璃色谱柱，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为无水硫酸钠体积的两倍。淋洗后，将无水硫酸钠转移至烧瓶中，在50 下烘烤至干，然后在225 C烘烤8 h12 h，冷却后干燥器中保存。3.1.7 硫酸（H2SO4）：含量95%98%，优级纯。3.1.8 氢氧化钠（NaOH）：优级纯。3.1.9 硝酸银（AgNO3）：优级纯。GB 5009.1902014 2 3.1.10 色谱用硅胶（75m250m）：将市售硅胶装入玻璃色谱柱中，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为硅胶体积的两倍。淋洗后，将硅胶转移到烧瓶中，以铝箔盖住瓶口置于烘箱中50 烘
5、烤至干，然后升温至180 烘烤8 h12 h，冷却后装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.11 44%酸化硅胶：称取活化好的硅胶100 g，逐滴加入78.6 g 硫酸，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.12 33%碱性硅胶：称取活化好的硅胶100 g，逐滴加入49.2 g 1 mol/L的氢氧化钠溶液，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.13 10%硝酸银硅胶：将5.6 g硝酸银溶解在21.5 mL去离子水中，逐滴加入50 g活化硅胶中，振摇至无块状物后，装入棕色磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.14 碱性氧化铝：色谱层析用碱性氧化铝，660
6、烘烤6 h后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.2 标准溶液 3.2.1 时间窗口确定标准溶液：由各氯取代数的PCBs在DB-5ms色谱柱上第一个出峰和最后一个出峰的同族化合物组成，见附录A中表A.1。3.2.2 定量内标标准溶液：见附录A中表A.2。3.2.3 回收率内标标准溶液：见附录A中表A.3。3.2.4 校正标准溶液：见附录A中表A.4。3.2.5 精密度和准确度实验标准溶液：见附录A中表A.5。4 仪器和设备 4.1 气相色谱-四极杆质谱联用仪(GC-MS)或气相色谱-离子阱串联质谱联用仪(GC-MS/MS)。4.2 色谱柱：DB-5ms柱，30 m0.25 mm0.25 m，或
7、等效色谱柱。4.3 组织匀浆器。4.4 绞肉机。4.5 旋转蒸发仪。4.6 氮气浓缩器。4.7 超声波清洗器。4.8 振荡器。4.9 分析天平：感量为0.1 g。4.10 玻璃仪器的准备：所有需重复使用的玻璃器皿应在使用后尽快认真清洗，清洗过程如下：a）用该器皿最后接触的溶剂洗涤；b）依次用正己烷和丙酮洗涤；c）用含碱性洗涤剂的热水清洗；d）依次用热水和去离子水冲洗；e）依次用丙酮、正己烷和二氯甲烷洗涤。采用超声波清洗设备，加入碱性洗涤剂的热水有很好的清洗效果。如果使用刷子清洗，需特别注意不要划损玻璃器皿的内表面。5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 预处理 GB 5009.190201
8、4 3 5.1.1.1 用避光材料如铝箔、棕色玻璃瓶等包装现场采集的试样，并放入小型冷冻箱中运输到实验室，-10 以下低温冰箱保存。5.1.1.2 固体试样如鱼、肉等可使用冷冻干燥或使用无水硫酸钠干燥并充分混匀。油脂类可直接溶于正己烷中进行净化处理。5.1.2 提取 5.1.2.1 提取前，将一空纤维素或玻璃纤维提取套筒装入索氏提取器中，以正己烷二氯甲烷（5050）为提取溶剂，预提取8 h后取出晾干。5.1.2.2 将预处理试样5.0 g10.0 g 装入上述5.1.2.1处理的提取套筒中，加入13C12标记的定量内标（3.2.2），用玻璃棉盖住试样，平衡30 min后装入索氏提取器，以适量正
9、己烷二氯甲烷（5050）为提取溶剂，提取18 h24 h，回流速度控制在3次/h4次/h。5.1.2.3 提取完成后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计则需要测定试样的脂肪含量。5.1.2.4 脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中残渣。5.1.3 净化 5.1.3.1 酸性硅胶柱净化 净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依次填入4 g活化硅胶、10 g酸化硅胶、2 g活化硅胶、4 g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。然后用100 mL正己烷预淋洗。净
10、化：将浓缩的提取液全部转移至柱上，用约5 mL正己烷冲洗茄形瓶3次4次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入180 mL正己烷洗脱，洗脱液浓缩至约1 mL。如果酸化硅胶层全部变色，表明试样中脂肪量超过了柱子的负载极限。洗脱液浓缩后，制备一根新的酸性硅胶净化柱，重复上述操作，直至硫酸硅胶层不再全部变色。5.1.3.2 复合硅胶柱净化 净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依填入1.5 g硝酸银硅胶、1 g活化硅胶、2 g碱性硅胶、1 g活化硅胶、4 g酸化硅胶、2 g活化硅胶、2 g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。然后用30 mL正己烷二氯甲烷（973）预淋洗。净化：将经过
11、5.1.3.1净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5 mL正己烷冲洗茄形瓶3 次4 次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入50 mL正己烷二氯甲烷（973）洗脱，洗脱液浓缩至约1 mL。5.1.3.3 碱性氧化铝柱净化 净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依填入2.5 g经过烘烤的碱性氧化铝、2 g无水硫酸钠（见附录D中的图D.1）。15 mL正己烷预淋洗。净化：将经过5.1.3.2净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5 mL正己烷冲洗茄形瓶3次4 次，洗液转移至柱上。当液面降至无水硫酸钠层时加入30 mL正己烷（2 15 mL）洗脱柱子，待液面降至无水硫酸钠层时加入25
12、 mL二氯甲烷+正己烷（5+95）洗脱。洗脱液浓缩至近干。5.1.4 上机分析前的处理 GB 5009.1902014 4 将净化后的试样溶液转移至进样小管中，在氮气流下浓缩，用少量正己烷洗涤茄形瓶3 次4 次，洗涤液也转移至进样内插管中，氮气浓缩至约50 L，加入适量回收率内标（3.2.3），然后封盖待上机分析。5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱条件 5.2.1.1 色谱柱：采用30 m的DB-5ms（或相当于DB-5ms的其他类型）石英毛细管柱进行色谱分离，膜厚为0.25 m，内径为0.25 mm。5.2.1.2 采用不分流方式进样时，进样口温度为300。5.2.1.3 色谱柱升温程序
13、如下：初始温度为100，保持2 min；15/min升温至180；3/min升温至240；10/min升温至285 并保持10min。5.2.1.4 使用高纯氦气（纯度99.999%）作为载气。5.2.2 质谱参数 5.2.2.1 四极杆质谱仪 电离模式：电子轰击源（EI），能量为70 eV。离子检测方式：选择离子监测（SIM），检测PCBs时选择的特征离子为分子离子，见附录B中的表B.1。离子源温度为250，传输线温度为280，溶剂延迟为10 min。5.2.2.2 离子阱质谱仪 电离模式：电子轰击源（EI），能量为70 eV。离子检测方式：多反应监测（MRM），检测PCBs时选择的母离子为
14、分子离子(M+2或M+4)，子离子为分子离子丢掉两个氯原子后形成的碎片离子（M-2Cl），见附录B中的表B.2。离子阱温度为220，传输线温度280，歧盒（manifold）温度40。5.3 灵敏度检查 进样1 L（20 pg）CS1溶液，检查GC-MS灵敏度。要求3至7氯取代的各化合物检测离子的信噪比应达到3以上；否则，应重新进行仪器调谐，直至符合规定。5.4 PCBs的定性和定量 5.4.1 PCBs色谱峰的确认要求:所检测的色谱峰信噪比应在3以上(参见附录C中的图C.1或图C.3)。5.4.2 监测的两个特征离子的丰度比应在理论范围之内，分别见附录B中的表B.1和表B.2。5.4.3 检
15、查色谱峰对应的质谱图(参见附录C中的图C.2或图C.4)，当浓度足够大时，应存在丢掉两个氯原子的碎片离子（M-70），见附录B中的表B.1。5.4.4 检查色谱峰对应的质谱图(参见附录C中的图C.2或图C.4)，对于三氯联苯至七氯联苯色谱峰中，不能存在分子离子加两个氯原子的碎片离子（M+70），见附录B中的表B.1。5.4.5 被确认的PCBs保留时间应处在通过分析窗口确定标准溶液预先确定的时间窗口内。时间窗口确定标准溶液由各氯取代数的PCBs在DB-5ms色谱柱上第一个出峰和最后一个出峰的同族化合物组成。使用确定的色谱条件、采用全扫描质谱采集模式对窗口确定标准溶液进行分析（1 L），根据各族
16、PCBs所在的保留时间段确定时间窗口。由于在DB-5ms色谱柱上存在三族PCBs的保留时间段重叠的现象，因GB 5009.1902014 5 此在单一时间窗口内需要对不同族PCBs的特征离子进行检测。为保证分析的选择性和灵敏度要求，在确定时间窗口时应使一个窗口中检测的特征离子尽可能少。5.5 分析结果的表述 5.5.1 本标准中对于PCB28、PCB52、PCB118、PCB153、PCB180、PCB206和PCB209使用同位素稀释技术进行定量，对其他目标化合物采用内标法定量；对于定量内标的回收率计算使用内标法。本标准所测定的20种目标化合物包括了PCBs工业产品中的大部分种类。从三氯联苯到八氯联苯每族三个化合物，九氯联苯和十氯联苯各一个，见附录A中的表A.4。每族使用一个13C12标记化合物作为定量内标，见附录A中表A.2。计算定量内标回收率的回收内标为两个，见附录A中的表A.3。在计算定量内标的回收率时，13C12-PCB101作为13C12-PCB28、13C12-PCB52、13C12-1PCB18和13C12-PCB153的回收率内标，13C12-PCB194为13C12