1、GB/r 1 7 8 1 4 一 1 9 9 9前言 随着我国饲料工业的不断发展，抗氧化剂在饲料中的使用逐渐增加 考虑到抗氧化剂在饲料中用量的多少所带来的利弊，必须建立检测其含量的方法 我国食品中抗氧化剂 B HA,B H T的检测已有国家标准。气相色谱法单项测定 B HA,B H T或 E Q 的方法已有介绍。国外检测抗氧化剂的方法很多，主要是气相色谱和高压液相色谱法。但在我国目前还未见检测饲料中抗氧化剂的方法的报导，更没有制定国家标准。根据我国复核检验不同品种的国外进口抗氧化剂以及我国目前使用抗氧化剂的情况来看，主要是复合型抗氧化剂或复配使用。因此，建立能同时检测多组分复合型抗氧化剂的检测
2、方法势在必行。鉴于此，特制定本标准。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。本标准主要起草人 谢发明、宋荣、韩华琼、范理。中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中丁基轻基茵香醚、二丁基 轻基甲苯和乙氧哇的测定D e t e r mi n a t i o n o f b u t y l h y d r o x y a n i s o l e,d i b u t y l h y d r o x y t o l u e n e a n d e t h o x y q u i n i n f e e d sG B/T 1 7 8 1 4-1 9
3、 9 9，范 围 本标准规定了饲料中抗氧化剂丁基经基茵香醚(B H A)、二丁基经基甲苯(B H T)和乙氧座(E Q)测定方法的试剂、仪器、设备、操作方法和注意事项。本标准适用于配合饲料、鱼粉中抗氧化剂B H A,B H T,E Q的测定。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 1 4 6 9 9.1-1 9 9 3 饲料采样方法3 原理 样品中B H A,B H T,E Q用正己烷提取，离心分离后(如遇干扰待测组分的样品，则需取上清液，用柱
4、层析净化处理)，取上清液用气相色谱、F I D检测器检测，外标法定量4 试荆 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，分析用水为燕馏水(或离子交换水)。4 门正己烷。4.2 丙酮。4.3 二抓甲烷。4.4 二氯甲烷一 丙酮(9+1)混合液4.5 无水硫酸钠:5 0 0 C 烘4 h,4.6 氟罗里硅f:孔径1 7 7 -1 4 9 p=(8 0-1 0 0目)，5 5 0 C 烘4 h，存于干燥器中。4.7 助滤剂C e l i t e 5 4 5 2 0 -4 5 p m,4.8 医用脱脂棉。4.9 B H A标准物:纯度 9 8 0 0,4.1 0 B H T标准物:纯度 9 8 Y 0,
5、4.1 1 E Q标准物:纯度 9 504.1 2 B H A,B H T,E Q混合标准溶液:称取上述标准物各5 0 0.0 0 m g(视其纯度，换算成1 0 0%再称样)，置于5 0 M I.棕色容量瓶中，以正己烷溶解并定容。此液为 1 0 m g/m L。然后稀释成系列标准液:1.0 0 m g/m L,O.5 0 m g/m L,O.1 0 m g/m L,O.0 5 m g/ml-0.0 1 m g/ml _,国家质f技术监督局 1 9 9 9 一 0 8 一 1 0 批准2 0 0 0 一 0 2 一 0，实施G B/T 1 7 8 1 4-1 9 9 95 仪器、设备5 门气相
6、色谱仪:带 F I D检测器5.2 氮气钢瓶:氮气纯度为9 9.9 9%05.3 氢气发生器:氢气纯度为9 9.9 9%o5.4 空气钢瓶:一般压缩空气。5.5 离心机:4 0 0 0 r/m i n,5.6 粉碎机:粉碎粒度达 4 0目。5.7 超声波处理机。5.8 微型混合器。5.9 分析天平:感量0.0 0 0 1 g e5.1 0 具塞刻度玻璃试管:1 0 mL,5.1 1 铝制试管架。5.1 2 具活塞层析柱:1 5 c m X 0 1 c m.5 门3 旋转蒸发器:带抽真空装置(或真空泵)。5.1 4 浓缩烧瓶:1 5 0 mL，带 5 mL刻度尾接管6 样 品6.1 按 G S/
7、T 1 4 6 9 9.1 取得样品口6.2 配合饲料:以四分法缩分样品至约中，避光低温保存备用。6.3 鱼粉:如为均匀粉状，可直接取样2 5 0 g，粉碎，过孔径4 2 0 p m(4 0目)筛，混匀，装人密闭广口 瓶7 测定步骤7.1 试样制备7 门门提取 按6.1 或6.2 称取样品2.0 0 0 g 于1 0 m L具塞刻度试管中，加人少许无水硫酸钠，再加5.0 m L正己烷，加塞。在微型混合器上混合 0.5 mi n，将试管放到试管架上，连同试管架一起放人超声波处理槽内，槽内水位以刚好 与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取 1 5 mi n。取出.将试管外水液擦去，放人离心机，以 4
8、 0 0 0 r/m i n离心 2 mi n，取出试管。上清液为待测溶液。7.1.2 净化7.1.2.1 如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理:首先按 7.1.1 提取样品，只是提取液由5.0 ml正己烷改为 1 0.0 m L正己烷。7.1.2.2 装柱:层析柱底先放少许脱脂棉，再加少许(约2 g)无水硫酸钠，用正己烷调制氟罗里硅土适量(约4 g，以装满柱为准)，湿法填充于层析柱中，上端先加约5 g 助滤剂，再加约5 g无水硫酸钠，铺平7.1.2.3 淋洗:用移液管准确吸取 7.1.2.1 所得上清液 5.0 mL上柱。先以3 0 mL正己烷淋洗，再以8 0 n il,=氛甲烷一
9、 丙酮(4.4)混合液淋洗，速度以大约每分钟 2 mL为宜。用旋转蒸发器浓缩至约 1 ml.用正己烷定容至 2.0 m l，待测。了.2 测定 分别取系列混合标准溶液(4.1 2)1 p L进样，测得不同浓度B H A,B H T,E Q的峰面积(或峰高)，以浓度为横坐标，峰面积(或峰高)为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取样品待测液 1 p L进样，测得峰面积 或峰高)分别与工作曲线相比较定量，或按式(1)计算求得。7.3 计算G B/T 1 7 8 1 4-1 9 9 9 B F I A,B HT,E Q的含量。按式(1)分别计算:A,X m火 V 。一A下 兀获;爪 不式中:。一 每千克样
10、品中含某组分的质量,m g;A,-一 进样样液中B H A,B H T,E Q峰面积(或峰高),p V s(或m m);m 一 一 B H 八、B HT,E Q标准物进样的绝对量，n g;V一 一 样品提取定容体积，mL;A 一 一 标准液的B H A,B H T,E Q峰面积(或峰高),f,V s(或m m);m一 一 称样量,g;V;-一 样液的进样体积,W L.如样品用柱层析净化处理，则结果按式(2)计算 A,X m，X V V,似=一 二 一份 悦 丫于 一 一-x;下 月.1入 从 入 v;v,(2)式 中:V,一一样品提取液分取过柱体积一 一样液进样前定容体积，MI.,mL;其他符
11、号同式(1),7.4 气相色谱参考条件7.4.1 气相色谱仪，带 F I n检测器。色谱柱:H P-1 石英毛细管柱，2 5 载气:氮气:2.0 mI./m i n;尾吹气 隔垫吹扫:6 m l-/m i n.分流比:2 0:1,检测器温度:2 4 0 C。进样口温度:2 1 0 C e 柱温:见图 1.mX声 0.3 2 mm.;3 0 mL/mi n;氢气:3 0 mL/mi n;空气:3 5 0 mL/mi n,2 0 0 cit.图 1 程序升温图7.4.2 气相色谱仪，带F I D检测器 色谱柱:5%S E-3 0 玻璃填充柱，2.5 m X 尹 3.5 m m,气体流速:氮气:4
12、0 m I-/m i n;氢气:2 5 m L/m i n;空气:2 5 0 m L/m i n,进样口、检测器温度:2 3 0 C,柱温:见图 2,G B/r 1 7 8 1 4-1 9 9 92 0 0”1 0-图 2 程序升温图7.4.3 B H A,B H T,E Q气相色谱图(出峰顺序:B H A,B HT,E Q)，见图 3和图 4 e的国gT叶阴卜0如 6沈侧 01州皿.皿t.皿Tl叩66工r口口叱价妈动以图 3 填 充柱图 4 毛细管柱8 结果表述每个试样平行测定两次，以其算术平均值为结果。结果表示到小数点后一位。9 允许差相对相差落1 5%1 01 0.1注意事项测定)。本标
13、准的特点之一，是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰(避免干扰后续上机样品的如色谱图中，前面各待测组分不受杂峰干扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简。但要常注意清洗进样器。1 0.2 本标准也适合于维生素预混料、单组分抗氧化剂B HA,B H T,E Q的测定，而且可免除程序升温节省时间。1 0.3 本标准检测全过程，尽可能避光(或不在强光下)操作，以减少损失。1 0.4 如遇较难提取的试样，可于头天称样，加正己烷浸泡过夜，第二天再提取测定。G B/T 1 7 8 1 4-1 9 9 91 0.5 如用柱层析净化时，一定要注意氟罗里硅土的活性。5 5 0 C 烘 4h能保持 3 天，3 天后，用前需在1 3 0 C烘 4h(特别是夏天湿度大时，更需注意);活性太强，E Q 过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活(加氟罗里硅土重量的 2%的水，摇匀，过夜平衡)1 0.6 本标准以毛细管柱法为仲裁法