1、1CS67.120.10X18中华人民共和国国家标准农业部781号公告一2一2006动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱一串联质谱法Determination of chloramphenicol residues in animal derived foodby high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry2006-12-16发布2006-12-16实施中华人民共和国农业部发布农业部781号公告一2一2006目次前言1范围2规范性引用文件3制样13.1样品的制备13.2样品的保存4测定方法4.1方法提要或
2、源理4.2试剂和材料14.3仪器和设备。24.4测定步骤4.5结果计算5检测方法灵敏度、准确度和精密度。5.1灵敏度5.2准确度5.3精密度4附录A5附录B6农业部781号公告一2一2006前言本标准附录A、附录B是资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：中国兽医药品监察所。本标淮主要起草人：王树槐、门立强、孙雷、汪霞、张建强。农业部781号公告一2一2006动物源食品中氯霉素残留量的测定高效液相色谱一串联质谱法1范围本标准规定了动物源性食品中氯霉素残留确认检测的制样和高效液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于猪、鸡肝脏、肌肉、鱼和虾组织中氯霉素残留量的检测。2规
3、范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682一1992分析实验室用水规则和试验方法。农业部农牧发20031号兽药残留试验技术规范（试行）。3制样3.1样品的制备取适量新鲜或冷冻的空白或供试组织，绞碎并使均匀。3.2样品的保存20以下贮存备用。4测定方法4.1方法提要或原理采用间位氯霉素作内标，试料依次用乙腈、4%氯化钠去蛋白，正己烷脱脂，乙酸乙酯提取，固相萃取
4、柱净化，氮气吹干。用高效液相色谱一串联质谱法测定，间位氯霉素内标法定量。4.2试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。4.2.1氯霉素标准品(CAP)4.2.2内标：间位氯霉素(m-CAP)或氘代氯霉素(CAP-D5)。4.2.3乙腈色谱纯。4.2.4氯化钠4.2.5正己烷4.2.6乙酸乙酯4.2.7甲醇色谱纯。4.2.8C18固相萃取柱(500mg/3cc)。4.2.94%氯化钠溶液称取氯化钠4.0g,用水溶解并稀释至100mL,临用前配制。4.2.10水饱和乙酸乙酯溶液取400mL乙酸乙酯于500mL棕色试剂瓶中，加水50mL,加盖、振
5、摇，静置，使用时取上层溶液。1农业部781号公告一2一20064.2.11氯霉素标准储备液取氯霉素约10mg,精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释成浓度为100g/mL。-20保存，有效期1年。4.2.12间位氯霉素内标储备液取间位氯霉素10g,精密称定，置100mL量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释成浓度为100gmL。-20保存，有效期1年。4.2.13氯霉素标准工作液淮确量取标准储备液适量，用流动相稀释成浓度为10ng/mL、50g/mL的标准工作液。4保存，有效期3个月。4.2.14间位氯霉素内标工作液准确量取内标储备液适量，用流动相稀释成浓度为20gmL的内标工作液。4保存，
6、有效期3个月。4.3仪器和设备4.3.1液相色谱一串联质谱仪（配电喷雾离子源）】4.3.2天平感量0.01g4.3.3分析天平感量0.00001。4.3.4涡旋振荡器4.3.5组织匀浆器4.3.6低温离心机4.3.7样品浓缩仪4.3.8固相萃取装置4.4测定步骤4.4.1试料的制备试料的制备包括：一取绞碎后的供试样品，作为供试试料。取绞碎后的空白样品，作为空白试料。-取绞碎后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。4.4.2提取取10000rmin匀浆1min的试料(50.02)g置50mL离心管中，加间位氯霉素内标工作液250L,加乙腈5mL,4%氯化钠溶液5mL,涡旋振荡2
7、min,4000r/min离心10min,取上清液至另一50mL离心管中，重复提取1次，合并提取液。提取液中加正己烷5mL,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,弃去上层液，重复1次。加水饱和乙酸乙酯溶液5mL,涡旋振荡1min,2000r/min离心10min,将上层液转移到15mL离心管中，重复提取1次，合并提取液氮气吹干，用水-乙腈(95：5)3mL溶解，备用。4.4.3净化固相萃取柱依次用甲醇10mL,水10mL预洗，取备用液过柱。用水3mL洗柱，洗2次后，用流动相4mL以1 mL/min的速度将样品洗脱入15mL离心管中。洗脱液中加水饱和乙酸乙酯溶液4mL,涡旋振荡1min,2000r/min,离心5min,取上层液，重复提取1次，合并提取液，氮气流下吹干。用流动相1.0mL溶解残余物后，过滤膜后供高效液相色谱一串联质谱测定。4.4.4标准曲线的制备精密量取氯霉素标准工作液和间位氯霉素内标工作液适量，用流动相稀释成氯霉素浓度分别为0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL,间位氯霉素内标浓度为5.0ng/mL。按表1添加供高效液相色谱一串联质谱测定。2