1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.1492003代替GB/T17335一1998食品中栀子黄的测定Determination of crocin in foods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生都中国国家标准化管理委员会发布255GB/T5009.149-2003食品中栀子黄的测定1范围本标准规定了食品中栀子黄色素的高效液相测定方法和薄层色谱法。本标准适用于饮料、酒、糕点中栀子黄的测定。第一法检出限为3.2g/mL标准曲线线性范围为0ng/mL200ng/ml.第一法高效液相色谱法2原理试样中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测
2、定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。3试剂试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.1甲醇。3.2石油醚：6090。3.3乙酸乙酯。3.4三氯甲烷。3.5姜黄色素。3.6栀子甙。3.7栀子甙标准溶液：称取2.75mg栀子甙标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27.5g/mL栀子甙.3.8栀子甙标准使用液：分别吸取栀子甙标准溶液0,2.0,4.0,6.0,8.0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL,即得0,5.5,11.0,16.5,22.04g/mL的栀子甙标准系列溶液。4仪器4.1小型粉碎机。4.2恒温水浴。4.3高效液相色谱系统：WatersM
3、510泵，U6K进样器，岛津RF-535。荧光检测器，Blue chip/PC计算机和Baseline8l0色谱控制程序。5分析步骤5.1试样处理5.1.1饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0.4m过滤，滤液备作HPLC分析用。5.1.2酒：试样通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。5.1.3糕点：称取10g试样放人100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min,置室温。砂芯漏斗过滤，用石油醚洗涤残渣5次，洗液并人滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放人通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3次5次，每次30L,直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液
4、通过259GB/T5009.149-2003微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。5.2测定5.2.1HPLC参考条件色谱柱：粒度5 um ODS C,150mmX4.6mm;流动相：甲醇+水(35+65)：流速：0.8mL/mint波长：240nm。5.2.2标准曲线在本实验条件下，分别注入栀子甙标准使用液0,2,4,6,84L,进行HPLC分析，然后以峰高对栀子甙浓度作标准曲线。5.2.3试样测定在实验条件下，注入5L5.1试样处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得试样中栀子甙含量。6结果计算按下式计算：X=AXVm1000式中X一试样中栀子黄色素的含量，单位为克每千克(g/kg):A一进样液中栀子甙的含量，单位为微克每毫升(g/mL):V一试样制备液体积，单位为毫升(mL):m一试样质量，单位为克(g)。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过5%。第二法薄层色谱法8原理试样中栀子黄色素用有机溶剂提取，并经过纯化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概路定量。9试剂所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。9.1甲醇。9.2乙醇。9.3乙酸乙酯。9.4丙丽。9.5甲酸。9.6三氯甲烷。9.7硅胶GF254:薄层色谱用。9.8展开剂：乙酸乙酯+丙酮+甲醇+水(5+5+1+1)。260