1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中非甾体类抗炎药残留量检测方法液相色谱 质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊狅 犳狀 狅 狀 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 犪 犾 犪 狀 狋 犻 犻 狀 犳 犾 犪 犿犿 犪 狋 狅 狉 狔犱 狉 狌 犵 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
2、发 布 书书书前言本标准的附录 为规范性附录，附录和附录均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院和中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：于静、彭涛、代汉慧、李建中、安娟、林维宣、岳振峰、唐英章。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 进出口动物源性食品中非甾体类抗炎药残留量检测方法液相色谱质谱 质谱法范围本标准规定了进出口动物源性食品中 种非甾体类抗炎药残留量的液相色谱质谱 质谱测定方法。本标准适用于牛肉、猪肝、兔肝、牛奶和鸡蛋中对乙酰氨基酚、邻乙酰水杨酸（残留标示物：水杨酸）、卡洛芬、酮洛芬、托芬那酸、美
3、洛昔康、氟尼辛、布洛芬、非诺洛芬、甲芬那酸、萘普生、双氯芬酸、吡罗昔康、二氟尼柳、氟比洛芬、萘丁美酮、舒林酸、托美汀、吲哚美辛和苯基丁氮酮残留量的检测。方法提要用乙腈提取试样中残留的非甾体类抗炎药，经正己烷去除脂肪后，采用液相色谱 质谱质谱检测，外标法定量。试剂和材料除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为去离子水或相当纯度的水。乙腈：高效液相色谱级。正己烷：高效液相色谱级。甲醇：高效液相色谱级。甲酸：高效液相色谱级。乙酸铵。无水硫酸钠：灼烧，置于干燥器中备用。乙腈饱和的正己烷：乙腈（）中加入 正己烷（），充分振荡后，静置分层，取上层液体。甲酸水溶液（含 乙酸铵）：准确量取 甲酸（）和称取 乙酸
4、铵（）于容量瓶中，用水定容至。稀释液：甲酸水溶液（含 乙酸铵）（）乙腈（，体积比）。标准品：对乙酰氨基酚、水杨酸、卡洛芬、酮洛芬、托芬那酸、美洛昔康、氟尼辛、布洛芬、非诺洛芬、甲芬那酸、萘普生、双氯芬酸、吡罗昔康、二氟尼柳、氟比洛芬、萘丁美酮、舒林酸、托美汀、吲哚美辛和苯基丁氮酮，纯度大于等于。标准物质信息见附录表。标准储备溶液：称取各药物标准品（）（精确至 ），用乙腈溶解，配制成浓 度 为 的标准储备溶液，冷冻避光保存。中间标准溶液：分别移取 单个药物的标准储备液于 容量瓶中，用乙腈定容至刻度，配制成浓度为 的中间标准溶液，冷藏避光保存。混合标准工作溶液：根据需要用稀释液（）稀释中间标准溶液
5、（）成适合浓度的混合标准工作溶液，现用现配。微孔滤膜：，有机相。犛 犖犜 仪器和设备 液相色谱 质谱质谱仪：配备电喷雾离子源（）。组织捣碎机。天平：感量为 和 。均质器：。振荡器。离心机：。减压浓缩仪。超声波水浴。涡旋混合器。具塞离心管：聚四氟乙烯，。试样制备与保存 牛肉、猪肝、兔肝从原始样品取出有代表性样品约 ，用组织捣碎机充分捣碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于 冷冻避光保存。牛奶从原始样品取出有代表性样品约 ，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于冷藏避光保存。鸡蛋从原始样品取出有代表性样品约 ，去壳后用组织捣
6、碎机搅拌充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样置于冷藏避光保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取和净化称取约试样（精确至 ）于 离心管中，加入适量无水硫酸钠（），再加入 乙腈，用均质器以 均质 ，再用振荡器振摇提取 后，离心 ，收集上清液于 分液漏斗中。残渣用 乙腈再提取一次。合并上清液，加入 乙腈饱和后的正己烷（），振荡 ，静置 ，收集下层液体。水浴中减压浓缩至近干，残留物依次用 乙腈、和 甲酸水溶液（含 乙酸铵）（）溶解，超声波水浴助溶 后，转移至 刻度试管，用 甲酸水溶液（含 乙酸铵）定容到，再加入 乙腈饱和后的正
7、己烷混匀 后静置，取下层液体，离心后过 微孔滤膜（），待测定。基质混合标准溶液的制备称取份约阴性试样（精确至 ）于 离心管中，按照标准曲线最终定容浓度分别加入中间标准溶液（）或混合标准工作溶液（），余下操作同。测定 液相色谱条件 色谱柱：，（内径），或相当者。流动相及洗脱条件（梯度为线性变化）见表。柱温：。流速：。进样量：。犛 犖犜 质谱条件参见附录，其中氮气和氩气纯度均大于等于 。表液相色谱洗脱条件时间 乙腈 甲酸水溶液（含 乙酸铵）色谱测定根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的混合基质标准溶液，待测样液中非甾体类抗炎药的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合基质标准溶液及样液（）等体积参插
8、进样测定。在上述仪器条件下，种非甾体类抗炎药的保留时间参见附录表。液相色谱 质谱 质谱色谱图参见附录图。定性测定按照上述条件测定样品和混合基质标准工作液，如果检测的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于；定性离子对的相对丰度与浓度相当混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。结果计算和表达试样中的残留含量，按式（）计算，计算结果需将空白值扣除。犡犻犃犮犞犃犿 （）式中：犡犻 试样中残留药物含量，单位为毫克每千克（）；
9、犃 样液中药物的峰面积；犮 基质标准溶液中药物的浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 基质标准溶液中药物的峰面积；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限和回收率 测定低限本标准的测定低限为：吡罗昔康、托美汀、酮洛芬、氟尼辛：；对乙酰氨基酚、舒林酸、美洛昔康、氟比洛芬、吲哚美辛、双氯芬酸、苯基丁氮酮、甲芬那酸：犛 犖犜 ；邻乙酰水杨酸（残留标示物：水杨酸）、二氟尼柳、非诺洛芬、布洛芬、萘丁美酮、托芬那酸：；萘普生：；卡洛芬：。回收率见表。表 种非甾体类抗炎药添加回收率（狀）化合物添加浓度（）回收率范围猪肝兔肝鸡蛋牛奶牛肉对乙酰氨基酚 水杨酸 吡罗昔康
10、 舒林酸 托美汀 酮洛芬 萘普生 美洛昔康 氟尼辛 二氟尼柳 非诺洛芬 布洛芬 氟比洛芬 犛 犖犜 表（续）化合物添加浓度（）回收率范围猪肝兔肝鸡蛋牛奶牛肉卡洛芬 萘丁美酮 吲哚美辛 双氯芬酸 苯基丁氮酮 甲芬那酸 托芬那酸 犛 犖犜 附录犃（规范性附录）标准物质信息表犃 非甾体类抗炎药的基本信息英文名称中文名称 号结构式分子式相对分子质量 邻乙酰水杨酸 水杨酸 对乙酰氨基酚 卡洛芬 酮洛芬 托芬那酸 美洛昔康 犛 犖犜 表 犃（续）英文名称中文名称 号结构式分子式相对分子质量 氟尼辛 布洛芬 非诺洛芬 甲芬那酸 萘普生 双氯芬酸 吡罗昔康 二氟尼柳 氟比洛芬 犛 犖犜 表 犃（续）英文名称中
11、文名称 号结构式分子式相对分子质量 萘丁美酮 舒林酸 托美汀 吲哚美辛 苯基丁氮酮 犛 犖犜 附录犅）（资料性附录）质谱条件表犅 质谱条件电离方式 毛细管电压 源温度 去溶剂温度 锥孔气流氮气，去溶剂气流氮气，碰撞气压氩气，监测模式多反应监测表 犅 多反应监测条件化合物电离方式 母离子子离子驻留时间锥孔电压碰撞能量 保留时间 对乙酰氨基酚 水杨酸 吡罗昔康 舒林酸 托美汀 酮洛芬 萘普生 美洛昔康 氟尼辛 二氟尼柳 ）附录所列参数是在 质谱仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。犛 犖犜 表 犅（续）化合物电离方式 母离
12、子子离子驻留时间锥孔电压碰撞能量 保留时间 非诺洛芬 布洛芬 氟比洛芬 卡洛芬 萘丁美酮 吲哚美辛 双氯芬酸 苯基丁氮酮 甲芬那酸 托芬那酸 离子用于定量。犛 犖犜 附录犆（资料性附录）标准物质质量色谱图图 犆 种非甾体类抗炎药液相色谱 质谱质谱多反应监测色谱图犛 犖犜 图 犆（续）犛 犖犜 图犆（续）犛 犖犜 图 犆（续）犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓 犲犃犻 狊狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲，犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊犅犪 狀 犱犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲
13、犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲 犼 狌 狉 犻 狊 犱 犻 犮 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲 狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犆 犺 犻 狀 犲
14、狊 犲犃 犮 犪 犱 犲 犿 狔狅 犳 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犪 狀 犱犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳犘 犚 犆犪 狀 犱犛 犺 犲 狀 狕 犺 犲 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳犘 犚 犆犕 犪 犻 狀犱 狉 犪 犳 狋 犲 狉 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋
15、犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲：犢 狌犑 犻 狀 犵，犘 犲 狀 犵犜 犪 狅，犇 犪 犻犎 犪 狀 犺 狌 犻，犔 犻 犑 犻 犪 狀 狕 犺 狅 狀 犵，犃 狀 犼 狌 犪 狀，犔 犻 狀犠 犲 犻 狓 狌 犪 狀，犢 狌 犲犣 犺 犲 狀 犳 犲 狀 犵犪 狀 犱犜 犪 狀 犵犢 犻 狀 犵 狕 犺 犪 狀 犵 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲狅 犳 狋 犺
16、 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲 狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犖 狅 狋 犲：犜 犺 犻 狊犈 狀 犵 犾 犻 狊 犺犞 犲 狉 狊 犻 狅 狀，犪 狋 狉 犪 狀 狊 犾 犪 狋 犻 狅 狀犳 狉 狅 犿狋 犺 犲犆 犺 犻 狀 犲 狊 犲狋 犲 狓 狋，犻 狊狊 狅 犾 犲 犾 狔犳 狅 狉犵 狌 犻 犱 犪 狀 犮 犲 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊狅 犳 狀 狅 狀 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 犪 犾犪 狀 狋 犻 犻 狀 犳 犾 犪 犿 犿 犪 狋 狅 狉 狔犱 狉 狌 犵 狊 犻 狀 犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳 犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀 犳 狅 狉犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲