1、GB/T5009.188-2003玻璃珠，接上空气冷凝管，小火缓缓煮沸0.5h,取下，用20L盐酸(1+11)从冷凝管顶描选涤冷凝管和圆底离心管，并移人125mL分液漏斗中，用二氯甲烷提取二次，每次10mL,弃去二氯甲烷层，酸溶液中加25mL氢氧化钠溶液(80g/L)至pH6.06.5(pH试纸试)，用二氯甲烷提取二次，每次20mL,合并二氯甲烷提取液，用10L水洗涤一次，静置分层后，将二氯甲烷层分入另一个干的分液漏斗中，准确加入10mL盐酸(1十11)，振摇5min,静置分层后，盐酸提取液用1cm石英比色杯，以盐酸(1+11)调节分光光度计零点，测读250nm300nm的吸光度，以波长为横坐
2、标，吸光度为纵坐标，绘制吸收图谱。将图谱上260nm和290nm吸光度读数点连成直线，设直线上282nm的吸光度为A,吸收图谱上282nm的吸光度为A,两者之差为A(A=A一A,为校正吸光度)。再以校正吸光度为纵坐标，甲基托布津的含量为横坐标，绘制各甲基托布津标准点A值的标准曲线。5.1.2多菌灵标准曲线：吸取0、0.10、0.30、0.50mL多菌灵标准使用液（相当0、10、30、504g多菌灵)，置于盛有20mL盐酸(1+11)的分液漏斗中，各用二氯甲烷提取二次，每次10mL,弃去二氯甲烷层，水溶液用氢氧化铵(1+7)中和到pH为6.06.5(pH试纸试)，用二氯甲烷提取二次，每次20mL
3、,提取液用10mL水洗涤一次，以下按5.1.1甲基托布津标准曲线自“将二氧甲烷层分入另一个于的分液漏斗中，准确加入10L盐酸(1+11)”起依法操作，并绘制吸收图谱，计算出A值后，绘制多菌灵的标准曲线。5.2试样的提取和分离称取50.0g切碎、混匀的试样，加50mL,甲醇振摇0.5h,用布氏漏斗抽滤，容器和滤器用甲醇洗涤二次，每次15mL20mL,抽干后，滤液移入烧杯中，抽滤瓶用约10mL水洗涤，洗液并人滤液内，在水浴上用空气流吹去部分甲醇后，移人分液湘斗中，加30mL氯化钠溶液(100g/L),用石油醚振摇提取二次，每次25mL,弃去石油醚，加盐酸酸化至pH为12（用pH试纸试），用二氯甲烷
4、提取二次，每次25mL,合并二氯甲烷提取液，用25mL水洗涤一次分出二氯甲烷层留作甲基托布津测定用。水洗涤液合并人水层，留作多菌灵测定用。5.3甲基托布津的测定二氯甲烷提取液自然挥千后，用10mL乙酸-乙酸铜溶液分次溶解残渣，并移人30mL圆底离心管中，加2粒玻璃珠，以下按5.1.1自“接上空气冷凝管”起依法操作，计算出试样的A值，再与甲基托布津的标准曲线比较，计算试样中的含量。5.4多菌灵的测定取5.2中留作多菌灵测定的水溶液，用氢氧化铵(1+7)中和至pH6.06.5,然后按5.1.2多菌灵标准曲线自“用二氯甲烷提取二次”起依法操作，计算出试样中的A值，再与多菌灵标准曲线比较，计算试样中的
5、含量。甲基托布津在植物中的主要代谢物是多菌灵，是甲基托布津水解和闭环所形成，因而目前甲基托布津的残留量是以这两个化合物测得的残留量之和表示。6结果计算试样中甲基托布津和多菌灵含量按下式计算：X=m:+m2)X1000m1000式中：X一试样中甲基托布津和多菌灵含量，单位为疮克每于克(mg/kg);1一一测定用试样中甲基托布津的质量，单位为微克(g)；m2一一测定用试样中多菌灵的质量，单位为微克（g):m-一试样的质量，单位为克(g)。计算结果表示到两位有效数字。498GB/T5009.188-20037精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。8其他0.180.160.160.140.140.120.120.100.10F0.080.080.060.060.040.040.020.02260298浓度010y30Y50Y波长/nm&M:-=87A11=0.052-0.019=0.033A2=0.112-0.022=0.0904A:-50YA=0.180-0.030=0.150图1甲基托布津标准紫外吸收光谱图2甲基托布津标准曲线499