1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口动物源食品中克拉维酸残留量检测方法液相色谱 质谱 质谱法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犾 犪 狏 狌 犾 犪 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布食品伙伴网http:/书书书前言本标准的附录 和附录为资料性附录。本标准由国家认证
2、认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本标准主要起草人：欧阳姗、岳振峰、肖陈贵、熊贝贝、华红慧、林黎、葛丽雅、张建莹。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m进出口动物源食品中克拉维酸残留量检测方法液相色谱 质谱 质谱法范围本标准规定了动物源食品克拉维酸残留量的液相色谱 质谱质谱测定和确证方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、牛肝和牛奶等动物源食品中克拉维酸残留量的测定和确证。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是
3、注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。分析实验室用水规格和试验方法方法提要试样中残留的克拉维酸用 的三羟甲基氨基甲烷（）缓冲液 乙腈提取，二氯甲烷 正己烷液液分配净化，分子筛超滤，用液相色谱 质谱质谱仪检测和确证，外标法定量。试剂和材料除特殊规定外，所用的试剂均为分析纯，水为符合 规定的一级水。甲醇：级。乙腈：级。二氯甲烷。正己烷。酸性氧化铝。三羟甲基氨基甲烷（）。盐酸。的 缓冲溶液：称取 （），用约 水溶解，用盐酸（）调 值，定容至
4、 克拉维酸钾（，号：）标准品，纯度大于等于。标准储备溶液，：称取 克拉维酸钾（相当于 克拉维酸）标准品（），用少量 的 缓冲溶液（）溶解，再用乙腈（）定容至 容量瓶，下避光保存。标准中间溶液，：吸取 标准储备溶液（）于 容量瓶，用乙腈定容至刻度，充分混匀，配制成 标准中间溶液，此标准溶液需于分析前临时配制。标准工作溶液：根据灵敏度和使用需要，空白基质提取液将标准中间溶液（）稀释成标准工作溶液，此标准工作溶液现用现配。空白基质提取液为不含克拉维酸的空白样品按 步骤提取后得到。超滤离心管，带相对分子质量 的分子筛。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m仪器与设备
5、 液相色谱 质谱质谱仪：配电喷雾离子源。分析天平：感量 和 。旋涡混合器。低温离心机：转速不低于 ，可制冷到。均质器：转速不低于 。计。样品制备与保存 制样要求制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。动物肌肉、肝脏和肾脏从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约 ，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 以下冷冻存放。牛奶样品从所取全部样品中取出有代表性样品约 ，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于 以下冷冻存放。测定步骤 样品提取 肌肉、肝脏、肾脏称取约试样（精确至 ），于 离心管中，加入约酸性氧化铝（），再加
6、入 的 缓冲溶液（）和 乙腈（），振荡提取 ，以下以 离心 ，移取上清液至另一 离心管，加入 正己烷 二氯甲烷（）混和溶液，振荡约 ，以下以 离心 ，取最下层（水相）清液至 离心管，用水定容至 ，振荡混匀，取约 于超滤离心管中离心过滤，供液相色谱 串联质谱仪测定。牛奶称取约试样（精确至 ），于 离心管中，加入约酸性氧化铝（），再加入 的 缓冲溶液（）和 乙腈（），振荡提取约 ，以下以 离心 ，移取上清液至另一 离心管，加入 正己烷 二氯甲烷（）混和溶液，振荡约 ，以下以 离心 ，取最下层（水相）清液至 离心管，用水定容至 ，振荡混匀，取约 于超滤离心管中离心过滤，供液相色谱串联质谱仪测定。测定
7、 液相色谱条件）色谱柱：，（内径），或相当者；）流动相：水乙腈（），梯度洗脱条件如表所示；表液相色谱的梯度洗脱条件时间 水乙腈 犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m表（续）时间 水乙腈 ）流速：；）柱温：；）进样量：。质谱条件）离子化模式：电喷雾电离负离子模式（）；）质谱扫描方式：多反应监测（）；）分辨率：单位分辨率；）其他参考质谱条件参见附录。液相色谱 质谱质谱仪测定 定性测定选择个母离子，个子离子，如表所列。在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在 之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准工作溶液
8、中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表克拉维酸质谱检测母离子与子离子化合物母离子（）子离子（）克拉维酸 离子为定量离子。表定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 允许的相对偏差 定量测定在仪器最佳工作条件下，以基质标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量。根据样液中被测化合物的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在方法的检测线性范围内，超过线性范围的稀释后再进样。对标准工作溶液和样液等体积参差进样测定。克拉维酸的参考保留时间为
9、 ；标准品色谱图参见附录中图。空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。结果计算与表述采用外标法定量，按式（）计算克拉维酸残留量。计算结果需扣除空白值。犡犮犞犿 （）式中：犡 试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（）；犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m犮 从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为微克每升（）；犞 样品溶液最终定容体积，单位为毫升（）；犿 最终样品溶液所代表的试样质量，单位为克（）。测定低限与回收率 测定低限对猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、牛肝和牛奶中克拉维酸残留量的测定低限均为 。回收率不同样品基质中克拉维酸的添加回收率数据见表。表不同
10、样品基质中克拉维酸的添加回收率数据基质添加浓度（）回收率猪肉 猪肝 猪肾 牛肉 牛肝 牛奶 犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m附录犃（资料性附录）参考质谱条件）参考质谱条件）气帘气压力（）：（）（氮气）；）电喷雾电压（）：；）离子源温度（）：；）雾化气压力：（）（氮气）；）辅助气压力：（）（氮气）；）其他质谱参数见表 。表 犃 主要参考质谱参数化合物母离子（）子离子（）驻留时间 克拉维酸 注：对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。离子为定量离子。）非商业性声明：附录 所列参考质谱条件是在 型液质联用仪上完成的，此处列出试验
11、用仪器型号仅为提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m附录犅（资料性附录）标准品的多反应监测（犕犚犕）色谱图）图 犅 克拉维酸的多反应监测（犕犚犕）色谱图（犵犔标准溶液）犛 犖犜 食品伙伴网http:/w w w.b z f x w.c o m犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犃 狀 狀 犲 狓犃犪 狀 犱犪 狀 狀 犲 狓犅狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲 犻 狀 犳 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犪 狀 狀 犲 狓 犲 狊 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉
12、 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱狑 犪 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犺 犻 狀 犪犖 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾犚 犲 犵 狌 犾 犪 狋 狅 狉 狔犆 狅 犿犿 犻 狊 狊 犻 狅 狀犳 狅 狉犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 犮 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狆 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犛 犺 犲 狀 狕 犺 犲 狀犃 犮 犪 犱
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15、 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 犾 犪 狏 狌 犾 犪 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犔 犆 犕 犛犕 犛犿 犲 狋 犺 狅 犱犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狊 狆 犲 犮 犻 犳 犻 犲 狊狋 犺 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 狊狅 犳狇 狌 犪 犾 犻 犳 犻 犲 犱犪 狀 犱狇 狌 犪 狀 狋 犻 犳 犻 犲 犱犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅
16、狀狅 犳 犮 犾 犪 狏 狌 犾 犪 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犳 狅 狅 犱 狊 狋 狌 犳 犳 狊狅 犳犪 狀 犻 犿 犪 犾 狅 狉 犻 犵 犻 狀犫 狔犔 犆 犕 犛犕 犛犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊犪 狆 狆 犾 犻 犮 犪 犫 犾 犲 狋 狅犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犾 犪 狏 狌 犾 犪 狀 犻 犮犪 犮 犻 犱狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀狊 狑 犻 狀 犲犿 狌 狊 犮 犾 犲，狊 狑 犻 狀 犲 犾 犻 狏 犲 狉，狊 狑 犻 狀 犲犽 犻 犱 狀 犲 狔，犮 犪 狋 狋 犾 犲犿 狌 狊 犮 犾 犲，犮 犪 狋 狋 犾 犲 犾 犻 狏 犲 狉犪 狀 犱犿 犻 犾 犽 犙 狌 狅 狋 犲 犱狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犜 犺 犲犪 狉 狋 犻 犮 犾 犲 狊狅 犳 狋 犺 犲 犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犺 犪 狏 犲犫 犲 犮 狅 犿 犲 狋 犺 犲犪 狉 狋 犻 犮 犾 犲 狊狅