1、中华人民共和国国家标准UDC 6 3 4水果、蔬菜维生素C含量测定法8 8 55 4 3GB 61 8 5 一.6(2,6 一 二氛 靛酚滴定法)D e t e r m i n a t i o n o f v i t a m i n C I n v e g e t a b l e s a n d f r u i t s (2.6-d i c h l o r o-i n d o p h e n o l t i t r a t i o n me t h o d)1 适用范围 本标准适用于果品、蔬菜及其加工制品中还原型 抗坏血酸的测定(不含二价铁、二价锡、一价铜、二氧化硫、亚硫酸盐或硫代硫酸盐)，不
2、适用于深色样品。2 测定原理 染料2,6 一 二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液，对含维生素C 的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当 到达 滴定终点 时，多 余的染 料在酸 性介质中 则表现为 浅 红色，由染料用量计算样品中还 原型抗坏血酸的含量。3 仪器设备:一:高速组 织捣碎机:8 0 0 0 一 1 2 0 0 0 r/m i n e分析天平。滴定管:2 5 m l、1 O m i o容量 瓶:1 0 0 m l o锥形瓶:1
3、0 0 m l、5 0 m l。吸管:1 0 m 1、5.1、2 M I、I M I。烧杯:2 5 0 m l、5 0 m t o漏 斗。4 试剂(凡未加说明者均为分析纯)4.1 浸提剂 4.1.1 偏磷酸:2%溶液(W/V)*4.1.2 草酸:2%溶液(W/V)。4.2 抗坏血酸标准溶液(1 m g/m l):称取1 0 0 m g(准确至0.l m g)抗坏血酸*，溶于浸提剂中并稀至1 0 0 m l。现配现用。4.3 2.6 一 二氯靛酚(2,6 一二 氯靛 酚A 5 I 噪酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠5 2 m g 溶解在2 0 0 m l 热蒸馏水。偏磷酸不稳定，切勿加热。一 般抗坏血
4、酸纯度为9 9.5%以上，可不标定。如试剂发黄，则弃去不用。若要检查其纯度，可按附录B 方法 标定。国家标准局1 9 8 6 一 0 卜1 8 发布1 9 8 6 一 0 8 一 o f 实施GB 6 1 6 5 一 舀 6中，然后称取2,6 一二 氯靛酚5 0 m g 溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却定容至2 5 0 m 1，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1 m l 抗坏血酸标准溶液于5 0 m 1锥形瓶中，加入l o m l 浸提剂，摇匀，时，另 取1 0 m 1 浸 提剂 做空白 试验。滴定度按式(1)计算:用2,6 一 二抓靛酚溶液滴定至溶液
5、呈粉红色1 5 s 不褪色为止。滴定度T(m g f m l)“犷1-.O.，.(1)V一玖C 式中:T 每毫升2,6 一 二 氯靛酚溶液相当 于抗坏血 酸的 毫克 数，C 抗坏血酸的浓度，m g/m l;r 吸取抗坏血 酸的 体积，m l;V i-滴定抗坏血 酸溶 液所用2,6 一 二抓靛酚溶液 的体 积，m l;17 2滴定空白 所用2,6 一 二 抓靛酚溶液的 体积，耐。4.4 白陶土(或称高 岭土):对维生素c无吸附性。5 测定步骤 5.1 样液制备:称取具有代表 性样品的可食部分1 0 0 g，放人组织捣碎机中，加l o o m)浸提剂，迅速捣成匀浆。称1 0 一4 0 g 浆状样品
6、，用浸提剂将样品移人l o o m!容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克 样品加0.4 9 白 陶土 脱色后再过滤。5.2 滴定:吸取l o m l 滤液放人5 0 ml 锥形瓶中，用已 标定过的2,6 一二氧靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色1 5 s 不褪色为止。同时做空白试验。结果计算6.1 计算公式:维生素C按式(2)计算:维生素C(m g 八0 0 g)式中:1 T-滴定样液时消耗染料溶液的体积，V,-滴定空白时消耗染料溶液的体积，(厂一 Y o)T AWx 1 0 0 ，一(2)m 一且 m T-2,6 一 二 氯靛 酚染 料滴定度，m g/m l,A-稀释倍数，环 飞
7、-样品重量，6.2 平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小数点后两位数字。6.3 平行测定结果的相对相差，在维生素C含量大于2 0 m g/l 0 0 g 时，不得超过2%，小于2 0 m g/1 0 0 9时，不 得超过5%。GB 61 9 5 一 8 6 附录A二甲苯一 二银靛酚比 色法 (补充件)A.1 适用范围 测定深色样品中还原型抗坏血酸。A.2 测定原理 用定量的2,6 一 二 氯靛酚染料与试样中的维生索C 进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中呈 红色，用二甲苯 萃取后比 色，在一 定范围内，吸光度与染 料浓度呈 线性相关，由剩 余染料浓度用差减法计算
8、维生素C含量。A.3 仪器设备 A.3.1 分光光度计或比色计。A.3.2 具塞试管:5 0 m l oA.4 试剂 皆 为分 析纯)A.4.1 偏磷酸:2%溶液(W/V)。A.4.2 乙酸钠缓冲溶液(P H 4.0):5 0 0-1 5 0%(W/V)的乙酸钠溶液与5 0 0-1 冰乙 酸混合。A.4.3 2,6 一二氯靛酚溶液:参照4.3 条。A.4.4 二甲 苯。A.5 测定步骤 A.5.1 标准曲线的绘制:用6 只5 0 m l 具塞试管加人5 m l 2%偏磷酸和5 m l p H 4.0 的乙酸钠缓冲液，然后依次加人0.0,0.1,0.3,0.6,0.9,1.2 及1.5 m 1
9、2,6 一 二氯靛附溶液，用力摇动5 5，再向各试 恰中加人J O m l 二甲 苯，再激烈摇动2 0 s,静置分 层后与试样 管同时比 色(无染 料的试液 作空白)，以吸光度为纵坐标，2,6 一二 氯靛酚的毫升数为 横坐标绘制标准曲线。A.5.2 吸取5 m l 2%偏磷酸样品浸出 液(参照5.1 条)于5 0 m l 具塞试管中，加5 m l p H 4.。的乙酸钠 缓冲 液和2 m l 染料溶液，激烈摇动5 s，立即 加人l o m l 二甲 苯，再激烈摇动2 0 5，待静 置分层后，从二甲 苯层中小心吸取一份，放人l c m比色杯中于5 0 0 n-波长下进行比色。记录吸光度A,在标准
10、曲线上 查出二 甲苯层中2,6 一二 氯靛酚的毫升数。整个 操作应在3 0 m i n 内完成。A.6 计算公式 维生素c(m g 八O O g)式仁 卜 2-所用2,6 一二 氯靛 酚染料的 体积，Ij-查 得2,6 一 二 氯靛 酚溶液的体积，A-稀释倍数;T-染料滴定度，m g/m l;W-样品重量，K o_ 一(2 卫 2卫止 兰 一 x W生 0 0m 一II l lGB 6 1 9 5 一 8 附录B抗坏血酸纯度检验法 (补充件)B.11 0 0 m1B.2称取1 0 0 m g(准确至。.l m 幼 抗坏血酸待测样品，用2%偏磷酸或2%草酸 溶液溶解稀释至吸取抗坏血酸溶液I m
11、l J=盛I O m l 2%偏磷酸或2%草酸溶液的锥形瓶i i i,5 m l 和I%淀粉溶液i i 滴，摇匀。M 1.6 7 x 1 0 一 M 碘酸钾标准溶液 滴定，终点.3 计算公式B.3.1 抗坏血酸浓度按式(B1)计 算:加人6%碘化钾溶 液为极淡蓝色。0.B抗坏血酸浓度 Y x O A 8 8二=布丁 一-.:.(B I)叭从式巾:滴定时消耗1.6 7 x 1 0 一 M碘酸钾标准溶液的体积，m l;所取抗坏血酸溶液的体积，m 卜0.0 8 8-1 ml 1.6 7 x 1 0B.3.2 抗坏血酸纯度(%)“M碘酸钾溶液相当F 抗坏血酸的重量,m g;按式(B2)计算:抗坏血酸纯度(%)C。厂二 一x1 0 0 (B2)式中:C 一 所标定抗坏血 酸的浓度，m g/m l。v-抗坏血酸溶液 总体积，m l;N 飞 抗坏血酸重量，m g o附加说明:本标准由中华人民共和国农牧渔业部提出。本标准由江苏省农科院综合实验室负责起草。