1、G B/T 1 7 8 1 1-1 9 9 9前言 本标准等效采用美国公职分析化学家协会(A O A C)(1 9 9 5 年版)(动物蛋白质饲料的胃蛋白酶消化率测定方法过滤法。在技术内容上，原方法中所用的“恒温搅动器”，根据实际情况改用“恒温平转摇床”;再则，限于国内试剂条件，选用市场上易购的胃 蛋白 酶试剂(1:3 0 0 0)代替原方法指定的胃蛋白 酶试剂(1:1 0 0 0 0)o 本标准由中华人民共和国国内贸易部提出。本标准由 全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由国家饲料质量监督检验中心(武汉)负责起草。本标准主要起草人:屈利文、钱防。中华人民共 和国 国家标准动物蛋白质饲料消
2、化率的测定 胃蛋白酶法G B/r 1 7 8 1 1-1 9 9 9D e t e r m i n a t i o n o f d i g e s t i b i l i t y i n a n i ma lp r o t e i n f e e d s-P e p s i n m e t h o d1 范围本标准规定了动物蛋白质饲料消化率的胃蛋白酶测定方法本标准适用于所有动物性蛋白质饲料，不适用于植物性蛋白质或混合饲料消化率的胃蛋白酶测定方法。2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨
3、使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 6 4 3 2-1 9 9 4 饲料中粗蛋白 测定方法 G B/T 6 4 3 3-1 9 9 4 饲料粗脂肪测定方法 G B/T 6 6 8 2-1 9 9 2 分析实验室用水规格和试验方法3 方法原理 脱过脂的试样，用温热的胃蛋白酶溶液，在恒温、持续不断地搅拌下消化1 6 h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白含量。同时，测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白含量。4 试剂 本标准所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯 实验室用水应符合G B/T 6 6 8 2 中三级水的规格4 门0.20 胃 蛋白酶溶液:将6.1 m L浓盐酸稀释至1 0
4、0 0 m L水中(溶液p H l-2)，加热至4 2 -4 5 C,加入2 g 活性为1:1 0 0 0 0 生化级胃蛋白酶 若活 性不是1 e 1 0 0 0 0，可使用活性1:3 0 0 0 生化 级胃 蛋白酶 (不可使用非生化级胃蛋白酶)，应注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶浓度应为每毫升2 0 1 U D，并缓慢搅拌直至溶解勿在加热板上加热胃蛋白酶溶液或配制时过热。临用前配制。4.2 乙醚4.3 丙酮。4.4 定氮试剂:按G B/T 6 4 3 2 中试剂及配制方法规定。采用说明:1)A c)A C中指定为 t:1 0 0 0 0国家质it技术监督局 1 9 9 9 一 0 8 一 1 0
5、批准2 0 0 0 一 0 2 一 0 1 实施G B/r 1 7 8 1 1-1 9 9 95 仪器、设备恒温式平转摇床，:温控范围2 0 -5 0 C，水浴式或空气浴式均可，转速可调(1 5 3 0 0 r/m i n).实验室用样品粉碎机索氏抽提器、脱脂设备:按G B/T 6 4 3 3 中仪器、设备规定。定氮仪器、设备:按G B/T 6 4 3 2 中仪器、设备规定。实验室常用仪器、设备。515253;.;6 试样制备 取具有代表性试样，用四分法缩分至2 0 0 g，然 后粉碎至全部过。.9 0 m m孔筛(2。目)，混匀装于密封容器，保存备用。7 测定步骤7.1 脱脂 称取1-2 g
6、 试样用乙 醚(4.2)脱脂(含脂肪小于1%可不脱脂，含脂肪1 0 0-1 0%建议脱脂，含脂肪大于1 0%则必须脱脂)。脱脂方法可参照G B/T 6 4 3 3 中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后的样品需烘干。了.2 胃蛋白酶消化 称取脱脂烘干(7.1)后的样品若干克(精确至。.0 0 0 2 g，含氮量约5-8 0 m g)于2 5 0 m l带盖磨口瓶中，加1 5 0 m l新配制的并已预热至4 2.4 5 的胃蛋白酶溶液(4-1)，要确保样品完全被胃蛋自酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹 于恒温摇床(5.1)上，于4 5 恒定搅动1 6 h 进行保温消化。7.3 消化残渣的处理 从搅动器上取下磨口
7、瓶，呈4 5 0 角放置，让残渣沉淀1 5 m i n以上，随后在铺有快速滤纸的布氏漏斗上 抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸上，再将磨口瓶保持沉淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内 容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体通过滤纸的 速度应与倾入的速度相同。当上层液体通过滤纸后，于瓶中加人 1 5 m L丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶1 1，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指让丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份 1 5 m l的丙酮进行洗涤，照上 法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁t:残渣两次，并
8、抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移人凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶置于 1 0 5 C 烘箱内烘干了.4 粗蛋白的测定 将上述(7.3)烘千的残渣按G B/T 6 4 3 2 中方法测定粗蛋白含量(Wz)。同时，称取脱脂烘干(7.1)后的样品若干克(精确至。.0 0 0 2 g，含氮量约5 8 0 m g)，直接按G B/T 6 4 3 2 方法测定脱脂未酶解的样品中粗蛋自的含量(w)。8 分析结果的计算及表示8.1 结果按式(1)计算x(%)=W一 WZ Wx 1 0 0.(1)式中:X-一试样的胃蛋白 酶消化率，%;采用说明:L J n o n e方法中，规定使用“rt温搅动器”。G B/T 1 7 8 1 1-1 9 9 9 w 一 脱脂未酶解的原样品中粗蛋白的平均含量，%;W 一 一脱脂酶解后残渣中粗蛋白的平均含量，%。所得结果表示到小数点后一位。8.2 允许差 每个试样脱脂后取两份试料进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。测定结果的相对偏差按G B/T 6 4 3 2 中粗蛋白 测定的相对偏差允许范围。