1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 狔 狆 狉 狅 犱 犻 狀 犻 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犌 犆 犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前言本标准的附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入
2、境检验检疫局。本标准主要起草人：丁慧瑛、谢文、陈笑梅、将晓英、周旭、姚亮、卫锋。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口食品中嘧菌环胺残留量检测方法气相色谱质谱法范围本标准规定了食品中嘧菌环胺残留量的气相色谱质谱检测及确证方法。本标准适用于大米、大豆、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、花生、茶叶、牛肉、鸡肉、虾肉、蜂蜜中嘧菌环胺残留量的检测和确证。方法提要试样中残留的嘧菌环胺经正己烷丙酮（）提取，用凝胶渗透色谱柱和丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化，气相色谱质谱检测和确证，外标法定量。试剂和材料除另有说明外，所用的有机试剂均为色谱纯，水为蒸馏水。正
3、己烷。丙酮。环己烷。乙酸乙酯。甲醇。氨水：分析纯。盐酸：分析纯。盐酸溶液：量取 盐酸，加适量水稀释至 。氯化钠：分析纯。无水硫酸钠：分析纯，灼烧，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱：，或相当者。嘧菌环胺（）标准物质：纯度大于，分子式：相对分子质量：号：。嘧菌环胺标准溶液：准确称取适量的嘧菌环胺标准物质，用丙酮配成浓度为 的标准储备液。根据需要用丙酮稀释至适当浓度的标准工作液。标准储备液在 冰箱中保存，有效期为 个月，标准工作液在冰箱中保存，有效期为个月。仪器和设备 气相色谱质谱仪：配有电子轰击源（）。旋涡混合器。离心机：转速大于 。氮吹仪。旋转蒸发器。均质
4、器。固相萃取装置。多功能食品搅拌机。粉碎机。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 凝胶渗透色谱仪。试样制备和保存 试样制备 茶叶、粮谷类取代表性样品约 ，经粉碎机粉碎并通过 圆孔筛，混匀，装入洁净容器内密封，标明标记。蔬菜、水果及坚果类取代表性样品约 ，将其可食部分先切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记。畜、禽、水产品类取代表性样品约 ，将其可食部分切碎后，用多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记。蜂产品类取代表性样品约 ，未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过 的水浴中温热，等样品全部融化后搅匀，
5、迅速冷却至室温。在融化时应注意防止水分挥发。装入洁净容器内密封，并标明标记。试样保存茶叶、粮谷、蜂产品、坚果类等试样于以下保存；蔬菜、水果、蓄、禽、水产品类等试样于 以下保存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生嘧菌环胺残留量的变化。检测步骤 提取 虾肉称取（精确至 ）试样，加入 水混匀，加入 正己烷丙酮（）混合溶液，以 均质 ，加入氯化钠，摇匀，并于 离心 。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入 正己烷丙酮（）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在 水浴中减压浓缩至近干。准确加入 环己烷乙酸乙酯（）溶解残渣，供凝胶色谱净化。蜂蜜称取（精确至 ）试样，加入 水混匀，加入 正己烷丙酮（）涡
6、旋混匀 ，加入氯化钠，摇匀，并于 离心 。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入 正己烷丙酮（）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在 水浴中减压浓缩至近干。准确加入 环己烷乙酸乙酯（）溶解残渣，供凝胶色谱净化。大米、大豆、花生、茶叶、小菘菜、甜豌豆、梨、柑桔、牛肉、鸡肉称取（茶叶称取）（精确至 ）试样，加入 水混匀（茶叶、大米和花生需放置），加入 正己烷丙酮（）混合溶液，以 均质 ，加入氯化钠，摇匀，并于 离心 。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入 正己烷丙酮（）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在 水浴中减压浓缩至近干。准确加入 环己烷乙酸乙酯（）溶解残渣，供凝胶色谱净化。净化
7、凝胶色谱净化 凝胶色谱净化条件）凝胶净化柱：（内径）；填料：，或相当者（在使犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售用前需先做淋洗曲线）；）流动相：环己烷乙酸乙酯（）；）流速：；）样品定量环：；）收集时间：。凝胶色谱净化步骤将提取液转移到离心管中，离心 ，将上清液转移到凝胶渗透色谱仪的样品瓶中，按 条件净化，将收集液在 以下水浴减压浓缩至近干，加入 甲醇溶解后，加入 水混匀。丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化将丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱安装在固相萃取装置上，加入 甲醇，弃去流出液，再加入 盐酸溶液，弃去流出液。加入 所得溶液，加入 甲醇水（），弃去流出液，抽真空至尽干，再加入 氨水
8、甲醇（），收集 流出液。在 水浴中减压浓缩至近干。准确加入 丙酮溶解残渣并定容，供 检测。检测 气相色谱质谱条件）色谱柱：石英毛细管柱，（内径）（膜厚），或相当者；）色谱柱温度：（）（）；）进样口温度：；）接口温度：；）载气：氦气，纯度大于等于 。流速：；）进样量：；）进样方式：脉冲不分流进样，脉冲压力 ，延时 ，后开阀；）离子源：电子轰击源（）；）电离能量：；）溶剂延迟时间：；）检测方式：选择离子监测方式；）选择离子及相对丰度：见表。表选择离子和相对丰度选择离子（）（定量）相对丰度 定量根据样液中嘧菌环胺含量的情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中嘧菌环胺响应值应在仪器检测
9、的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样检测。在上述色谱条件下，嘧菌环胺的保留时间约为 ，标准品的总离子流色谱图参见附录中图。确证对标准溶液及样液均按 规定的条件进行检察，如果样液与标准溶液在相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证，在扣除背景后的样品谱图中，所选择离子全部出现，同时所选择的离子的离子丰度比与标准品相关离子的相对丰度一致，波动范围符合表的最大容许偏差之内（见表），可判定样品中存在嘧菌环胺。被确证的样品可判定为嘧菌环胺阳性检出。嘧菌环胺标准品的质谱图参见附录中图。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售表质谱相对离子丰度最大容许偏差相对离子丰度（基峰）容许的相对偏差
10、空白试验除不加试样外，均按上述检测步骤进行。结果计算用色谱数据处理软件或按式（）计算试样中，嘧菌环胺的残留含量：犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样中嘧菌环胺残留量，单位为毫克每千克（）；犃 样液中嘧菌环胺的峰面积；犮 标准工作液中嘧菌环胺的浓度，单位为微克每毫升（）；犞 最终样液定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作液中嘧菌环胺峰面积；犿 最终样液所代表的试样量，单位为克（）。方法检测低限和回收率 检测低限本方法的检测低限：蜂蜜和虾肉为 ，其他样品为 。回收率样品的添加浓度及回收率的实验数据见表。表样品的添加浓度及回收率的实验数据样品添加浓度（）回收率大米 甜豌豆 小松菜 梨 样品添加浓度（）回收
11、率柑桔 花生 茶叶 牛肉 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售表（续）样品添加浓度（）回收率鸡肉 虾肉 样品添加浓度（）回收率蜂蜜 大豆 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（资料性附录）色谱图和质谱图图犃 嘧菌环胺标物质的总离子流色谱图图犃 嘧菌环胺标准物质的质谱图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狀 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫
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