1、SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准S N 0 6 6 5 一 1 9 9 7出口肉及肉制品中雌三醇残留量 检验方法放射免疫法M e t h o df o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f e s t r i o l r e s i d u e sm e a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -R a d i o i mmu n o a s s a y1 9 9 7 一 0 8 门 5 发布1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发 布S r i
2、 0 6 6 5 一1 9 9 7前言 本标准 是根据G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则 第1 单元:标准的起草与表述规则 第1 部分:标准编写的基本规定 及 S N/T 0 0 0 1-1 9 9 5 出口商品中农药、兽药残留量及生物毒素检验方法标准编写的 基本规定 的要求而 进行编写的。其中 测定方法是在原科研成果的基础上，参 照国内外有 关资料，经改进并验证后制定的。本标准同时制定了抽祥和制样方法。测定低限是根据国际上对肉品中雌三醇残留量的最高限量和测定方法灵敏度而制定的。本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国天津进出口商品检
3、验局。本标准主要起草人:何霖。本标准系首次发布的行业标准。中华人民共和国进出口 商品 检验行业标准出口肉及肉制品中雌三醇残留量 检验方法放射免疫法S N 06 65一 199 7M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f e s t r i o l r e s i d u e s i n me a t s a n d me a t p r o d u c t s f o r e x p o r t -Ra d i o i mmu n o a s s a y范围本标准规定了出口肉及肉制品中雌三醇残留量检验的抽样、制样和放射免疫测定方法
4、。本标准适用于出口冻牛肉中雌三醇残留量的检验。抽样和制样2.1 检验批 以不超过 2 5 0 0 件为一检验批。同一检验批内的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。2.2 抽样数量 批量，件最低抽祥数，件 1-2 5 1 2 6-1 0 0 5 1 0 1-2 5 0 1 0 2 5 1-5 0 0 1 5 5 0 1-1 0 0 0 1 7 1 0 0 1-2 5 0 0 2 02.3 抽徉方法 按2.2规定的抽祥件数随机抽取，逐件开启。从每件中至少取一袋作为原始样品。如每件中无小包装或有小包装，但每袋小包装重量超过 2 k g 者，则可用灭菌刀具在抽出的包件中每件割取不少
5、于1 0 0 g.混合后置于清洁容器内，作为混合原始样品。混合 原始 样的 总重量不少 于2 k g。加封后，标明 标记.及时送交实验室。2.4 试样制备 从混合原始样品中取出部分代表性样品。将可食部分放入绞碎机中绞碎.充分混匀，用四分法缩分出不少于5 0 0 g，均分两份，装入 洁净容器内 作为 试样，加 封并标明标 记。2.5 试祥保存 将试样于一1 8 c以下冷冻保存。注:在抽样和制样的操作过程中，必须防止祥品受到污染或发生残留物含量的变化。中华人民共和国国家进出口商品检验局1 9 9 7-0 8-1 5 批准1 9 9 8 一 0 1 一 0 1 实施 tS N 0 6 6 5 一 1
6、 9 9 7测定方法3.1 方法提要 用无水乙醚提取试样中残留的雌三醇，提取液经蒸干，残渣用缓冲液溶解并定容后与雌三醇抗体及碘标记的雌三醇抗原反应，经保温后，加免疫分离剂并离心，吸弃上清液，残渣用 Y 一 放射免疫计数仪进行计数测定，标准曲线法定量。3.2 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。3.2.1 无水乙醚。3.2.2 无水乙醇。3.2.3 二甲基亚砚。3.2.4 活 性炭(6 0 p m),3.2.5 磷酸盐缓冲液:p H7.4。取 8 1 m1.0.0 2 m o l/I磷酸氢二钠溶液与 1 9 ml,0.0 2 mo l/I磷酸二氢钠溶液混合。3.2.6 溶
7、液 A:含有 2 X。牛血清蛋白(B S A)和 1%a 叠氮钠的磷酸盐缓冲液。3.2.7 溶液 B:含有 2%二甲基亚矾(D MF)的溶液 A,3.2.8 雌三醇标准品:纯度)9 9 Y，美国S I GMA公司提供(或相当者)。3.2.9 雌三醇抗体(E,-Ab),4 C保存，北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。3.2.1 0 雌三醇碘标记物(.I-E,);4 C 保存(有效期内使用)，北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。3.2.1 1 分离剂:北京北方免疫试剂研究所提供(或相当者)。3.2.1 2 雌三醇标准储备液:称取4 m g 雌三醇标准品(精确至。.1 m g)，用无水乙醇溶
8、解并定容至1 0 0 m l，一 1 5 C 保存(可保存半年)。3.2.1 3 雌三醇标准中间液:取雌三醇标准储备液 1 M I于 1 0 0 ml容量瓶中，吹干后，用溶液 A(3.2.6)定容，其浓度为4 0 0 n g/mI.,4 C 保存(新鲜配制)。3.2.1 4 雌三醇标准工作液:取适当雌三醇标准中间液，用溶液 A(3.2.6)稀释成浓度为。,5.1 0,2 5.5 0,1 0 0,2 0 0 n g/m I标准工作液(当日 新配)，用以制备标准曲线。3.3 仪器和设备3.3.1 Y 一 放射免疫计数仪。3.3.2 均质器:不低于 1 5 0 0 0 r/m i n,3.3.3 离
9、心机:不低于4 0 0 0 r/mi n,3.3.4 电 热恒温水浴锅:0-6 0 C,3.3.5 微量移液管:5 0-5 0 0 p 1。3.3.6 涡流混均器。3.3.7 具塞离心瓶:5 0 ml。3.3.8 刻度移液管:0.5 -2 0 m L,3.4 测定步骤3.4.1 样液制备 称 取4 g 试样(精确至。.1 g).置于洁净5 0 m 1 具塞 离心瓶中。加入1 0 m l 无 水乙 醚，振荡1 0 m i n后，3 5 0 0 r/m i n 离心5 m i n。用尖嘴吸管吸弃水层，分离乙醚提取液于另一洁净5 0 m L 具塞的离心瓶中。再加入 1 0 mL无水乙醚，按上述步骤重
10、复提取一次。合并两次乙醚提取液，于(4 0 11)C 水浴蒸干。测试前准确加入1 mL溶液 B(3.2.7)以溶解残渣.制成样液。3.4.2 标准曲线的绘制S N 0 6 6 5 一1 9 9 7 取1 8 只 试管并编号，按下述操作过程制备。1 号、2 号作为测 量非特异结合(N S B)用双管。分 别依 次加入2 5 0 p L 溶液A(3.2.6),1 0 0 p L.I-E,(3.2.1 0)，充分混匀.3号、4 号作为测量特异结合(B o)用双管。分别依次加入 5 0 川 溶液A(3.2.6),1 0 0 IA L s I-E,(3.2.1 0),2 0 0 p L E,-A b(3
11、.2.9)，充分混匀.5 -1 8 号为标准管(B)，分别加入5 0 I e L不同浓度雌三醉标准工作液(3-2-1 4)(均做双试验)，每管再依次加入1 0 0 p L I-E 2 0 0 p.L E,-A b.充分混匀。以上各管混匀 后，于(3 7 士 1)C 水浴中放置1 h,最后加入5 0 0 K L免疫分离剂(3.2.1 1)，室温放置1 5 m i n.3 5 0 0 r/m i n 离心1 5 m i n，吸 弃上 清液，上机测定沉淀物的 放射性计数。按式(1)计算BI B。值:BI B。二B 一 N S BB。一 NSB又 1 0 0(1)式中:B/B o 结合率，%;B,特异
12、结合双管(即 3 号、4 号管)计数均值;B 标准工作液各 浓度双管计数均值;NS B非特异结合双管(即 1 号、2 号管)计数均值。求出标准管B/B J%)值后，以此为纵坐标，各标准工作液浓度为横坐标.在半对数坐标纸上绘制标准曲线。3.4.3 样液测定 取两支试管，分别加入 5 0 p L样液、1 0 0 越 -1-E:和 2 0 0 p L E,-A b.按 3.4.2 操作步骤测定，求出B I B。值，然后从标准曲线中查出样液中雌三醇的浓度。3.4.4 空白试验 使用经活性炭脱激素的肉样，按上述测定步骤进行操作。3.5 结果计算和表述 按式(2)计算试样中雌三醇残留含量:X _ C 业
13、二.(2)式中:h 试样中雌三醇残留含量,K g/k g;。从标准曲线上查得样液中雌三醇浓度，n g/m L;V样液最终定容体积，m工 一;功所称试样量+g,往:计算结果应扣除空白值测定低限、回收率测定低限本方法的测定低限为5/回收率牛肉中雌三醇添加浓度及其回收率实验数据:在 5 u g/k g时，回收率为 8 4.8 肠;在 1 0 b eg/k g时，回收率为8 8.5;在2 0 k g/k g 时，回收率为9 5.9%oS N 0 6 6 5 一 1 9 9 7For e wor d T h is s t a n d a r d w a s d r a f t e d i s a c c
14、 o r d a n c e w i t h t h e r e q u i r e m e n t s o f GB/T 1.1 一1 9 9 3 D ir e c t iv e sf o r t h e w o r k o f s t a n d a r d iz a t i o n-Un i t 1:D r a f t i n g a n d p r e s e n t a t i o n o f s t a n d a r d s-P a r t 1:G e n e r a l r u l e sf o r d r a f t i n g s t a n d a r d s a n d
15、 S N/T 0 0 0 1 一1 9 9 5 G e n e r a l r u l e s f o r d r a f t i n g t h e s t a n d a r d me t h o d s f o r d e-t e r min a t i o n o f p e s t i c i d e,v e t e r i n a r y d r u g r e s i d u e s a n d b io t o x i n s i n c o mm o d i t ie s f o r e x p o r t .T h em e t h o d o f d e t e r mi
16、 n a t i o n o f t h i s s t a n d a r d w a s d r a f t e d o n t h e b a s i s o f t h e f u l f i l l e d r e s e a r c h w o r k a n d b yr e f e r r i n g t o r e l e v a n t d o m e s t ic a n d f o r e ig n l i t e r a t u r e s t h r o u g h m o d i f ic a t i o n a n d v e r i f i c a t i o n.I n a d d i-t io n.m e t h o d s o f s a m p l i n g a n d s a m p l e p r e p a r a t io n a r e a l s o s p e c i f i e d i n t h i s s t a n d a r d Th e l i mi t o f d e t e r mi n a t io n in