1、GB/T 1 9 4 2 6-2 0 0 3前言 本标准修改采用加拿大标准P MR-0 0 2-V 1.1(蜂蜜、果汁和果酒中农药残留测定(固相萃取净化和G C-MS D HP L C荧光检测)，修改的主要内容是:农药品种有所调整;依据不同化合物碎片离子的情况，对定量和定性离子进行了重新选定;氨基甲酸醋类农药的检测，用液相色谱一 串联质谱法代替了液相色谱荧光检测法。本标准的附录 A,附录 B、附录C、附录D,附录E、附录 F、附录G和附录H均为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本标准由中华全国供销合作总社归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本
2、标准主要起草人:庞国芳、范春林、刘永明、曹彦忠、张进杰、付宝莲、贾光群、李学民、吴艳萍。本标准系首次发布的国家标准。GB/T 1 9 4 2 6-2 0 0 3 蜂蜜、果汁和果酒中 3 0 4 种农药 多残留测定方法气相色谱一 质谱和液相色谱一 串联质谱法范 围 本标准规定了蜂蜜、果汁和果酒中3 0 4种农药(参见附录 A)残留量气相色谱一 质谱和液相色谱一 串联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜、果汁和果酒中3 0 4种农药残留量的测定。本 标准的方法检出限:氨基甲 酸醋 类农药为0.0 0 1 m g/吨-0.0 2 0 m g/k g;其他 农药为。.0 0 4 m g/k g-0.3 0
3、0 m g/k g(参见附 录A),2规范性 引用 文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B/T 6 3 7 9 测试方法的精密度通过实验室间试验确定标准测试方法的重复性和再现性(GB/T6 3 7 9-1 9 8 6,n e q I S O 5 7 2 5:1 9 8 1)G B/T 6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6 6 8 2-1 9 9
4、2,n e q I S O 3 6 9 6:1 9 8 7)3原理 试样用二氯甲烷提取，经串联 E n v i-C a r b 0和氨基 S e p-P a k 2 柱净化，用乙睛十甲苯(3+1)洗脱农药，氨基甲酸醋类农药用液相色谱一 串联质谱仪检测，其他农药用气相色谱一 质谱仪检测。4 试荆和材料 除另有说明外，水为GB/T 6 6 8 2 规定的一级水。4.1 乙腊:色谱纯。4.2 丙酮:色谱纯。4.3 二抓甲烷:色谱纯。4.4 无水硫酸钠:分析纯。用前在 6 5 0 灼烧 4 h,贮于干燥器中，冷却后备用。4.5 甲苯:优级纯。4.6 正己烷:色谱纯。4.7 甲醇:色谱纯4.8 E n
5、v i-C a r b 活性炭柱0.5 g,6 m L 或相当者。4.9 氨基 S e p-P a k固相萃取柱或相当者。E n v i-C a r b柱是S UP E L C O公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者 并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果 则可使用这些等效产品。氨基 S e p-P a k柱是 Wa t e、公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品GB/T 1 9 4 2 6-2 0 0 34.1 0 农药标准物质:纯度)9 5 0/n e4.
6、1 1 农药标准溶液4.1 1.1 标准储备溶液 分别称取 2 0 mg-4 0 mg 精确至 0.1 m g)氦基甲酸醋类农药各标准物分别于 1 0 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度 分别称取 5 mg-1 0 m g(精确至0.1 m g)其他农药各标准物分别于 1 0 m L容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲苯、甲苯十丙酮混合液、二氯甲烷或甲醇，溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录 A).4.1 1.2 混合标准溶液(混合标准溶液 A,B,C,D,E)按照农药的保留时间，将 3 0 4 种农药分成 A,B,C,D,E五个组，并根据每种农药在仪器上的响应灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标
7、准对 3 0 4种农药的分组及其混合标准溶液浓度参见附录 A.依据每种农药的分组号、混合标准溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药标准储备溶液于 1 0 0 mL容量瓶中，氨基甲酸醋类农药用甲醇，其他农药用甲苯定容至刻度。混合标准溶液避光 4 保存，可使用一个月。4.1 1.3 内标溶液 准确称取 3.5 mg环氧七氯于 1 0 0 ml，容量瓶中，用甲苯定容至刻度。4.1 1.4 基质混合标准工作溶液 氨基甲酸醋类农药基质混合标准工作溶液是用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液 D和 E，用于做标准工作曲线 其他农药基质混合标准工作溶液是将 2 0川 内标溶液(4.1
8、1.3)和5 0 u L的混合标准溶液分别加到0.5 m工的样品空白基质提取液中，混匀，配成基质混合标准工作溶液 A,B和 C,基质混合标准工作溶液应现用现配。5仪器5.1 气相色谱一 质谱仪:配有电子轰击源(E D,5.2 液相色谱一 串联质谱仪:配有电喷雾离子源5.3 分析天平:感量0.1 mg 和 0.0 1 g各一台。5.4 旋转蒸发器5.5 振荡水浴。5.6 鸡心瓶:2 0 0 mL o5.7 移液器:1 m工 J。5.8 样品瓶:2 m工，带聚四氟乙烯旋盖5.9 具塞三角瓶;2 5 0 mL,5.1 0 分液漏斗:2 5 0 m L.5.1 1 筒形漏斗。6 试样制备与保存6.1
9、试样的制备 蜂蜜样品，对无结晶的实验室样品 将其搅拌均匀对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过6 0 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温分出。.5 k g作为试样，置于样品瓶中，密封，并标明标记。果汁、果酒样品，将取得的全部原始样品倒人洁净的搪瓷混样桶内，充分搅拌棍匀，再将混匀样品分装出两份(每份 5 0 0 m L),密封，作为试样，标明标记。GB/T 1 9 4 2 6-2 0 0 36.2试样的保存 将试样于常温下保存。7测定 步骤7.1 提取 称取 1 5 g试样(精确至。.0 1 g)于2 5 0 ml具塞三角瓶中，加人 3 0 mL水，于4 0 振荡水浴上，
10、振荡溶解 1 5 mi n。加人 1 0 mL丙酮，然后将瓶中内容物移人 2 5 0 mL分液漏斗中。用 4 0 mL二氯甲烷分数次洗涤三角瓶，并将洗液倒人分液漏斗中，小心排气，用力振摇八次，静置分层，将下层有机相通过装有无水硫酸钠的筒形漏斗，收集于2 0 0 mL鸡心瓶中。再先后加人 5 mL丙酮和4 0 mL二氯甲烷于分液漏斗中，振摇 1 min，静置、分层后收集。如此重复提取两次，合并提取液，将提取液于 4 0 水浴旋转蒸发至约 1 mL，待净化。7.2净化 在E n v i-C a r b柱中加人约 2 c m高无水硫酸钠，将该柱连接在氨基 S e p-P a k 柱顶部，并将串联柱放
11、人下接鸡心瓶的固定架上。加样前先用 4 mL乙睛+甲苯(3+1)预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时，迅速将样品提取液转移至净化柱上，再用 2 mL乙睛+甲苯(3+1)洗涤样液瓶三次，并将洗液移入柱中。在串联柱上加上 5 0 mL贮液器，用2 5 m L乙睛+甲苯(3+1)洗脱农药，合并于鸡心瓶中，并在 4 0 0 C水浴中旋转浓缩至约。.5 mL。对氨基甲酸醋类农药检测，加人 5 ml甲醇进行溶剂交换两次，最后定容 1 mL,混匀，用于液相色谱一 串联质谱测定;对于其他农药检测，加人 2 5 m l正己烷进行溶剂交换两次，最后使样液体积约为1 mL，加人 4 0川 内标溶液，混匀，用于气相色谱一
12、 质谱测定。7.3测定7.3.1 气相色谱一 质谱法7.3.1.1 条件 a)色谱柱:D B-1 7 0 1(3 0 m X 0.2 5 m mX 0.2 5 p m)石英毛细管柱或相当 者;b)色谱柱温度:4 0 保持 I mi n，然后以 3 0 C/mi n程序升温至 1 3 0 0C，再以 5 0C/mi n升温至 2 5 00C，再以 1 0 0 C/mi n升温至 3 0 0 0 C，保持 5 mi n;c)载气:氦 气，纯度)9 9.9 9 9，流速:1.2 m L/m i n;d)进样口温度:2 9 0 0C e)进样量:1 P I;f)进样方式:无分流进样，1.5 m i n
13、后开阀;9)电子轰击源:7 0 e V;h)离 子源温度:2 3 0 0 C;i)GC-MS接口温度:2 8 0 C;J)选择离子监测:2 8 2种农药根据保留时间分为 A,B,C三组，每种化合物分别选择一个定量离 子，2 个3 个定性离子。每组所有需要检测的离子按照出峰顺序，分时段分别检测。每种化 合物的保留时间、定量离子、定性离子及定量离子与定性离子的比值，参见附录 B 每组检测 离子的开始时间和住留时间参见附录C.7,3.1.2定性 测定 样品提取液按照气相色谱一 质谱测定条件分别测定A,B,C 三组，其中A组包含9 5 种化合物，B组包含 1 0 1种化合物，C组包含 8 6种化合物。
14、进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准样品的离子比相一致，则可判断样品中存在这种农药化合物。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式(有足够灵敏度)或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确证G B/T 1 9 4 2 6-2 0 0 37.3.1.3 定量测定 本方法采用内标法单离子定量测定。内标物为环氧七抓。为减少基质的影响，定量用标准应采用基质混合标准工作溶液。标准溶液的浓度应与待测化合物的浓度相近。本方法的A,B,C三组标准物质在蜂蜜基质中选择离子监测GC-MS图参见附录D,
15、7.3.2 液相色谱一 串联质谱法7.3.2.1 条件 a)色谱柱:I n e r t s i l C s-3,5 K m 1 5 0 mm X2.1 mm或相当者;b)流动相及流速见表 1:表 1 流动相及流谏 洗提步 姗总时间/m i n流速/(p L/min)水/(%)乙猜/(%)00.0 02 0 08 0.02 0.011 8.0 02 0 04 0.06 0.022 5.0 02 0 02 0.08 0.032 5.0 12 0 08 0.02 0.043 0.0 02 0 08 0.02 0.0 c)柱温;3 0 0C;d)进样量:4 0 E.L;e)扫描方式:正离子扫描;f)检
16、测方式:多反应监测;9)电喷雾电压:5 5 0 0 V;h)雾化气压力:0.0 7 6 MP a;i)气帘气压力:0.0 6 9 MP a;7)辅助气流速:6 L/mi n;k)离子源温度:4 5 0 C;D监测离子对，碰撞气能量和去簇电压参见附录E,7.3.2.2 定性测定 样品提取液按照液相色谱一 串联质谱测定条件分别进行测定，进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与基质标准中某种氨基甲酸醋类农药相一致，并且所选择的三对离子对及丰度比相一致.则可判定为样品中存在这种农药残留。7.3.2.3 定量测定 本方法中液相色谱一 串联质谱采用外标一 校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，需用空白样液来配制所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质标准工作溶液分别进样来绘制标准曲线。并且保证所测样品中氨基甲酸酷类的响应值均在仪器的线性范围内。本方法对测定的2 2 种氨基甲酸醋类农药标准物质总离子流图参见附录F o7.4 平行试验 按以上步骤对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。结果计算8.1 气相色谱一 质谱测定结果可由计算机按内标法自动计算