1、 ICS 65.120 CCS B 46 34 安徽省地方标准 DB34/T 13632022 代替DB34/T 1363-2011 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法 Determination of quinocetone in feed contentHigh performance liquid chromatography method 2022-06-29 发布 2022-07-29 实施 安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 13632022 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替 DB34/T
2、 1363-2011饲料中喹烯酮的测定-高效液相色谱法，除编辑性修改外主要技术变化如下：a)增加方法检出限、定量限；b)修改了原理（见第 4 章）；c)修改了试剂和材料内容（见第 5 章）；d)增加了仪器设备（见第 6 章）；e)更改了样品制备（见第 7 章）；f)修改“色谱条件”（见第 8 章）；g)修改了结果计算与表述（见第 8.4 章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽华测检测技术有限公司、阜阳市农业综合行政执法监督支队、萧县畜牧兽医水产服务
3、中心、岳西县农业农村局、淮北市畜牧中心，安徽农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。本文件起草人：刘发全、谢军池、纵丰学、朱明齐、王文风、袁琪、束玲玲、许晓靖、李佳庆、吴敏、吴昊、许世富、邵颖、潘孝成、宋亚伟。2011 年首次发布为 DB34/T 1363-2011，2022 年第一次修订。DB34/T 13632022 1 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件规定了饲料中喹烯酮含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中喹烯酮含量的测定。本方法检出限为 0.5 mg/kg，定量限为 1.0 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中
4、的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 试样中的喹烯酮用乙腈甲醇磷酸溶液超声提取，经离心、过滤后，高效液相色谱分离，紫外检测器测定，外标法定量。5 试剂和材料 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯。二甲基甲酰胺。磷酸。0.025 mol/L 磷酸溶液：称
5、取 85 的磷酸（5.5）2.88 g，加水稀释至 1000 mL。流动相：乙腈-甲醇-（0.025 mol/L）磷酸溶液，按体积比 25：20：55（v/v）。标准品：喹烯酮标准品（CAS 号：81810-66-4），纯度 98.0。喹烯酮标准溶液的制备如下：a)标准溶液储备液（0.5 mg/mL）：取喹烯酮标准品 50 mg，精密称定，用 10 mL 二甲基甲酰胺溶解后，加入甲醇定容至 100 mL 棕色容量瓶，配制成浓度为 0.5 mg/mL 的标准储备液，于4冰箱中保存，有效期二个月。DB34/T 13632022 2 b)标准工作溶液：分别吸取储备液（5.9-a）1 mL、2 mL、
6、5 mL、10 mL、20 mL 于 100 mL 棕色容量瓶，用流动相溶液（5.7）定容，标准工作溶液系列浓度分别为 5 g/mL、10 g/mL、25 g/mL、50 g/mL、100 g/mL。6 仪器和设备 高效液相色谱仪：配紫外检测器。分析天平：感量 0.1 g、0.1 mg、0.01 mg。离心机：8000 r/min。超声波仪。分析筛：孔径 0.42 mm。粉碎机。微孔滤膜：孔径 0.45 m 有机滤膜。7 试样的制备 按GB/T 20195的规定制备，磨碎，全部通过分析筛（6.5），混匀，装入磨口瓶中备用。8 分析步骤 试样的提取 称取试样适量（配合饲料 5.0 g、浓缩饲料
7、3.0 g、预混合饲料 1.0 g），精确至 0.1 g，置于100 mL 具塞锥形瓶中，准确加入流动相 50 mL，超声提取 30 min，移取 10 mL 至离心管，以 8000 r/min 离心 10 min，取离心上清液过 0.45 m 有机滤膜，滤液供高效液相色谱仪测定，同时进行平行试验。参考色谱条件 色谱柱：色谱柱：C18柱（250 mm4.6 mm，5 m）或相当者；检测波长：260 nm；流动相：乙腈-甲醇-（0.025 mol/L）磷酸溶液，按体积比 25：20：55（v/v）；流速：1.0 mL/min；柱温：25；进样体积：10 L。测定 喹烯酮标准工作溶液和试样溶液分别
8、进样，得到色谱峰面积响应值，在线性范围内，用外标法测定，以保留时间定性，峰面积定量。喹烯酮标准工作溶液色谱图参见附录A中图A.1。结果的计算与表述 8.4.1 计算公式 结果按式（1）计算：式中：DB34/T 13632022 3 =10001000 (1)式中：X 试样中喹烯酮含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；C 试液色谱峰对应的喹烯酮浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；m 试样质量，单位为克（g）；f 稀释倍数。8.4.2 结果表示 测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。9 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10。DB34/T 13632022 4 附录A （资料性）喹烯酮标准溶液的图谱 图谱见图A.1。图A.1 喹烯酮标准溶液（10 g/mL）色谱图 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 mAU 0 10 20 30 40 50 60 70 4.815-QXT