1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量的检测方法液相色谱 质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犵 犾 狌 犮 狅 犮 狅 狉 狋 犻 犮 狅 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 狊 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前
2、言本标准的附录 为规范性附录，附录和附录为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：林维宣、谢文、康庆贺、孙兴权、肖珊珊、田苗、奚君阳、于灵。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售进出口动物源性食品中糖皮质激素类兽药残留量的检测方法液相色谱 质谱 质谱法范围本标准规定了进出口动物源性食品中曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、地塞米松、氟米松、曲安奈德残留量测定液
3、相色谱 质谱质谱检测方法。本标准适用于猪肉、猪肾中糖皮质激素类兽药残留量的检测和确证。方法提要样品先加入醋酸铵缓冲溶液和 盐酸葡萄糖醛甙酶 芳基硫酸酯酶水解，再用乙酸乙酯提取，提取液经 固相萃取小柱净化，液相色谱 质谱质谱测定和确证，外标法定量。试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。乙腈：高效液相色谱级。正己烷：高效液相色谱级。乙酸乙酯：高效液相色谱级。甲醇：高效液相色谱级。乙酸铵。冰乙酸。无水硫酸钠：灼烧，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。盐酸葡萄糖醛甙酶 芳基硫酸酯酶：含 盐酸葡萄糖醛甙酶 ，芳基硫酸酯酶 。甲醇 水（，体积比）甲醇与 水混合。甲醇 水（，体积比
4、）。甲醇 水（，体积比）甲醇与 水混合。醋酸铵缓冲溶液：溶解 醋酸铵于 水中，用冰乙酸调节溶液 值到 ，最后用水稀释至。标准品纯度大于等于。标准品信息见附录表。糖皮质激素标准储备溶液：称取适量标准品（），用甲醇溶解配制成浓度为 的标准储备溶液，冷冻保存，有效期个月。标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成地塞米松溶液浓度分别为、和 ，泼尼松龙的溶液浓度（猪肉）分别为、和 ，曲安西龙、氢化可的松、泼尼松、氟米松、曲安奈德混合溶液浓度分别为、和 。临用前现配。无水硫酸钠柱：（内径）筒形漏斗，底部垫 脱脂棉，再装 无水硫酸钠。固相萃取柱：（），或相当者。有机相微孔滤膜：。仪器和设备 高
5、效液相色谱 质谱质谱仪：配有电喷雾离子源。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 旋转蒸发器。粉碎机。均质器。旋涡混合器。离心机：。氮吹仪。天平：感量为 和 。固相萃取装置。恒温箱。试样制备与保存从所取全部样品中取出有代表性样品约 ，用粉碎机粉碎，混合均匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。将试样于 冷冻保存。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。测定步骤 提取称取试样（精确到 ）置于 具塞塑料离心管中，加 甲醇，再加入 醋酸铵缓冲溶液（）和 盐酸葡萄糖醛甙酶 芳基硫酸酯酶（），以 混匀 ，于恒温箱中 培养，以 离心 ，量取 上清液，加入
6、乙酸乙酯，以 混匀 ，以 离心 ，将上层乙酸乙酯提取液过无水硫酸钠柱，滤液收集于浓缩瓶中，样品残渣再加入 乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取液，在 以下水浴减压浓缩至近干。净化 柱（）使用前依次用 甲醇和 水预洗。用 醋酸铵缓冲溶液（）溶解残渣，将溶液转移至 柱，弃去流出液，用 水和 甲醇水溶液（）依次洗涤，弃去流出液，负压抽干，甲醇洗脱，收集全部洗脱液，在 以下水浴减压浓缩至近干，用 甲醇 水（）定容，混匀，将溶液通过 滤膜，供液相色谱 质谱质谱仪测定。测定 液相色谱 质谱质谱条件）色谱柱：柱，（内径），或相当者；）流动相：乙腈 水，梯度见表；表梯度洗脱程序时间 乙腈水 犛 犖犜 版权
7、所有 禁止翻制、电子传阅、发售）流速：；）进样量：；）离子源：电喷雾离子源；）扫描方式：正离子扫描；）检测方式：多反应监测；）雾化气、气帘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录；）监测离子对（）：参见附录表。高效液相色谱 质谱质谱测定根据试样中被测样液的含量情况，选取待测物的响应值在仪器线性响应范围内的浓度进行测定，如超出仪器线性响应范围应进行稀释。在上述色谱条件下曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、地塞米松、氟米松、曲安奈德的参考保留时间约分别为、，标准溶液的选择性离子流图参见附录中图。液相色谱 质谱质谱确证按照液相色谱 质谱质
8、谱条件测定样品和标准工作溶液，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中待测物质的保留时间偏差在 之内。定量测定时采用标准曲线法。定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（）计算试样中糖皮质激素残留含量，计算结果需扣除空白值：犡犻犮犻犞犿（）式中：犡犻 试样中糖皮质激素类残留量，单位为微克每千克（）；犮犻 从标准曲线上得到的糖皮质激素溶液浓度，单位为纳克每毫升（）；犞 样液最终定
9、容体积，单位为毫升（）；犿 最终样液代表的试样质量，单位为克（）。测定低限（犔 犗 犙）和回收率 测定低限（犔 犗 犙）猪肉：地塞米松方法测定低限为 ，泼尼松龙方法测定低限为，曲安西龙、氢化可的松、泼尼松、氟米松、曲安奈德方法测定低限为 。猪肾：地塞米松方法测定低限为 ，曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、氟米松、曲安奈德方法测定低限为 。回收率在不同添加浓度的回收率数据见表。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售表回收率数据基质化合物添加浓度（）回收率猪肉曲安西龙泼尼松龙氢化可的松泼尼松地塞米松氟米松曲安奈德 基质化合物添加浓度（）回收率猪肾曲安西龙泼尼松龙氢化可的松泼尼松地塞米松
10、氟米松曲安奈德 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犃（规范性附录）糖皮质激素标准品信息表 犃 糖皮质激素类药物标准品信息名称英文名称 号分子式相对分子质量曲安西龙 泼尼松龙 氢化可的松 泼尼松 地塞米松 氟米松 曲安奈德 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犅（资料性附录）犃 犘 犐 犔 犆 犕 犛犕 犛系统电喷雾离子源参考条件）监测离子对及电压参数：）电喷雾电压（）：；）雾化气压力（）：（）；）气帘气压力（）：（）；）辅助气流速（）：（）离子源温度（）：；）碰撞气（）：（）；）离子对、去簇电压（）、碰撞能量（）碰撞室出口电压（）见表。表 犅 离子对、去簇电压（犇 犘
11、）碰撞气能量（犆 犈）碰撞室出口电压（犆 犡 犘）名称离子对去簇电压（）碰撞气能量（）碰撞室出口电压（）曲安西龙 泼尼松龙 氢化可的松 泼尼松 地塞米松 氟米松 曲安奈德 为定量离子对。）非商业性声明：附录所列参数是在 质谱仪完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家和型号的仪器。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售附录犆（资料性附录）标准质量色谱图）图 犆 曲安西龙、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、地塞米松、氟米松、曲安奈德标准品的选择性离子流图犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓
12、犃狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓，犃 狀 狀 犲 狓犅犪 狀 犱犆狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲 犱狅 犳 犮 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犪 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犪 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 犪 狋 犻 狅
13、 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犔 犻 犪 狅 狀 犻 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犣 犺 犲 犼 犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋
14、犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪，犆 犺 犻 狀 犲 狊 犲犃 犮 犪 犱 犲 犿 狔狅 犳 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲，犎 犲 犻 犾 狅 狀 犵 犼 犻 犪 狀 犵犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪
15、狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犔 犻 狀犠 犲 犻 狓 狌 犪 狀，犡 犻 犲犠 犲 狀，犓 犪 狀 犵犙 犻 狀 犵 犺 犲，犛 狌 狀犡 犻 狀 犵 狇 狌 犪 狀，犡 犻 犪 狅犛 犺 犪 狀 狊 犺 犪 狀，犜 犻 犪 狀犕 犻 犪 狅，犡 犻 犑 狌 狀 狔 犪 狀 犵，犢 狌犔 犻 狀 犵 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪狆 狉 狅 犳 犲 狊 狊 犻 狅 狀 犪 犾 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犳 狅 狉犲 狀 狋 狉 狔 犲 狓 犻 狋 犻 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狇 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻
16、 狀 犲狆 狉 狅 犿 狌 犾 犵 犪 狋 犲 犱犳 狅 狉 狋 犺 犲犳 犻 狉 狊 狋 狋 犻 犿 犲 犖 狅 狋 犲：犜 犺 犻 狊犈 狀 犵 犾 犻 狊 犺犞 犲 狉 狊 犻 狅 狀，犪狋 狉 犪 狀 狊 犾 犪 狋 犻 狅 狀犳 狉 狅 犿狋 犺 犲犆 犺 犻 狀 犲 狊 犲狋 犲 狓 狋，犻 狊狊 狅 犾 犲 犾 狔犳 狅 狉犵 狌 犻 犱 犪 狀 犮 犲 犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犵 犾 狌 犮 狅 犮 狅 狉 狋 犻 犮 狅 狊 狋 犲 狉 狅 犻 犱 狊 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀 犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳 犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犫 狔犔 犆 犕 犛犕 犛狅 犳狋 狉 犻 犪 犿