1、G B/r 5 4 1 3.2 7-1 9 9 7前言 在婴幼儿配方食品中添加D H A,E P A是近两年的科技成果，对其含量的检测方法尚在探索阶段。本标准给出的方法是在参考了大量国内外文献的基础上，经反复实验、验证而确定的，具有操作简便、快速、灵敏度高的特点。本系列标准从实施之日 起，代替G B 5 4 1 3-5 5,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:刘波、杨金宝、王芸。中华 人
2、民共 和 国 国 家标 准婴 幼 儿 配 方 食 品 和 乳 粉G B/T 5 4 1 3.2 7-1 9 9 7D H A、E P A 的 测 定代替 G B 5 4 1 3-8 5Mi l k p o w d e r a n d f o r m u l a f o o d s f o r i n f a n t a n d y o u n g c h i l d r e n -De t e r mi n a t i o n o f DHA a n d E PA c o n t e n t s，范围和 E P A的方法。本标准规定了用气相色谱法测定D H A本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中
3、D H A和E P A含量的测定。2 方法提要 抽提出样品内的脂肪，经甲基化反应后，以气相色谱 火焰离子化检侧器定量测定样品中的D H A和E P A的含量。3 试剂 所有试剂，如未注明规格，均指分析纯;所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3.1 高峰氏淀粉酶(T a k a-D i a s t a s e).3.2 A水:体积分数_9 5%o34 乙醚。3.5 石油醚:沸程，3 0-6 0 C。3.6 正己烷:色谱纯。3.7 氢氧化钾的甲醇溶液:c(K O H)为4 m o l/L，使用无水甲醇。3.8 标准溶液3.8.1 标准贮备液:准确称取1.O o g 标准鱼油(E P A 1
4、 6 3.9 m g/g,D H A 1 3 5.3 0 m g/g)，用正己 烷溶解并定容至5 O m L(E P A的浓度为3.2 6 7 8 m g/m lD H A的浓度为2.7 0 6 0 m g/m L)，冷冻 保存。3.8.2 标准工作液:取标准贮备液 1.O O m L，用正 己烷烯释并定容至 I O m L(E P A的浓度为0.3 2 6 8 m g/m L,D H A的浓度为。.2 7 0 6 m g/m L)，使用前配制，以防止溶剂挥发而使浓度改变。4 仪器和玻玻器皿 常用实验室仪器及:4 门毛氏抽脂瓶。4.2 离心机。4.3 水浴锅。4.4 振摇器。45 气相色谱仪。
5、国家技术监督局1 9 9 7 一 0 5 一 2 8 批准1 9 9 8 一 0 9 一 0 1 实施G s/T 5 4 1 3.2 7-1 9 9 74.6 火焰离子化检测器。4.7 色1 爵 柱:2 m,1 0%E G S S,G A S-C H R O M Q M/1 0 0 -2 0 0目，不锈钢柱。5 操作步骏5 门f f W,处理5.1.1 含淀粉样品 准确称取 1.0 0 0 o g 样品放人毛氏抽脂瓶中，加入。.1 g T a k a 淀粉酶，再加入 l O m L 4 5-5 0 C 的蒸馏 水，混合均匀后，用氮气排除瓶中空气，盖上瓶塞，置4 5 C 烘箱内3 0 m i n
6、，取出冷却室温。5.1.2 不含淀粉样品 准确称取样品1.0 0 0 o g.放入毛氏抽脂瓶(4.1)中，用 l O m L 6 5 的热水溶解，振摇，使样品完全分 散，水冷至室温。5.2 测定液的制备5.2.1 于上述样品溶液中加入2 m I体积分数为2 5%的氨水(3.2),置于“水浴(3-3)中1 5 m i n，取 出，轻摇，冷至室温。5.2.2 加入1 0 m L乙醇(3.3),混匀。加入2 5 m L乙醚(3.4)，塞上塞子振摇l m i n。加入2 5 m L石油醚 (3.5),塞上塞子振摇l m i n。再加入2 5 m L 石油醚，塞上塞子振摇l m i n。离心或静止，使醚
7、层、水层分开有机层转入烧瓶中。第二次提取加入的试剂为5 m L乙醇,1 5 m l乙醚,1 5 m L石油醚，操作同前。第三次提取不加乙醉，只用1 5 m L乙醚和 1 5 m L石油醚，如上操作。5.2.3 把提取的醚液合并，减压浓缩至近干，用正己烷溶解残留物并定容至 l O m L，摇匀。准确吸取2 m L此液于1 0 m L带盖离心管中，加人。.2 m L氢氧化钾的甲 醇溶液(3-7)，振摇l m i n 以上，放置l O m i n(甲基化反应)。如果有机层混浊，可离心使之澄清。此有机层即为样品待测液。5.3 测定5.3，测定条件 a)进样器温度:2 3 0 C;b)检测器F I D温
8、度:2 5 0 C;。)进样体积:2.O p L;d)灵敏度:1 0-1;e)衰减:S a f)氮气流速:5 0 m L/m i n a 氮气流速:2 5 m L/m i n;空气流速:3 0 0 m L/m i n=g)柱温:1 9 0 0C,5.3.2 定性测定 根据保留时间定性。改变色谱条件，如柱温度、载气流速，使标准组分E P A和D H A的保留时间发生 改 变。如 果 样 品 中 的 某 个 峰 随 标 准 品 中 的 某 个 峰 的 保 留 时 间 有 同 样 的 改 变，即 证 明 样 品 中 含 有 与 标 样相同的某个组分。5.3.3 定量测定 外标定量法。注射一定量的标准工作液进入气相色谱仪，得到E P A和D H A的峰面积A，注射等体积的样品待测液进人色谱仪，得到样品中E P A和D H A的峰面积B,o6 分析结果的衰述样品中E P A或D H A的含量(m g/l 0 0 g)_ 1 0 0 B:c.:VA;m式中:B;样品中组分i(E P A或D H A)对应峰面积;G B/T 5 4 1 3.2 7-1 9 9 7 标准样中 组分i 的质量浓度，m g/m L.V 待测样品的总体积，ml;-一 标准 几 作液中组分i 的峰面积;r 一 样品的质V g.7 允许差同一样品两次测定值之差不得超过两次测定平均值的1 0%