1、SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4544.1-2016商品化试剂盒检测方法菌落总数方法一Commercial kit method-Aerobic count-Test method I2016-08-23发布2017-03-01实施防码1中华人民共和国电话4006982315国家质量监督检验检疫总局发布刮涂层查真伪SN/T4544.1-2016前言本部分是SN/T4544的第1部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华
2、人民共和国福建出人境检验检疫局、北京陆桥技术有限责任公司、中华人民共和国绍兴出入境检验检疫局。本部分主要起草人：林杰、郑晶、黄晓蓉、陈彬、董健、柯璐、戴晓丽、任明兴。SN/T4544.1-2016商品化试剂盒检测方法菌落总数方法一1范围本部分规定了食品中菌落总数检验测试片(Easy TestTMAerobic Count)的检测方法。本部分适用于肉类、鱼类和海产品、水果和蔬菜制品、乳制品和杂品等食品种类中菌落总数的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB
3、4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB19489实验室生物安全通用要求GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T2775-2011商品化食品检测试剂盒评价方法SN/T3266-2012食品微生物检验方法确认技术规范3生物安全措施为了保护实验室人员的安全和防止污染，应由具备资格的工作人员检测菌落总数。所有培养物和废弃物应按照GB19489和GB/T27403中的有关规定执行。4技术概要菌落总数测试片(Easy TestTMAerobic Count)是一种预先制备好的培养基系统，含有标准的培养基和氧化三苯四氮唑(TTC)指示剂，菌落在测试片上呈红色或粉红
4、色，这样可增强菌落计数效果。5试剂和材料5.1菌落测试片(Easy TestMAerobic Count)本部分使用的试剂盒由北京陆桥技术有限责任公司生产，参考SN/T2775-2011和SN/T3266-2012由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会组织评价。具体评价结果参见附录A。试剂盒储存于28，有效期6个月。试剂盒内测试片使用前应该回温到室温。5.2磷酸盐缓冲液(PBS)贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/LNaOH溶液调节pH,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。1SN/T 4544.1-2016稀释液：取贮存液1.25m
5、L,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中，121高压灭菌15min。5.3 1 mol/L NaOH称取40gNaOH溶于1000mL蒸馏水中。5.4 1 mol/L HCI移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释到1000mL。6仪器和设备6.1冰箱：28。6.2均质器。6.3移液管：1mL(具0.01mL刻度)，10mL(具0.1mL刻度)或移液器及吸头。6.4恒温培养箱：361和301。6.5天平：感量为0.1g。7检测程序菌落总数测试片(Easy TestTM Aerobic Count)检测方法程序见图 1。检样制备样品匀液选择2个3个适宜稀释度各取1mL加入菌落测试片待稀释液扩散测
6、试片的部分培养计数各测试片菌落数计算菌落总数结果报告图1菌落总数测试片(Easy TestMAerobic Count)检测方法程序2SN/T4544.1-20168操作步骤8.1样品制备、增菌培养按照GB4789.2方法进行样品制备。制备1：10的样品匀液后，无菌操作调节该样品匀液的pH为6.67.2，酸性样液用1mol/LNaOH调节，碱性样液用1mol/LHCl调节，或根据产品标准规定的酸碱溶液来调节 pH值。8.2样品稀释按GB4789.2的程序进行，培养基为菌落总数测试片(Easy TestTMAerobic Count)。8.3接种根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2
7、个3个适宜稀释度检验。将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜，用吸管或者移液器吸取某一稀释度的1mL样液，垂直加在测试片的中央处，将上层膜盖下，待稀释液扩散后放入培养箱培养。每个稀释度接种两张测试片，每张1mL。8.4培养将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内，可堆叠至30片，361条件下培养48h2h,水产品301培养72h2h;如有产品标准等特殊要求，则按相应的标准或要求进行。8.5菌落计数和记录8.5.1到培养时间后应立即计数，计数红色菌落。8.5.2菌落计数和记录的规则同GB4789.2。8.6菌落计数说明8.6.1不论菌落大小都应计数。8.6.2当细菌浓度很高时，整个测试片会变成红色或粉红色，将结果记录为“多不可计”。8.6.3本测试片有20个等分方格，当菌落数量过多计数困难时，可选择几个有代表性菌落的小方格，计算平均菌落数，再乘以相应倍数，即可得到整个测试片上的估算菌落数。9结果判定和报告结果判定和报告的规则同GB4789.2。3