1、GB/T 1 8 9 3 2.1 7-2 0 0 3月四吕 G B/T 1 8 9 3 2的本部分修改采用加拿大标准AC C-0 5 6-V 2.0(蜂蜜中磺胺残留量测定方法高效液相色谱一 质谱测定法，修改的主要内容是:测定品种有所调整;增加了苯磺酸型阳离子交换柱和 O a s i s H L B柱净化步骤;使用的液相色谱柱和流动相不同;单四极杆质谱检测器换成串联四极杆质谱检测器。本部分的附录A和附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位:中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本部分主要起草人:庞国芳、曹彦忠、张进杰、
2、贾光群、范春林、李学民、刘永明、石玉秋。本部分系首次发布的国家标准。G B/T 1 8 9 3 2.1 7-2 0 0 3蜂蜜中 1 6 种磺胺残留量的测定方法 液相色谱一 串联质谱法范 围 G B/T 1 8 9 3 2的本部分规定了蜂蜜中 1 6 种磺胺残留量液相色谱一 串联质谱测定方法。本部分适用于蜂蜜中 1 6 种磺胺残留量的测定。本部分的方法检出限:磺胺甲唾=哩为 1.0拜 9/k g;磺胺醋酞、磺胺喀pj、磺胺毗rp+f.磺胺二甲异R,哇、磺胺甲基啼吮、磺胺氯哒嚓、磺胺一 6 一 甲氧啼吮、磺胺邻二甲氧啼吮、磺胺甲基异嗯哇为 2.0 p g/k g;磺胺唾哇、磺胺甲氧哒嚼、磺胺间二
3、甲氧哦陡为4.0 p g/k g;磺胺甲氧嗜陡、磺胺二甲嗜吮为 8.0 p g/k g;磺胺苯毗哇为1 2.0 p g/k g o2规范性引用文件 下列文件中的条款通过G B/T 1 8 9 3 2 的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。G B/T 6 3 7 9 测试方法的精密度通过实验室间实验确定标准测试方法的重复性和再现性(;B/T 6 3 7 9-1 9 8 6,n e q I S O 5
4、7 2 5:1 9 8 1)GB/T 6 6 8 2 分 析实验室用水规格和试骑方法(GB/T 6 6 8 2-1 9 9 2,n e a I S O 3 6 9 6.1 9 8 7)3原理 蜂蜜中 磺胺类药物残留 用磷酸溶液(p H-2)提取，过滤后，经阳离子交换柱和()a s i s H L B 或相当的固相萃取柱净化，用甲醇洗脱并蒸干，残渣用乙睛+乙酸钱溶液(0.1 mo t/L)溶解。样品溶液供液相色谱一 串联质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 G B/T 6 6 8 2 规定的一级水4.1 甲醇:色谱纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 磷酸:优级
5、纯。4.4 庚烷磺酸钠(C 7 H,S O,N a H B O):色谱纯。4.5 乙酸钱4.6 磷酸二氢钾:优级纯。4.7 磷酸氢二钾:优级纯。4.8 磷酸溶液:p H-2.1 0 0 0 m L水中加人 1 mL磷酸(4.3)，在 p H计上再滴加磷酸以调节溶液p H=2,4.9 磷酸盐缓冲溶液:0.2 mo l/L,p H=8。分别称取 1.0 5 g磷酸二氢钾(4.6)和 3 3.4 6 g 磷酸氢二钾(4.7)，用水溶解，定容至 1 0 0 0 mL e4.1 0 庚烷磺酸钠溶液:0.5 mo l/L。称取 1 1 R 庚烷磺酸钠(4.4)，用水溶解，定容至1 0 0 m1G B/T
6、1 8 9 3 2.1 7-2 0 0 34.1 1 阳离子交换柱:苯磺酸型,5 0 0 mg,3 mL。用前分别用 5 m L甲醇和 1 0 mL水处理。保持柱体湿润。4.1 2 O a s is H L B柱或相当者:6 0 m g,3 m L。用前分别用3 m L甲 醇和6 m L 水处理。保持柱体湿润。4.1 3 磺胺醋酞、磺胺甲噬二哇、磺胺二甲异嗯哇、磺胺氛哒嚓、磺胺啼陡、磺胺甲基异蟋哇、磺胺唾哇、磺胺一 6 一 甲氧R 咤.磺胺甲基啥吮、磺胺邻二甲氧晦吮、磺胺毗吮.磺胺对甲氧咯吮.磺胺甲氧哒嗓、磺胺二甲嗜吮、磺胺苯毗哇、磺胺间二甲氧啥吮标准物质:纯度)9 9 0 0,4.1 4 1
7、 6种磺胺标准储备溶液:0.1 mg/mL。准确称取适量的每种磺胺标准物质，用 甲醇配成。.1 m g/m L 的标准储备溶液，该溶液在4 保存可使用两个月。4.巧磺胺混合标准工作溶液:根据每种磺胺的灵敏度和仪器线性范围，用空白样品提取液配成不同浓度(n g/mL)的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液在 4 保存，可使用一周。5仪器5.1 液相色谱一 串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2 固相萃取真空装置。5，3 旋转蒸发器5.4 液体混匀器。5.5 分析天平:感量 0.1 m g和0.0 1 g 各一台。5.6 真空泵5.7 移液器:1 m L,2 ml。5.8 鸡心瓶:1 5 0 mL,5
8、.9 样品瓶:2 mL，带聚四氟乙烯旋盖。5.1 0 玻璃贮液器:5 0 m L,5.1 1 p H计:测量精度士。.0 2,6 试样制备与保存6.1 试样的制备 对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 6 0 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出。.5k g 作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。3.2 试样的保存 将试样于常温下保存。7 测定步骤7.1 提取 称取 5 g试样，精确至。.0 1 g。置于1 5 0 mL三角瓶中，加人 2 5 mL磷酸溶液(4.8)，于液体混匀器上快速混匀 1 mi n，使试样完全溶
9、解。7.2净化 将塞有玻璃棉塞的玻璃贮液器连到苯磺酸型阳离子交换柱(4.1 1)上，把样液(7.”倒人玻璃贮液器中，在减压情况下使样液以小于等于 3 mL/m i n的流速通过苯磺酸型阳离子交换柱，待样液完全流出后，分别用 5 ml.磷酸溶液和 5 m L水洗柱，弃去全部流出液。最后用 4 0 mL磷酸盐缓冲溶液(4.9)洗脱，收集洗脱液于 1 0 0 m工 _ 平底烧瓶中。在洗脱液中加人 1.5 ML庚烷磺酸钠溶液(4.1 0)，然后用磷酸(4.3)调至 p H=6 e 按上述方法将调好 p H 的洗脱液过 O a s i s HL B或相当的固相萃取柱(4.1 2),调节流速小于等于GB/
10、T 1 8 9 3 2.1 7-2 0 0 33 mL/min，待洗脱液完全流出后，再用 3 mL水洗柱，弃去全部流出液。在 6 5 k P a负压下，减压抽干5 mi n,最后用 1 0 mL甲醇(4.1)洗脱，洗脱液收集于1 5 0 mL鸡心瓶中用旋转蒸发器于4 5 水浴中减压蒸发至干。准确加人 1.0 mL流动相溶解残渣，供液相色谱一 串联质谱仪测定。7.3 色漪测定7.3.1 液相色谱条件 a)色谱柱:L i c h r o s p h e r.1 0 0 R P-1 8 5 p m 2 5 0 m mX 4.6 m m(i.d)或相当者;b)流动相:乙睛+乙酸按溶液(0.0 1 m
11、o l/L)(1 2+8 8);c)流速:0.8 mL/m i n;d)柱温:3 5 0C;e)进样量:4 0 p L;f)分流比:1 1 3,7.3.2 质谱条件 a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;C检测方式:多反应检测;d)电喷雾电压:5 5 0 0 V;e)雾化气压力:0.0 7 6 M P a;f)气帘气压力:0.0 6 9 MP a;9)辅助气流速:6 L/mi n;h)离子源温度:3 5 0,c;i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压，见表 1.表 1 1 6种磺胺的定性离子对、定f离子对、碰撞气能f和去簇电压名 称定性离子对/(m/a)定量离子对/(m
12、/z)碰撞气能量/V去簇电压/V磺肢醋酸2 1 5/1 5 62 1 5/1 0 82 1 5/1 5 6;:磺胺甲唾二哇2 7 1/1 5 62 7 1/1 0 72 7 1/1 5 6:磺胺二甲异u,哇2 6 8/1 5 62 6 8/1 1 32 6 8/1 5 6:磺 胺 抓 哒 嗓2 8 5 门 5 62 8 5/1 0 82 8 5/1 5 6:磺胺呛吮2 5 1/1 5 62 5 1/1 8 52 5 1/1 5 6:一:磺胺甲基异U s 哇2 5 4/1 5 62 5 4/1 4 72 5 4/1 5 6:磺 胺 唆 哇2 5 6/1 5 62 5 6/1 0 7 2 5 6/
13、1 5 6:磺肢 6 一 甲氧啥吮2 8 1/1 5 62 8 1/2 1 52 8 1/1 5 62 52 5:GB/T 1 8 9 3 2.1 7-2 0 0 3表 1(续)名称定性离子对/(m/z)定量离子对/(ml z)碰撞气能量/V去簇电压/V磺胺甲基 1 PIT2 6 5/1 5 62 6 5/1 7 22 6 5/1 5 6:磺胺邻二甲氧峡吮3 1 1/1 5 63 1 1/1 0 83 1 1!1 5 6:磺 胺 毗 呢2 5 0/1 5 62 5 0/1 8 42 5 0/1 5 6:磺胺对甲氧嗯吮2 8 1 八 5 62 8 1/2 1 52 8 1/1 5 6:磺胺甲氧哒
14、臻2 8 1/1 5 62 8 1/2 1 52 8 1/1 5 6:一磺胺_甲it吮 一2 7 9/2 0 41 2 7 9/15 6一一:磺胺苯毗吐3 1 5/5 63 巧 厂 1 6 031 5/1 5 6:磺胺间二甲氧嗜 PO E3 1 1%1 5 63 1 1/2 1 83 1 1/1 5 6:7.3.3液相色谙一 串联质语测足 用混合标准工作溶液(4.1 5)分别进样，以峰面积为纵坐标，T作溶液浓度(n g/mL)为横坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中 1 6种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内在土述色谱条件和质谱条件下，1 6 种磺胺的参考保留时
15、间见表 L 1 6种磺胺的标准总离子流图参见附录 A中的图 A.1、图A.2 表 2 1 6 种磺胺参考保留时间 !保 留 时 间/m in 药 物 名称保留时间 min磺 胺，、，_2.6 一磺胺甲基喀陡9.9 3 磺 胺 甲 唆 三 哩磺 胺 二 甲 异 P:F W 4 磺 胺 啼 吃 磺胺氯哒唉磺 胺 甲 基 异 P 1 挫一-一1 魂 5 41 _l磺胺邻二甲氧嗜陡1 1.2 9一4.9 1仁 _ _ _ _1 _ _ _ _5.2 0磺胺P 比 咙11.6 2磺肢对甲氧呛 PIT1 2.6 6厂 一 一一6.5 4一磺胺甲氧哒嗓1 7.2 88.4 1磺胺二甲嚓咙1 7.9 5磺 胺
16、 唾 哇一 9.1 3l磺胺苯毗哇2 2.2 9Ba r(-6 甲 _e V,磺胺间二甲氧at,PIT2 8.9 77.4 平行试验 按以 上 步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空 白试验 除不称取样品外，均按上述步骤进行CB/T1 8 9 3 2.1 7 一2 0 0 38结果计算试样中每种磺胺残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计 一 算:嘿 (1)v.?X式 中:X 一一 试样中被测组分残留量.单位为微克每千克(阴/k g);一 一 从标准工作曲 线得到的被测 组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng厂 m 工);V 试样溶液定容体积，单位为毫升(ml _);m试样溶液所代表试样的质量，单位为克(9)注 计算结果应扣除空白值9精密度 本部分的精密度数据是按照G l 夕T6 3 7 9的规定确定的，其重复性和再现性的值是以蚝环的可信度来计算。9.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(厂)，蜂蜜中 16 种磺胺含量范围及重复性方程见表 3。如果差值超过重复性限(，一)，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2再现性 在再现性条件下，获