1、I C S6 7 0 5 0X0 4蝠闺中华人民共和国国家标准G B T2 3 2 0 2-2 0 0 8食用茵中4 4 0 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱一串联质谱法D e t e r m i n a t i o no f4 4 0p e s t i c i d e sa n dr e l a t e dc h e m i c a l sr e s i d u e si nm u s h r o o m s-L C M S M Sm e t h o d2 0 0 8 1 2-3 1 发布2 0 0 9 0 5 0 1 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局省士中国国家标准化管理委
2、员会及干扣G B T2 3 2 0 2-2 0 0 8前言1 范围2 规范性引用文件3 原理-4 试剂和材料-5 仪器6 试样制备与保存7 测定步骤8 结果计算9 精密度附录A(资料性刚求)混合标准溶液浓度附录B(资料陆附录)能劈附录C(资料陛附录)附录D(资料性附录)附录E(资料胜附录)目次4 4 0 种农药及相关化学品中、英文名称、方法检出限、分组、溶剂选择和4 4 0 种农药及相关化学品保瞳时帕1、盼测离子对、源内碎裂电压和碰撞气4 4 0 种农药及相关化学品多反直监测(M R M)色谱冈4 4 0 种农药及相关化学品精密度数据表4 4 0 种农药及相关化学晶英文中文名称对照索引(按英文
3、宁母顺序)刖吾本标准的附录A、附录B、附录c、附录D 和附录E 为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。本标准主要起草人：庞困芳、范春林、郑军红，王明林、王雯雯。G B T2 3 2 0 2-2 0 0 8食用菌中4 4 0 种农药及相关化学品残留量的测定液相色谱一串联质谱法G B T2 3 2 0 2-2 0 0 81 范围本标准规定_ r 滑子菇、金针菇、黑木耳和香菇中，1 t 0 种农药及相关化学品(参见附录A 和附录E)残留量液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于滑子菇、金针菇、黑木耳和
4、香菇中4 4 0 种农药及相关化学品的定性鉴别，3 6 4 种农药及相关化学品的定量测定。本标准定量测定的3 6 4 种农药及相关化学品方法检出限为0 0 6p g k g O 6 1m g k g(参见附录A)。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G B T6 3 7 9 1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1 部分：总则与定义(G B T6 3 7
5、9 1 2 0 0 4，I S O5 7 2 51：1 9 9 4，I D T)G B T6 3 7 9 2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2 部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(G B T6 3 7 9 2 2 0 0 4，I S O5 7 2 5 2：19 9 4，I D T)G B T6 6 8 2 分析实验室用水规格和试验方法(G B T6 6 8 22 0 0 8，I S O3 6 9 6：1 9 8 7，M O D)3 原理试样用乙睛匀浆提取，盐析离心。固相萃取柱净化，用乙腈+甲苯(3+1，体积比)洗脱农药及相关化学品，液相色谱串联质谱仪测定外标法定量。4
6、试剂和材料水为G B F6 6 8 2 规定的一级水。4 1 乙睛：色谱纯。4 2 丙酮：色谱纯。4 3 甲苯：色谱纯。4 4 异辛烷：色谱纯。4 5 二氯甲烷：色谱纯。4 6 正己烷：色谱纯。4 7 甲醇：色谱纯，4 8 乙腈+甲苯(3+l，体积比)。4 90 1 甲酸溶液。4 1 05m m o l L 乙酸铵溶液。4 1 1乙腈+水(3+2，体积比)。4 1 2 氯化钠：优级纯。4 1 3无水硫酸钠：分析纯。6 5 0 灼烧4h 贮于干燥器中，冷却后备用。4 1 4 农药及相关化学品标准物质：纯度9 5，参见附录A。4 1 5 农药及相关化学品标准溶液4 1 5 1 标准储备溶液分别称取
7、5m g 1 0m g(精确至0 1m g)农药及相关化学品各标准物分别于1 0m L 容量瓶中，根据标准物的溶解度选甲醇、正己烷、丙酮、乙腈或异辛烷溶解并定容至刻度(溶剂选择参见附录A)。标准储备溶液避光4 保存，可使用一年。4 1 5 2 混合标准溶液(混合标准溶液A、B、C、D、E、F 和G)按照农药及相关化学品的保留时间，将4 4 0 种农药及相关化学品分成A、B、c、D、E、F 和G 七个组，并根据每种农药及相关化学品在仪器上的响直灵敏度，确定其在混合标准溶液中的浓度。本标准对4 4 0 种农药及相关化学品的分组及其混合标准溶液浓度参见附录A。依据每种农药及相关化学品的分组、混合标准
8、溶液浓度及其标准储备液的浓度，移取一定量的单个农药及相关化学品标准储备溶液于1 0 0 m l，容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液避光4 保存，可使用个月。4 1 5 3 基质混合标准工作溶液用样品空白溶液配成不同浓度的基质混合标准工作溶液A、B、c、D、E、F 和G，用于做标准工作曲线。基质混合标准工作溶液应现用现配。4 1 6 固相萃取柱：S e p P a kC a r b o nN H?”，6m l。，1g 或相当者。4 1 7 微7 L 过滤膜(尼龙)：1 3m m 0 2b t m。5 仪器5 1液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源。5 2 分析天平：感量0 1m g 和0
9、0 1g。5 3 离心管：8 0m L。5 4 移液器：1m I，和1 0m L。5 5 鸡心瓶：1 0 0m l。5 6 高速组织捣碎机：最低转速不低于120 0 0r r a i n。5 7 离心机：不低于45 0 0r r a i n。5 8 旋转蒸发器。5 9 氮气吹干仪。5 1 0 样品瓶：2m L，带聚四氟乙烯旋盖。6 试样制备与保存6 1 试样的制备食用菌样品取可食部分切碎，混匀，密封，作为试样，标明标记。6 2 试样的保存将试样置于0。c 4 保鲜保存。7 测定步骤7 1 提取称取2 0g 试样(精确至0 0 1g)于8 0m L 离心管中，加入4 0m I 乙腈，150 0
10、0r r a i n 匀浆提取S e l P a kG a r b o nN H：固相萃取柱是W a t e r s 公司产品的商品名称给出这一信息是为了方便本标准的使用者并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。G B T2 3 2 0 2-2 0 0 81m i n，加入5g 氯化钠再匀浆提取lm i n 42 0 0r m i n 离心5r a i n 取上清液2 0m 1(相当于1 0g 试样量)4 0 水浴旋转浓缩至lm I，左右，待净化。7 2 净化在S e pP a kC a r b o nN H：固相萃取柱中加入约2c m 高无水硫酸钠，置
11、于下接废液瓶的固相萃取装置上。加样前先用4m I。乙腈+甲苯(3 十l，体积比)预洗柱，当液面到达无水硫酸钠的顶部时，迅速将样品浓缩液转移至净化柱上中并更换鸡心瓶接收。用2n i L 乙腈+甲苯(3+l，体积比)洗涤样品瓶，将洗涤液并人萃取柱中，重复此操作3 次。将残留样液转移于萃取柱中。在崮相萃取柱顶端连接5 0m L 贮液器，用2 5m L 乙腈+甲苯(3+1，体积比)洗脱农药及相关化学品。合并于1 0 0n i l。鸡心瓶中-4 0 水浴旋转浓缩至0 5m L 左右。于4 5 下氮气吹干，用1m L 乙腈+水(3+2，体积比)溶解残渣经0 2p m 微孔滤膜过滤后供液相色谱串联质谱仪测定
12、。同时取不含农药及相关化学品的食用菌样品，按7 1 和7 2 步骤制备样品空白提取液，用于配制基质混合标准工作溶液。7 3 液相色谱一串联质谱测定7 3 1A、B、C、D、E、F 组液相色谱-串联质谱测定条件a)色谱柱：Z O R B A XS BC”3 5m，1 0 0n l i 1 I 2】m m(内径)或相当者；b)流动相及梯度洗脱条件见表l；表1流动相及梯度洗脱条件步骤总时间7 r a i n流速(p L m i n)流动相A(0 1 甲酸水)流动相B(乙腈)O00 04 0 09 9 010130 04 0 07 003 0026 0 04 0 06 004 0 039 0 04 0
13、 06 004 0 041 5 0 04 0 04 006 0 O5l9 0 04 0 0109 9 062 3 0 04 0 01 09 9 072 3 0 l4 0 09 9 01 0c)柱温：4 0；d)进样量：1 0“l。；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：正模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0 2 8M P a；i)离子喷雾电压：40 0 0V；j)干燥气温度：3 5 0；k)干燥气流速：1 0L m i n；1)监测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。7 3 2G 组液相色谱一串联质谱测定条件a)色谱柱：Z O R B A XS B C 1 B，3 5t*
14、m，1 0 0m i l l 2 1r a m(内径)或相当者b)流动相及梯度洗脱条件见表2；G B T2 3 2 0 2-2 0 0 8表2 流动相及梯度洗脱条件步骤总时间r a i n流速(,u L m i n)流动相A(5m m o l L 乙酸铵水)流动相B(乙腈)000 04 0 09 9 O1013 0 04 0 07 003 0 0260 04 0 06 0 04 0 0390 04 0 06 004 0 041 50 04 0 04 0 06 0 051 9 0 04 0 0l09 9062 3 0 04 0 0l09 9072 3 0 14 0 09 9010c)柱温：4 0
15、；d)进样量：1 0”L；e)电离源模式：电喷雾离子化；f)电离源极性：负模式；g)雾化气：氮气；h)雾化气压力：0 2 8M P a；i)离子喷雾电压：40 0 0V；j)干燥气温度：3 5 0；k)干燥气流速：1 0I r a i n；1)嘧测离子对、碰撞气能量和源内碎裂电压参见附录B。7 3 3 定性测定在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中。所选择的离子均出现，而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致(相对丰度 5 0，允许土2 0 偏差；相对丰度 2 0 5 0，允许2 5 偏差；相对丰度 1 0 2 0
16、允许3 0 偏差；相对丰度1 0，允许4-5 0 偏差)，则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。7 3 4 定量测定本标准中液相色谱一串联质谱采用外标校准曲线法定量测定。为减少基质对定量测定的影响，定量用标准溶液应采用基质混合标准工作溶液绘制标准曲线，并且保证所测样品中农药及相关化学品的响应值均在仪器的线性范围内。4 4 0 种农药及相关化学品多反应监测(M R M)色谱图参见附录c。7 4 平行试验按以上步骤对同一试样进行平行试验。7 5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8 结果计算液相色谱串联质谱测定采用标准曲线法定量，标准曲线法定量结果按式(1)计算：x；一普揣式中：x，试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(m g k g)；4从标准曲线上得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升(”-g m I，)V 样品溶液定容体积，单位为毫升(m L)；m 样品溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9 精密度本标准精密度数据是按照G B T6 3 7 9 1 和G B T6 3 7 9 2 的规定确定的获得重复性和再现性的值是以9 5 的可信度来计算。本标