1、GB/T5009.159-2003引言现行国家标准GB/T12392一1990蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法（荧光法和2,4二硝基苯肼法)测定的是氧化脱氢型抗坏血酸，不能测定其主要成分还原型抗坏血酸，而且局限于果蔬类试样，操作非常繁琐：对营养强化食品、蛋白食品等试样的测定更不适应。为此研制了测定食品中抗坏血酸的标准检验方法。该法具有灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点。适用于各类食品中抗坏血酸的测定。330GB/T5009.159-2003食品中还原型抗坏血酸的测定1范围本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。本标准适用于各类食品中还原型抗坏血酸的测定。本标准不适用于
2、脱氢型抗坏血酸的测定。2原理在乙酸溶液中，抗坏血酸与固蓝盐B反应生成黄色的草酰肼2羟基丁酰内酯衍生物。在最大吸收波长420nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。3试剂3.1乙酸溶液(2mol/L):吸取11.6mL冰乙酸，加水稀释至100mL。3.2乙酸溶液(0.5mol/L):吸取2.9mL冰乙酸，加水稀释至100mL。3.3乙二胺四乙酸二钠溶液(0.25mol/L):称取9.3g乙二胺四乙酸二钠CH14 N2 Og Na22H,O于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀释至100mL。3.4蛋白沉淀剂3.4.1乙酸锌溶液(220g/L):称取22.0g乙酸锌Z(CH,COO)22H2O,加3mL
3、冰乙酸溶于水，并稀释至100mI。3.4.2亚铁氰化钾溶液(106g/1):称取10.6g亚铁氰化钾K,Fe(CN)63H,O,加水溶解至100mL.3.5显色剂：固蓝盐B(Fast Blue Salt B)溶液(2g/L):准确称取0.2g固蓝盐B,加水溶解于100mL棕色容量瓶中，并稀释至刻度（该溶液在室温下贮存可稳定3d以上）。3.6抗坏血酸标准储备溶液(2.0g/L):精密称取0.2000g抗坏血酸，加20mL乙酸溶液(2mol/L)溶解后移人100mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于2.0mg抗坏血酸(10下冰箱内贮存在2d内稳定)。3.7抗坏血酸标准使用溶液(0.1g/L):用移液管精密吸取5.0mL抗坏血酸标准储备溶液(2.0g/L)于100mL棕色容量瓶内，加5mL乙酸溶液(2mol/1),用水稀释至刻度，混匀。此溶液每亮升相当于100g抗坏血酸（临用时配制）。4仪器4.1分光光度计。4.2捣碎机。4.3离心沉淀机。4.410mL具塞玻璃比色管。5分析步骤5.1试样溶液的制备5.1.1非蛋白性食品5.1.1.1液体试样：抗坏血酸含量在0.2g/L以下的试样，混匀后可直接取样测定：抗坏血酸含量在331
