1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法酶联免疫吸附法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狕 犲 犪 狉 犪 犾 犪 狀 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犈 狀 狕 狔 犿 犲 犾 犻 狀 犽 犲 犱 犻 犿犿 狌 狀 狅 狊 狅 狉 犫 犲 狀 狋 犪 狊 狊 犪 狔 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照
2、给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国安徽出入境检验检疫局。本标准主要起草人：郑文杰、赵卫东、刘?、贺艳、朱梦栩、万宇平、冯才伟、赵正苗。犛 犖犜 进出口动物源性食品中玉米赤霉醇残留量的检测方法酶联免疫吸附法范围本标准规定了动物性食品中玉米赤霉醇残留量的酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪肉、牛肉、鸡肉、羊肉和牛奶中玉米赤霉醇残留量的筛选检测。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
3、文件。分析实验用水规格和试验方法方法提要鲜奶样品酶解后稀释即可用间接竞争性酶联免疫吸附法进行检测；肉类样品用乙腈提取玉米赤霉醇，萃取净化后，用间接竞争性酶联免疫吸附法进行检测。试剂和材料除另有要求外，所有试剂均为分析纯，水为 规定的一级水。乙腈。三氯甲烷。正己烷。葡萄糖苷酸酶芳基硫酸酯酶。玉米赤霉醇酶联免疫试剂盒（参见附录）。仪器和设备 均质器。离心机。旋涡混合器。酶标仪。氮吹仪。温育培养箱。单道微量加样器：，。多通道微量加样器：可调。犛 犖犜 样品制备与保存从全部原始样品取出有代表性样品约 ，将均质混匀的样品分成两等份，将分好的试样装入洁净容器，加封并做标识，在制样的操作过程中，应防止样品污
4、染或发生残留物含量的变化。将试样存放于 中保存。样品测定 鲜奶样品取 新鲜牛奶到 离心管中，加入葡萄糖苷酸酶芳基硫酸酯酶（），置于 水浴酶解；取出 于另一 离心管中，加入 复溶液进行稀释，混匀；取出 用于分析。肉类样品称取（精确至 ）样品，加入 去离子水，加入葡糖苷酸酶芳基硫酸酯酶混匀，水浴酶解；取出加入 乙腈，振荡 ，以上离心 ；取上清液，加入 三氯甲烷，加入正己烷，涡旋振荡 ，以上离心 ；去除上层正己烷，取中间层吹干，加入复溶液（见附录中）旋涡溶解，取 到 离心管中，加入 复溶液混合，取出 用于分析。测定步骤 试剂的制备 复溶工作液提供的复溶工作液为浓缩液。使用前用蒸馏水将复溶工作液稀释倍
5、使用。洗涤液提供的洗涤液为 浓缩液。使用前用蒸馏水将浓缩洗涤液稀释 倍使用。样品检测往酶标板里加标准品样本 孔，再加入 孔的抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置于温育培养箱中 反应 。取出用洗涤液按每孔 ，洗板次次，每次浸泡 ，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。加入酶标二抗工作液 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，置于温育培养箱中 反应 ，取出重复洗板步骤。每孔加入底物液，再加液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，于温育培养箱中 避光显色 。每孔加入浓度为 的终止液，轻轻振荡混匀。于 处测定吸光度值（值）（建议用双波长 检测，加入终止液后在 内读完结果）。结果的计算标准品和样品的百
6、分吸光度值计算方法见式（）：犛 犖犜 百分吸光率犅犅 （）式中：犅 标准品或样品的百分吸光度值；犅 标准的百分吸光度值。以百分吸光度值为纵坐标，玉米赤霉醇标准溶液的浓度（）的半对数值为横坐标绘制标准工作曲线。从标准曲线上得到试样中相应的玉米赤霉醇浓度后，结果按式（）进行计算：犡犃犳犿 （）式中：犡 样品中玉米赤霉醇的含量，单位为微克每千克（）；犃 样品的相对吸光度值对应的玉米赤霉醇的含量，单位为微克升（）；犳 样品稀释倍数；犿 样品的取样量，单位为克（）。也可用各种酶标仪的数据处理软件进行计算。所得结果表述到小数点后两位。如被测试样中玉米赤霉醇残留量的值大于限量要求时，应用其他方法进行确证。检
7、测灵敏度、检测低限、回收率 检测灵敏度本方法检测灵敏度为 。检测低限本方法检出低限为 。回收率参见附录中。方法的精密度本标准的批内变异系数，批间变异系数。犛 犖犜 附录犃（资料性附录）玉米赤霉醇试剂盒）犃 玉米赤霉醇酶联免疫试剂盒的组成：）酶标板（条孔）包被有偶联抗原；）抗体工作液（）；）酶标二抗工作液：辣根过氧化物酶和羊抗兔二抗的结合物，保存；）洗涤液（浓缩液），见附录中；）底物液，见附录中 ；）底物液，见附录中 ；）浓缩复溶液。见附录中；）终止液：硫酸 ；）玉米赤霉醇系列标准液（个倍比稀释浓度水平，外加个空白）；）标准品储备液：配制成 甲醇储备液，保存。犃 交叉反应：见表。表犃 玉米赤霉醇
8、与其竞争物的交叉反应率竞争物交叉反应率玉米赤霉醇 玉米赤霉醇 玉米赤霉烯醇 玉米赤霉烯醇 玉米赤霉酮 玉米赤霉烯酮 己烯雌酚 雌二醇 睾酮 克伦特罗）给出该信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对某一产品的认可。如果其他产品具有相同的效果应经试验评估验证后使用。犛 犖犜 犃 玉米赤霉醇标准曲线（）见图。图犃 玉米赤霉醇标准曲线犃 回收率：见表。表犃 玉米赤霉醇回收率实验样品添加浓度 回收率牛奶 牛肉 羊肉 鸡肉 犛 犖犜 附录犅（规范性附录）溶液配制方法犅 抗体浓缩洗涤液 定容于 的双蒸水中，使用前按 稀释。犅 浓缩复溶液 定容于 双蒸水中，储存于备用，使用前按稀释。犅 底物液犅 底物液犃（狆
9、 犎）定容于 的双蒸水中，储存于备用。犅 底物液犅，（）定容于 的双蒸水中，储存于备用。底物液底物液为（体积比）。注意：使用前室温避光保存。犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱 犻 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犿 犻 狀 犻 狊 狋 狉 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻
10、狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犜 犻 犪 狀 犼 犻 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳 狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪犪 狀 犱犃 狀 犺 狌 犻犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀 狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳狋 犺 犲犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻
11、犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔 犠 犲 狀 犼 犻 犲犣 犺 犲 狀 犵，犠 犲 犻 犱 狅 狀 犵犣 犺 犪 狅，犡 狌 犪 狀犔 犻 狌，犢 犪 狀犎 犲，犕 犲 狀 犵 狓 狌犣 犺 狌，犢 狌 狆 犻 狀 犵犠 犪 狀，犆 犪 犻 狑 犲 犻犉 犲 狀 犵，犣 犺 犲 狀 犵 犿 犻 犪 狅犣 犺 犪 狅犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狕 犲 犪 狉 犪 犾 犪 狀 狅 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳
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13、 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲狋 狅狋 犺 犲狊 犮 狉 犲 犲 狀犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狆 狅 狉 犽，犫 犲 犲 犳，犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀，犿 狌 狋 狋 狅 狀犪 狀 犱犿 犻 犾 犽 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狔 狊犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮
14、 犺，狋 犺 狉 狅 狌 犵 犺狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犻 狀狋 犺 犻 狊 狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉 犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋 犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋 狋 狅，狅 狉 狉 犲 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳，犪 狀 狔狅 犳 狋 犺 犲 狊 犲狆 狌 犫 犾 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 犪犱 狅狀 狅 狋 犪 狆 狆 犾 狔 犎 狅 狑 犲 狏 犲 狉 狆 犪 狉
15、狋 犻 犲 狊 狋 狅犪 犵 狉 犲 犲 犿 犲 狀 狋 狊犫 犪 狊 犲 犱狅 狀 狋 犺 犻 狊 狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅 犻 狀 狏 犲 狊 狋 犻 犵 犪 狋 犲狋 犺 犲狆 狅 狊 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狅 犳犪 狆 狆 犾 狔 犻 狀 犵狋 犺 犲犿 狅 狊 狋 狉 犲 犮 犲 狀 狋犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犲狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犻 狀 犱 犻 犮 犪 狋 犲 犱犫 犲 犾 狅 狑 犉 狅 狉 狌 狀 犱 犪 狋 犲 犱 狉 犲 犳 犲 狉 犲
16、狀 犮 犲 狊，狋 犺 犲 犾 犪 狋 犲 狊 狋 犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狉 犲 犳 犲 狉 狉 犲 犱 狋 狅犪 狆 狆 犾 犻 犲 狊 犌 犅犜 犠 犪 狋 犲 狉 犳 狅 狉犪 狀 犪 犾 狔 狋 犻 犮 犪 犾 犾 犪 犫 狅 狉 犪 狋 狅 狉 狔狌 狊 犲犛 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱狋 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊犘 狉 犻 狀 犮 犻 狆 犾 犲狅 犳犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犣 犲 犪 狉 犪 犾 犪 狀 狅 犾 犻 狀犿 犻 犾 犽狊 犪 犿 狆 犾 犲犮 犪 狀犫 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 犲 犱犪 犳 狋 犲 狉犲 狀 狕 狔 犿 犲狋 狉 犲 犪 狋 犲 犱犪 狀 犱犱 犻 犾 狌 狋 犻 狅 狀，犪 狀 犱狋 犺 犪 狋 犻 狀犿 犲 犪 狋 狊 犪 犿 狆 犾 犲犻 狊犱 犻 狊 狋 犻 犾 犾 犲 犱狑 犻 狋 犺犪 犮 犲 狋 狅 狀 犻 狋 狉 犻 犾 犲犪 狀 犱犲 狓 狋 狉 犪 犮 狋 犲 犱 狑