1、中华 人 民共 和 国 国 家标 准食用菌粗蛋白质含量测定方法G B/T 1 5 6 7 3 一 1 9 9 5Me t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f c r u d e p r o t e i n i n e d i b l e f u n g i1 主题内容与适用范围本标准规定了食用菌中粗蛋白质含量的测定方法。本标准适用于食用菌中粗蛋白质含量的测定。2 弓 用标准G B 1 2 5 3 0 食用菌取样方法G B 1 2 5 3 1 食用菌水分测定3 方法提要或原理 采用半微量凯氏定氮法，即在加速剂存在下，以硫酸破坏样品中有机物，加碱蒸馏，
2、滴定所释放的氨，计算出其含氮量。含氮量乘上换算系数6.2 5 即得样品的粗蛋白 质量。菇类可消化蛋白 质是粗蛋白的7 0%左右，含氮量乘上4.3 8.即为可消化蛋白质的含量。4 试剂 分析中，除另有说明，均限用分析纯试剂、蒸馏水或相当纯度的水。4.1 硫酸(G B 6 2 5):分析纯或化学纯，密度1.8 4 g/m L,4.2 盐酸(G B 6 2 2):密度1.1 8 g/m l。4.3 氢氧化钠溶液 浓度4 0 0 g/L，用分析纯或化学纯氢氧化 钠(G B 6 2 9)配制。4.4 硼酸(G B 6 2 8)溶液 浓度2 0 g/1-，为 蒸馏时的吸收液。4-5 加速剂:将6 0 0
3、g 硫酸钾(H G 3-9 2 0)和1 0 0 g 五水合硫酸铜(G B 6 6 5 C u S O,5 H,O)混匀，充分研磨后过4 0目 筛，试剂瓶内密封保存。4.6 盐酸标准溶液:浓度。.0 5 m o I/L或。.1 m o l/L，用无水碳酸钠或邻苯二甲酸氢钾标定其浓度，精确到小数点后第四位。4.7 甲 基红 一 嗅甲 酚绿 混合指示剂:5 0 m L 浓度为2 g/L 的澳甲 酚绿(H G 3-1 2 2 0)9 5%乙 醇(G B 6 7 9)溶液和 1 0 m 1 一 浓度为2 g/L的甲基红(H G 3-9 5 8)9 5%乙醇溶液混合。5 仪器、设备5，电热鼓风干燥箱5.
4、2 小型植物粉碎机:备有1 m m孔径的金属筛网。5.3 分样筛:备有孔径0.4 2 m m(4 0 目)和孔径0.8 4 m m(2 0 目)筛子。5.4 玻璃研钵:备有研柞。国家技术监督局1 9 9 5 一 0 8 门7 批准1 9 9 6 一 0 1 一 0 1 实施G B/T 1 5 6 7 3 一 1 9 9 55.5 广口瓶:带磨口。5.6 剪刀和小刀5.了 分析天平:感量。.。1 9。5.8 扭力天平。5.9 可调电炉:0-6 0 0 C,5 门0 通风橱5 门1 消煮架:铁制，可使凯氏瓶在消煮时与垂直方向成3 0 0-4 5。角。5.1 2 硬质凯氏瓶:容积1 0 0 m L
5、o5.1 3 半微量凯氏定氮蒸馏装置。5.1 4 半微量滴定管:1 0 m L,5.1 5 弯颈三角漏斗:直径2 5 m m,5.1 6 锥形瓶:2 5 0 m L o6 样品6.1 取祥方法和数量6.1.1 干制品(蘑菇干片、干香菇、黑木耳和银耳等)按G B 1 2 5 3。中规定要求进行。总量不得少于1 0 0 9.6.1.2 鲜菇在每批不同的地方随机取样作为原始样品，总量不得少于1 0 0 0 g o6.2 试样的制备6.2 门干品直接用剪刀剪成小块，在8 0-1 0 0 干燥箱中烘至发脆后冷却，立即用小型植物粉碎机粉碎。弃去开始粉碎出的样品(约占总样十分之一)。粉碎过的祥品 均需过4
6、0 目 筛。未能过筛部分再次粉碎或经研钵内研磨之后再过筛，直至全部样品过筛为止。银耳和木耳样品因质地关系经粉碎后大部分样品不能过4 0目 筛，故要求全部样品过2 0目 筛，过筛后的样品装入清洁的广口瓶内保存备用。样品密封后填写标签，注明品名、日 期、交样单位和取样人等。6.2.2 鲜菇取样后立即切成4 m m厚度的菇片，鲜耳则用手撕成小块均匀地摊在干燥箱内垫有纱布的铁丝网上，5 0 C 鼓风干燥6 h 以上。待样品半干后再逐步提高温度至8 0 -1 叩。样品发脆之后冷却，立即用粉碎机粉碎。其他操作同干品。了 分析步骤7.1 称样:称取试样。.3-0.5 g(蘑菇、香菇、草菇和平菇等高蛋白 质的
7、样品为0.3 g，木耳、银耳和获荃等低蛋白 质含量的样品则为0.5 g)，精确到。.0 0 0 1 g。同时按G B 1 2 5 3 1 中 规定的方法称样测定试样的含水量。7.2 消煮:试样无损地倒入凯氏瓶中，加入加速剂粉末(4.5)3.5 g,混匀，最后加人浓硫酸(4.1)5 m l-,轻轻摇动凯氏 瓶使试样完全湿润。消煮时利用消煮架将凯氏瓶斜放在电 炉上加热。瓶口 加弯颈三角漏斗。开始时缓慢地加热，待瓶内硫酸液沸腾后，调节电 炉温度，防止泡沫冲到凯氏瓶颈上。经常旋转凯氏瓶，直至有机物完全炭化、泡沫消失为止。随后用猛火加热，使溶液不断处于沸腾状态。溶液变清呈绿色之后继续加热。.5 h 后结
8、束。整个过程在通风橱内进行。7.3 蒸馏:装好半微量定氮蒸馏装置。使用前用蒸馏水冲洗干净。在蒸气发生瓶内 加入2/3 3/4 容积的蒸馏水。将冷凝管下端插入盛有1 0 m L 硼酸吸收液(4.4)的2 5 0 m L锥形瓶液面下，吸收液中预先加入5-6 滴混合指示剂(4.7)。通电加热，待蒸气产生后开始蒸馏。从加样口 将凯氏瓶中消煮好的样品液倒入，并用蒸馏水冲洗凯氏瓶数次，确保样品全部加入。立即加入氢氧化钠溶液(4.3)2 0 m L，使样品液呈强碱性。加样口 盖塞封闭，通人蒸气，使反应室内蒸馏液猛烈沸腾，释放出的氨被吸收液所吸收，待吸收液开始变绿色之后继续蒸馏 5 -6 m i n,吸收液总
9、量达 1 0 0 mL左右时停止蒸馏。G B/T 1 5 6 7 3 一 1 9 9 5了4 滴定:取出吸收瓶，用盐酸标准液(4.6)将吸收液由蓝绿色滴定至灰紫色为终点7.5 空白试验:不加试样的加速剂和浓硫酸作为空白样品，按上述步骤同时进行测定 空白试验所消耗的盐酸标准溶液体积须小于。.2 5 m L a8 分析结果的计算8.1 计算粗蛋白质(干基，%)C(v:一 V,)X 0.0 1 4 X 6.2 5m(1一 X)X 1 0 0式中:。盐酸标准溶液的浓度，m o l 八;V,空白试验滴定消耗的盐酸标准溶液体积,m L;V 2 样品滴定消耗的盐酸标准溶液体积，m L;m 样品的质量，9;。.0 1 4氮的摩尔质量,g/m m o L;X 样品含水量，%;6.2 5-氮换算成粗蛋白 质的系数。8.2 允许差 取平行测定结果的算术平均值为测定结果，保留小数后一位。平行测定结果的绝对差值不大于。2%,附加说明:本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由上海市农业科学院食用菌研究所负责起草。本标准主要起草人顾真荣、刘方。