1、ICS 65.020.20 CCS B 31 DB63 青海省地方标准 DB63/T 19432021 乐都紫皮大蒜脱毒繁育技术规范 2021-08-18 发布 2021-09-20 实施 青海省市场监督管理局 发 布 DB63/T 19432021 I 前 言 本文件按照GB/T 1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由青海省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：青海大学。本文件主要起草人：梁健、洒威、王乐、王煜伟、殷恒霞、尙千涵、尹卫、岳苗、仲文祥、李小飞、王其才。本文件由青海省农业农村厅监督实施。DB63/T 19432021 1 乐都紫皮
2、大蒜脱毒繁育技术规范 1 范围 本文件规定了乐都紫皮大蒜脱毒繁育的培养基、外植体、接种、培养、病毒检测、驯化与培育等技术要求。本文件适用于乐都紫皮大蒜的脱毒繁育。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T 405 脱毒大蒜种蒜（苗）病毒检测技术规程 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 乐都紫皮大蒜（Allium sativum L.）又名乐都红皮大蒜；系百合目，百合科，葱属，是青海优良地方品种。4 培养基 根据
3、初代培养、增殖培养、分化培养、生根培养、诱导培养的营养需求配制培养基。培养基配制表见附录A。5 外植体 5.1 外植体选取 选取种性纯正、生长势强、具有代表性的乐都紫皮大蒜作为脱毒外植体进行田间标记，采收后的鳞茎于室温通风条件下单独保存。5.2 外植体处理方法 将鳞茎于05冰箱冷藏35 d，打破休眠。6 接种 DB63/T 19432021 2 6.1 茎尖消毒 选取无病斑的鳞茎，剥去外皮，自来水冲洗30 min后，切取体积约1 cm1 cm1 cm的茎尖。将茎尖转移至超净工作台内，75%的酒精消毒1 min，蒸馏水冲洗3次4次。再使用20%的次氯酸钠消毒10 min，蒸馏水冲洗3次4次。无菌
4、滤纸吸干茎尖表面水分，置于无菌培养皿中备用。6.2 茎尖剥离 在40倍解剖镜下剥去茎尖幼叶，直至露出光滑茎尖，用解剖刀切取含茎尖的生长点2 mm3 mm。6.3 接种 用手术镊将生长点移至初代培养基上，每个培养瓶接种4块6块。酒精灯上烘烤瓶口和瓶盖，在培养瓶壁上注明产地、编号和接种日期等内容。7 培养 7.1 培养条件 培养温度2426，光照强度2000 Lx3000 Lx、每天光照14 h16 h，相对湿度60%以上。7.2 初代培养 培养7 d12 d，待茎尖形成嫩黄颗粒状愈伤组织。7.3 增殖培养 将愈伤组织转移至增殖培养基，培养14 d，待形成直径3 cm左右愈伤组织团。7.4 分化培
5、养 将颗粒状愈伤组织团用手术刀分割成0.3 cm0.5 cm方块，接种于分化培养基，培养21 d，待分化出浅绿色不定芽，转移到新配制的分化培养基，培养直径至1.5 cm2 cm。7.5 生根培养 经7.4培养后，将新个体切割成1 cm转接至生根培养基上，培养21 d，待长出幼根和幼叶，形成初代苗。7.6 诱导培养 将初代苗转入诱导培养基进行培养，30 d60 d后，培养瓶内形成脱毒小鳞茎。8 病毒检测 小鳞茎中洋葱黄矮病毒（OYDV）、大蒜普通潜隐病毒（GCLV）的检测按照NY/T 405执行。9 试管苗驯化与管理 9.1 驯化前处理 DB63/T 19432021 3 打开瓶塞，加入自来水，
6、室内敞开放置5d进行炼苗。取出脱毒苗，洗净培养基，保湿待栽。9.2 移栽 将脱毒小鳞茎移栽至装有基质（珍珠岩:蛭石:草炭土=1:1:0.5）的营养钵中，置于室内，浇透水一次。9.3 管理 9.3.1 光照管理 移栽后遮阴10 d15 d,此后逐渐增加光照强度。9.3.2 温度管理 室温保持在2025，基质温度保持在1520。9.3.3 水肥管理 根据空气温湿度和基质含水量适时浇水，使基质相对含水量保持在70%80%，空气湿度保持在50%60%。每隔7 d左右浇灌一次营养液，营养液使用MS基础培养基配制，稀释10倍后浇灌。DB63/T 19432021 4 A A 附 录 A（规范性）培养基配制表 培养基配制见表A.1。表A.1 培养基配制表 成分 初代培养基 增殖培养基 分化培养基 生根培养基 诱导培养基 MS基础培养基 41.74g 41.74g 41.74g 41.74g 2.47g 6-BA 3/L 2/L 1/L NAA 2/L 2/L 琼脂 7.6g 绵白糖 120g/L _