1、I C S6 7 0 5 0X0 4囝目中华人民共$-n 国国家标准G B T2 2 9 5 5-2 0 0 8河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法D e t e r m i n a t i o no fb e n z i m i d a z o l e sr e s i d u e si nf u g u e e la n db a k e de e l L C M S M Sm e t h o d2 0 0 8-1 2-3 1 发布2 0 0 9-0 5-01 实施丰瞀鹊鬻瓣訾矬赞星发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖鬲G B T2 2 9 5 5-2 0 0
2、 8本标准的附录A、附录B 为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人；林峰、林海丹、吴映璇、张美金、邵琳智、庞国芳。w w w.b z f x w.c o m河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法G B T2 2 9 5 5-2 0 0 81 范围本标准规定了河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中苯并咪唑类药物和代谢物残留量的液相色谱一串联质谱检测方法。本标准适用于液相色谱一串联质谱法测定河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中奥芬达唑、芬苯达唑及它们的代谢物奥芬达唑砜，阿苯达唑及
3、其代谢物阿苯达唑一2 一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜，甲苯眯唑及其代谢物氨基甲苯咪唑、羟基甲苯眯唑，氟苯眯唑及其代谢物2 一氨基氟苯咪唑，噻苯咪唑及其代谢物5 一羟基噻苯咪唑，噻苯咪唑酯，氧苯达唑的残留量。本标准的方法检出限：奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑一2 一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯眯唑、氨基甲苯眯唑、羟基甲苯咪唑、氟苯眯唑、2 一氨基氟苯眯唑、噻苯咪唑、5 一羟基噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑均为0 0 1 0m g k g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内
4、容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B T6 3 7 9 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第l 部分：总则与定义(G B T6 3 7 9 1 2 0 0 4，I S O5 7 2 5 1：19 9 4，I D T)G B T6 3 7 9 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(G B T6 3 7 9 2 2 0 0 4，I S O5 7 2 5 2：1 9 9 4，I D T)G B T6 6 8 2 分析实
5、验室用水规格和试验方法(G B T6 6 8 2-2 0 0 8，I S O3 6 9 6：1 9 8 7，M O D)3 原理试样在碱性条件下以乙酸乙酯提取、离心、浓缩后，残渣以乙腈-0 1m o l L 盐酸溶液溶解，正己烷脱脂，经M C X 固相萃取柱净化。样品溶液供液相色谱一串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为G B T6 6 8 2 规定的一级水。4 1 乙酸乙酯。4 2 正己烷。4 3 甲醇：色谱纯。4 4 乙腈：色谱纯。4 5 无水硫酸钠：经6 5 0 灼烧4h，置于干燥器内备用。4 62，6-二叔丁基对甲酚(B H T)。4 7
6、 盐酸。】w w w.b z f x w.c o mG B T2 2 9 5 5-2 0 0 84 8 氢氧化钾。4 92 5 氨水。4 1 0 甲酸：优级纯。4 1 1 乙酸铵。4 1 21 B H T 溶液：称取1 0gB H T，乙酸乙酯溶解并稀释至1 0 0m L，临用前配制。4 1 30 1m o|h 盐酸溶液：量取浓盐酸9m L，加水稀释至10 0 0m L。4 1 40 0 0 5m o l L 甲酸溶液：准确吸取1 8 8p L 甲酸，加水稀释至10 0 0m L。4 1 55 0 氢氧化钾溶液：5 0g 氢氧化钾溶解于1 0 0m L 水中，冷却至室温后待用。4 1 61 0
7、 氨乙腈溶液：量取i 0m L2 5 氨水，乙腈稀释至1 0 0m L，临用前配制。4 1 70 0 2 5m o l L 乙酸铵溶液：1 9 3g 乙酸铵溶解于l0 0 0m L 水中。4 1 8 标准品：奥芬达唑(o x f e n d a z o l e，C A S：5 3 7 1 6 5 0 一o)、芬苯达唑(f e n b e n d a z o l e，C A S：4 3 2 1 0 6 7 9)、奥芬达唑砜(o x f e n d a z o l es u l f o n e，C A S：5 4 0 2 9 2 0-8)、阿苯达唑(a l b e n d a z o l e，C
8、A S：5 4 9 6 5 2 1 8)、阿苯达唑一2 一氨基砜(a l b e n d a z o l e _ 2 一a m i n o s u l f o n e，C A S：8 0 9 8 3-3 4-2)、阿苯达唑亚砜(a l b e n d a z o l es u l f o x i d e，C A S：5 4 0 2 9 1 2-8)、阿苯达唑砜(a l b e n d a z o l es u l f o n e，C A S：7 5 1 8 4 7 1 3)、甲苯咪唑(m e b e n d a z o l e，C A S：1 4 7 9 8 0 0 0)、氨基甲苯咪唑(m e
9、 b e n d a z o l e-a m i n e，C A S：5 2 3 2 9 6 0 9)、羟基甲苯咪唑(5-h y d r o x y m e b e n d a z o l e，C A S：6 0 2 5 4 9 5 7)、氟苯咪唑(f l u h e n d a z o l e，C A S：1 3 6 7 8 0 0 0)、2-氨基氟苯咪唑(2-a m i n o f l u b e n d a z o l e)、噻苯眯唑(t h i a b e n d a z 0 1 e，C A S：1 4 8 7 9 8)、噻苯咪唑酯(c a m b e n d a z o l e，C
10、A S：2 6 0 9 7 8 0 3)、氧苯达唑(o x i b e n d a z o l e，C A S：2 0 5 5 9 5 5 1)标准品：含量均在9 8 以上，5 一羟基噻苯咪唑(t h i a b e n d a z o l e-5 一h y d r o x y，C A S：1 7 4 5 0 5 0 0)标准溶液浓度为1 0m g L。4 1 9 标准溶液4 1 9 1 标准储备液准确称取按其纯度折算为1 0 0 质量的奥芬达唑、芬苯达唑、奥芬达唑砜、阿苯达唑、阿苯达唑2 一氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、甲苯眯唑、氨基甲苯咪唑、羟基甲苯咪唑、氟苯咪唑、2 一氨基氟苯眯唑、
11、噻苯咪唑、噻苯咪唑酯、氧苯达唑标准品各1 0m g(精确至0 1m g)，分别用甲醇溶解并定容至1 0 0m L，配成标准储备溶液浓度为1 0 0#g m L。4 1 9 2 混合标准工作溶液根据需要，用乙腈一水(1+4)将标准储备液(4 1 9 1)及5 一羟基噻苯咪唑标准溶液配成适用浓度的混合标准工作溶液。混合标准工作溶液使用前配制。4 2 0固相萃取柱：阳离子交换固相萃取柱M C X 柱或相当者，1 5 0m g 6m L。使用前依次用5m L 甲醇活化、5m L0 1m o l L 盐酸平衡。4 2 1 滤膜：0 2p m。5 仪器5 1 液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5 2
12、 组织捣碎机。5 3 匀浆机：转速大于或等于80 0 0r m i n。5 4 涡旋振荡器。5 5 离心机：转速大于或等于40 0 0r r a i n。5 6 减压旋转蒸发仪。5 7 超声波水浴。2w w w.b z f x w.c o mG B T2 2 9 5 5-2 0 0 85 8 分析天平：感量0 1m g，0 0 1g。6 制样方法从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约5 0 0g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一1 8 以下冷冻存放。制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。7 分析步骤7 1 提取称取2g 样品(准确至0 0
13、1g)，于5 0m L 离心管中，加入2 0m L 乙酸乙酯(4 1)、0 1 5m L5 0 氢氧化钾溶液(4 1 5)、1m L1 B H T 溶液(4 1 2)置超声波水浴中振荡5r a i n，匀浆机上80 0 0r m i n 均质3 0S，加入1g 无水硫酸钠，混匀，40 0 0r m i n 离心5r a i n，清液转移至1 0 0 m L 梨形瓶中；另取一离心管，加入2 0m L 乙酸乙酯、0 1 5m L5 0 氢氧化钾溶液和1m L1 B H T 溶液洗涤匀浆机刀头；用玻棒捣碎离心管中的沉淀，加入上述洗涤匀浆机刀头的碱性乙酸乙酯溶液，在涡旋振荡器上振荡2m i n，置超声
14、波水浴中振荡5m i n，40 0 0r r a i n 离心5m i n，清液合并至1 0 0m L 梨形瓶中，3 8 减压旋转蒸发至干。7 2 净化上述残渣马上用1 5m L 乙腈溶解，涡旋混匀，超声5m i n，加入1 5m L0 1m o l L 盐酸溶液(4 1 3)，涡旋混匀，转移到1 5m L 离心管，加5m L 正己烷(4 2)洗涤梨形瓶，合并转移到离心管中，涡旋混匀，40 0 0r m i n 离心5r a i n，弃上层正己烷层，加入3m L 正己烷重复操作一次。脱脂后的样液加入3m L0 1m o l L 盐酸溶液，涡旋混匀，注入已活化处理的M C X 固相萃取柱(4 2
15、 0)，依次用5m L0 1m o l L 盐酸溶液、5m L 甲醇(4 3)淋洗，1 5m L1 0 氨乙腈溶液(4 1 6)洗脱，洗脱液3 8 减压旋转蒸发至干，残渣加入0 5m L 乙腈，置超声波水浴中振荡5m i n，加入1 5m L0 0 2 5m o l L乙酸铵溶液(4 1 7)，涡旋混匀，吸取1 0 0p L 该样液，加入19 0 0p L 乙腈一水(1+4)混匀后过0 2p m 滤膜(4 2 1)，供液相色谱一串联质谱仪测定。7 3 测定条件7 3 1 液相色谱参考条件a)色谱柱：Y M CC 1 8 3p m，1 5 0m m 2 1r a m(内径)或相当者；b)流动相：
16、乙腈：0 0 0 5m o l L 甲酸溶液(4 1 4)，梯度洗脱；乙腈：1 5 8 0(7r a i n 内线性增e J加)，8 0 保持2r a i n，8 0 1 5(o O lm i n 内线性递减)，1 5 保持1 1r a i n；流速：0 2 5m L m i n；柱温：4 0；进样量：5p L。质谱参考条件离子化模式：电喷雾电离正离子模式(E s I+)；质谱扫描方式：多反应监测(M R M)；分辨率：单位分辨率；雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度；1 6 种苯并咪唑类药物的定性离子对、定量离子对和去集簇电压、碰撞气能量、参考保留时间见表l。30 曲02 幻o 山37w w w.b z f x w.c o mG B T2 2 9 5 5-2 0 0 8表11 6 种苯并咪唑类药物和代谢物的参考保留时间、参考质谱参数去集簇电压碰撞气能量参考保留时间化合物名称定性离子对(m g)定量离子对(m z)VV3 1 6 1 5 95 5奥芬达唑3