1、GB/T5009.133-2003前言本标准代替GB/T16338一1996粮食中绿麦隆残留量的测定。本标准按GB/T20001.4一2001标准编写规则第4部分：化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准负责起草单位：华西医科大学公共卫生学院、四川省卫生防疫站、四川省劳动卫生职业病防治研究所。本标准主要起草人：黎源倩、牟文营、孙成均、向仕学、张立实。原标准于1996年首次发布，本次为第一次修订。159GB/T5009.133-2003粮食中绿麦隆残留量的测定1范围本标准规定了粮食中绿麦隆残留量的检验方法。本标准适用于使用过该除草剂的小麦、玉米和大豆中
2、绿麦隆残留量的测定。本方法检出限为0.01mg/kg:线性范围为0.04mg2.00mg。2原理试样中的绿麦隆用甲醇水振摇提取，过滤后，滤液用二氯甲烷-石油醚混合溶剂萃取，以丙丽-石油醚为淋洗剂，经硅镁吸附剂净化，洗脱液浓缩后用七氟丁酸酐衍生化。衍生产物用气相色谱法，电子捕获检测器测定，采用保留时间定性，标准曲线法定量。3试剂3.1甲醇：重蒸馏。3.2二氯甲烷：重蒸馏。3.3三氯甲烷：重蒸馏。3.4石油醚：沸程6090，重蒸馏。3.5丙酮：重蒸馏。3.6正己烷：重蒸馏3.7无水硫酸钠。3.850g/L碳酸氢钠溶液。3.9饱和氯化钠溶液。3.10七氟丁酸酐：色谱纯。3.11硅镁吸附剂：100目2
3、00目，于550灼烧5h,置于干燥器中。临用前取100g硅镁吸附剂加5mL蒸馏水减活化，平衡过夜，混匀备用。放置时间超过两天，用前应于130烘5h,再按上述比例加水减活化后使用。3.12绿麦隆标准溶液：准确称取绿麦隆标准品(chlorotoluron),用丙丽配制成1mg/mL的标准储备液，于冰箱(4)中保存，临用时用正己烷稀释成10g/mL的标准使用液。4仪器4.1气相色谱仪：具有电子捕获检测器(ECD)。4.2小型食品粉碎机。4.3电动振荡器。4.4恒温水浴箱。4.5小型全玻诚压蒸馏装置或旋转蒸发器。5分析步骤5.1试样预处理5.1.1提取玉米、大豆、小麦试样经粉碎并通过20目筛后，称取约
4、25g试样，精确至0.001g,置于250mL具塞锥形瓶中，加入120mL甲醇水(3+2)于电动振荡器上振摇30min,用快速定性滤纸过滤，161GB/T5009.133-2003滤液转人250ml.容量瓶中，残渣再加80ml.甲醇水(3+2)振摇30min,过滤，合并滤液，用甲胶水(3+2)稀释至250mL。对于玉米和大豆试样，取50mL滤液（相当于5g试样）置于250mL分液漏斗中，加入20mL饱和氯化钠溶液和30mL蒸馏水，用二氯甲烷-石油醚(3.5+6.5)混合溶剂振摇提取3次，每次用溶剂20mL,振摇1min,合并二氯甲烷-石油醚提取液。对于小麦试样，取50mL滤液（相当于5g试样）
5、置于250mL,分液漏斗中，加人50mL饱和气化钠溶液，用三氯甲烷-石油醚(3.5+6.5)提取3次，每次20mL,振摇1min。合并三氯甲烷-石油醚提取液和乳化层，用20L饱和氯化钠溶液振摇，待静止分层后，弃掉下层氯化钠溶液。上述提取液经盛有10g无水硫酸钠的漏斗，滤人100mL圆底烧瓶内，用少量提取液分数次洗涤漏斗及其内容物，洗液并入滤液。于60士1恒温水浴上减压蒸去大部分溶剂，用氨气或净化空气吹干溶剂。用5mL石油醚溶解残渣，供净化用。5.1.2净化于内径为1cm2cm的层析柱内装入2g无水硫酸钠，称取10g15g硅钱吸附剂，用30mL,石油醚湿法装柱，柱上端铺1cm厚无水硫酸钠。当柱内
6、液面降至吸附剂表面时，将试样溶液小心转人层析柱上。用60mL丙酮-石油酰(1+4)淋洗，用淋洗液分数次洗涤装试样溶液的圆底烧瓶后再转入层析柱中，洗脱速度为0.5 mLymin1.0mL/min,用另一l00ml,带磨口塞的圆底烧瓶收集洗脱液，于60士1恒温水浴上减压浓缩近干，用氮气或净化空气吹干溶剂，准确加人4.00L正己烷供衍生化用。5.1.3衍生化于上述具塞圆底烧瓶中加入20L七氟丁酸酐，立即盖紫玻璃塞，混匀后置于60士1恒温水浴上，加热反应1h。取出后用水冷却至室温，加人4mL碳酸氢钠溶液，混匀。将衍生化产物转入10mL具塞试管中，取上层正己烷溶液进行气相色谱分析。5.2仪器分析气相色谱
7、条件：2mm3mm不锈钢色谱柱，内装涂有3%OV-17,Chromosorb W AW DMCS(80目100目)的固定相。柱温为175，进样口和检测室温度为230，氨气流速为30mL/min。5.3标准曲线的绘制分别取0.0,0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL绿麦隆标准使用液于10mL具塞试管内，补加正己烷至4.00mL。按5.1.3衍生化步骤进行衍生化，取上层正己烷溶液进行气相色谱分析。分别取2.0L标准溶液注人气相色谱仪，各重复测定3次，以标准溶液的浓度为横坐标，其色谱峰高平均值为纵坐标，绘制标准曲线。5.4测定取2.0L经衍生化后的试样溶液注人气相色谱仪，重复测定3次，测定试样的峰高平均值。以保留时间定性，根据标准曲线和试样的峰高平均值定量。5.5结果计算测定时，当试样溶液和标准溶液的进样体积相同时，试样中绿麦隆的含量按下式计算。X=cXV力1式中：X一试样中绿麦隆的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);c由标准曲线查得的试样衍生化溶液中绿麦降的浓度，单位为微克每毫升（g/mL);V一试样衍生化溶液的体积，单位为毫升(mL):m用于测定的甲醇水提取液所相当的试样质量，单位为克(g)。计算结果保留两位有效数字。6精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。162