1、SN中华人民共和国出人境检验检疫行业标准S N/T 0 8 0 0.4-1 9 9 9进 出 口 粮 食、饲 料尿素酶活性测定方法C e r e a l s a n d f e e d s t u f f s f o r i m p o r t a n d e x p o r t-Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f u r e a s e a c t i v i t y1 9 9 9 一 1 2 一 0 1 发布2 0 0 0 一 0 5 一 0 1 实施中华人民共和国国家出人境检验检疫局发 布S N/T 0 8 0 0.4-
2、1 9 9 9前言 本标准在文本格式上是按照 G B/T 1.1-1 9 9 3 标准化工作导则第 1 单元:标准的起草与表述规则第1 部分:标准编写的基本规定 的要求编写的。本标准在Z B X 1 4 0 2 4-1 9 9 0 出口 油籽饼粕脉酶活性测定方法 的基础上，等效采用了A A C C 2 2-1 9 9 0 尿酶活 性 和I S O 5 5 0 6:1 9 8 8 两种方法 大豆制品 尿素酶活性的 测定。本标准从实施之日 起，同时代替Z B X 1 4 0 2 4-1 9 9 0,本标准由中华人民共和国国家出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位:中 华人民 共和国黑龙江出入境
3、检验检疫局。本标准主要起草人:戴晓武、郭祥云、周立君。中 华人民共和国出人境检验检疫行业标准进 出 口粮 食、饲 料尿素酶活性测定方法S N/T 0 8 0 0.4-1 9 9 9代替 Z B X 1 4 0 2 4-1 9 9 0Ce r e a l s a n d f e e d s t u f f s f o r i mp o r t a n d e x p o r t-Me t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f u r e a s e a c t i v i t y范围本标准规定了测定尿素酶的p H增值法和盐酸中和法。本标准适
4、用于大豆饼、粕、粉等中尿素酶活性的测定。2 引用标准 下列标准 所包含的 条文，通过在本标准中 引用而构成为本标准的条文。本标准出 版时，所示版 本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 6 0 1-1 9 8 8 化学试剂 滴定分析(容量分析)用标准 溶液的制备 S N/T 0 7 9 8-1 9 9 9 进出口 粮油、饲料检验 检验名词术语 S N/T 0 7 9 9-1 9 9 9 进出口粮油、饲料检验 检验一般规则 S N/T 0 8 0 0.1-1 9 9 9 进出口粮油、饲料检验 抽样和制样方法 S N/T 0 8 0 0.1
5、9-1 9 9 9 进出口 粮食、饲料 水分及挥发物检验方法定义 本标准采用S N/T 0 7 9 8 的定义。4 抽样与制样 本标准按S N/T 0 8 0 0.1 的规定执行。5 检验方法5.1 方法 15.1.1 方法原理 试样与缓冲尿素溶液反应，使试样中的尿素酶分解尿素，释放出氨基氮，测定 溶液的p H值，以p H值的增量表示。5.1.2 试剂5.1.2.1 磷酸缓冲溶 液:将3.4 0 3 g 磷酸二 氢钾(K H z P O,)和4.3 5 5 g 磷酸氢二钾(K 2 H P 0 4)溶解并稀释至 1 0 0 0 mL。临用前，以强酸或强碱调节其 p H值至 7.0，其使用期限不超
6、过 9 0 天。5.1.2.2 缓冲尿素溶液:溶解1 5 g 尿素(N H 2 C O N H 2)于5 0 0 m L磷酸缓冲溶液中。加人5 m L甲 苯，用于防腐和防止霉菌生长。按上法调节其p H值至7.0.中华人民共和国国家出人境检验检疫局1 9 9 9-1 2 一 0 1 批准2 0 0 0 一 0 5-0 1 实施S N/T 0 8 0 0.4-1 9 9 95.1.3 仪器设备5.1.3.1 分析天平:感量0.1 m g,5.1.3.2 研磨器:易于清 理，研磨过程中 无明 显发热，并能达到要求的磨粉细度。5.1.3.3 恒温水浴:能控制在(3 0 士。.5)0C a5.1.3.4
7、 p H计:备有玻璃电 极和甘汞电 极，灵敏度不低于士。.0 2 p H单位，同时附有温度补偿。5.1.3.5 试管:直径 2 2 mm，长 1 5 0 m m，具橡胶塞。5.1.3.6 1 0 m L烧杯。5.1.3.7 1 0 m L单刻度移液管。5.1.3.8 精密计时器。5.1.3.9 标准筛.5.1.4 分析步骤 用研磨器将1 0 g 样品 磨碎，但无明显发热，通过6 0 目 标准筛的 量不少于6 0。收集全部粉碎物于广口瓶中，并小心混匀。准确称取试样。2 0 0 g，放人试管内，用移 液管加1 0 m L 缓冲的尿素溶液，塞好橡胶塞，摇匀。置于(3。士 0-5)水浴中，记时.隔5
8、m i n 放入第二个与此相同的试管做平行实验。另称取试样。.2 0 0 g，放入另一试管内，加1 0 m L 磷酸缓冲溶 液，塞好橡胶塞，摇匀，作为空白 试验。与前一个试管间隔5 mi n 置于同一水浴中。在消 化过程中，每隔5 m i n 将试管内 容物都摇匀一次.每个试管均保温3 0 m i n 后，从水浴中取出，倒出上清 液于小 烧杯中。并在从水浴中取出 后恰好5 m i n 时，测定p H值读数。注:p H计工作前须预热3 0 min以上，玻璃电极须在燕馏水中浸泡活化 2 4 h以上，方可使用，防止所有玻璃容器或 电极的污染。如果p H计不能迅速给出稳定的读数，应查清原因.甘汞电极的
9、多孔组织如蒙上了大豆的可溶性成 分，也常影响测定结果.5.1.5 结果计算 主体试验与空白 试验的p H值之差为尿素酶活 性。结果为两次检测数据的算术平均值，取小数点后两位。5.1.6 允许差 对燕熟和未经蒸熟的产品，同一实验室的双试验结果允许差分别为。.0 3 和。.1 0 p H单位。而不同实验室间的允许差分别为。.0 5 和。.1 5 p H单位。5.2 方法 25.2.1 方法原理 将磨碎的试样与缓冲的尿素溶液混匀，在3 0 保存3 0 m i n 后，用过量的盐酸中 和释放出氨，用氢氧化钠标准溶液回滴过量的盐酸，测得氨基氮的量，以每分钟样品释放氨基氮的毫克数表示。5.2.2 试剂5.
10、2.2.1 缓冲尿素溶液p H 6.9-7.0:将4.4 5 g 磷酸氢二钠(N a,H P O,2 H 2 0)和3.4 0 g 磷酸二氢钾(K H 2 P O,)溶于水，稀释至1 0 0 0 m L制得缓冲溶液。将3 0 g 尿素(N H,C O N H )溶于缓冲液中。制备液的贮存有效期为一个月。5.2-2.2 盐酸溶液,(H C I)=0.1 m o l/L.5.2.2.3 0.1 mo l/L氢氧化钠标准溶液:按GB/T 6 0 1 配制标定。52.3 仪器设备5.2.3.1 标准筛。5.2-3.2 电位滴定仪或p H计:灵敏度为0.0 2 p H单 位，备有自 动滴定管和磁力 搅拌
11、器。5.2-3.3 滴定瓶或 5 0 m L烧杯。5.2-3.4 具塞磨口 试管:直径 1 8 m m，长1 5 0 m m.S N/T 0 8 0 0.4-1 9 9 95.2-3.5 其他仪器见 5.1.3 条。5.2.4 分析步骤 用 研磨器研磨1 0 g 样品，并 全部通过8 0 目 标准筛。在产品 特殊的情况下(如高水分和含有高挥发性物质的产品)，可在室温下 进行预干燥处 理后研磨。计算结果时，应考虑预干燥处理而造成的质量损失。试 管中 称 取 试 样 约。.2 g，准 确 至0.1 m g,对于 尿素 酶活性高于1 m g/(g m i n)的样品，试样可减至0.0 5 g,试样
12、含脂肪量高于1 0 0 o(二/二)时，建议检验前用冷抽提进行脱脂.用移液管加入 1 0 mL缓冲尿素溶液于盛有试样的试管中，迅速加塞并激烈振摇。立即将试管放入(3。士。-5)的恒温水浴中，保持3 0 m i n，用精密计时器计时，用移液管立即 加人 1 0 m L 0.1 m o l/L的盐酸溶液，快速冷却至 2 0 0C，定量转移试管内容物至滴定瓶中，用每次 5 m L的蒸馏水淋浴试管两次，并入滴定 瓶中。迅速用氢氧钠标准溶液回 滴至p H 4.7 0，最好采用电 位滴定仪。另 取一同样试管，加 入与主体测定等量的试样，再加人1 0 m L 缓冲尿素溶液和1 0 m L 盐酸 溶液。立刻加
13、塞 并剧烈振摇，作为空白 试验。随即放人同 一恒温水浴中，与主体试验同样的方法，保持3 0 m i n，冷却至2 0 0C，移内 容物于 滴定瓶，用氢氧化钠标准溶液滴定至p H 4.7 0,5.2.5 结果计算 按式(1)计算尿素酶活性U(m g/(g mi n);(V。一 V,)X 1 4 X T30 X m(1)式中:V o 空白实验所耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL;V,主体实验所耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL;T-氢氧化钠标准溶液的 浓度，m o l/L;m 试样的质量，9。按式(2)换算其以干态基础计的尿素酶活性U.U-(2)式中:M 试样按照S N/T 0 8 0 0.1 9 测定的水分及挥发物的质量百分率，%。结果为两次检测数据的算术平均值，取小数点后两位。5.2.6 允许差 同一分析者采用同一仪器对同一试样快速连续地进行两次测定值之间的差应不超过算术平均值的l o%.