1、ICS 65.020.30 B 41 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 21602014 鸡毒支原体感染防治技术规程 Technical regulations for prevention and cure of avian mycoplasmosis 文稿版次选择 2014-09-23 发布 2014-10-23 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 21602014 I 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由安徽农业大学、安徽华卫集团禽业有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽农业大学，安徽华卫集团禽业
2、有限公司。本标准主要起草人：魏建忠、李郁、檀华蓉、刘成文、刘军军、钱昌银、赵卫平、孙裴、李吕木。DB34/T 21602014 1 鸡毒支原体感染防治技术规程 1 范围 本标准规定了鸡毒支原体感染的诊断、预防和治疗。本标准适用于养鸡场鸡毒支原体感染的防治。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 13078 饲料卫生标准 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 553 禽支原体病诊断技术 NY/T 1167 畜禽场环境质量及卫
3、生控制规范 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY/T 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T 5030 无公害食品 畜禽饲养兽药使用准则 NY/T 5038 无公害食品 家禽养殖生产管理规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 鸡毒支原体感染 Mycoplasma gallisepticum infection 由鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum，MG）引起鸡的一种慢性呼吸道传染病，又名慢性呼吸道病（Chronic respiratory disease，CRD）3.2 疫病净化 cleanse of epidemic dis
4、ease 在某一限定区域或养殖场内，根据特定疫病的流行病学调查结果和疫病监测结果，及时发现并淘汰被感染动物，使限定动物群中某种疫病被清除的控制方法。4 诊断 4.1 初步诊断 4.1.1 流行特点 DB34/T 21602014 2 4.1.1.1 各种日龄的鸡均可感染，48 周龄的鸡最易感。4.1.1.2 病鸡、隐性带菌鸡、带菌种蛋是主要传染源。4.1.1.3 传播途径有经卵垂直传播和通过密切接触水平传播两种方式，垂直传播是重要方式。4.1.1.4 一年四季均可发生，以冬春季节严重。4.1.1.5 潜伏期 1020 天，最长可达 4 个月。4.1.1.6 呈慢性经过，成年鸡多散发，幼鸡则成批
5、发生，发病率 1050。4.1.2 临床症状 幼龄病鸡表现食欲不振，体重减轻，鼻孔流出浆液性、黏液性直至脓性鼻液，严重时分泌物阻塞一侧或两侧鼻孔，频频摇头、打喷嚏；炎症波及周围组织时，出现鼻窦炎、结膜炎及气囊炎；炎症波及下呼吸道时，出现咳嗽和气喘，并有气管啰音；后期如鼻腔和眶下窦中蓄积渗出物则引起眼睑肿胀，如果没有并发感染其它疾病，则病死率不高。4.1.3 病理变化 单纯感染 MG 的病例，鼻和眶下窦有轻度炎症。自然病例多为混合感染，可见呼吸道黏膜水肿、充血、增厚，气管和喉头有粘液状物，严重时炎症可波及肺和气囊，气囊浑浊、囊壁增厚、灰白色不透明，腔内含有大量干酪样渗出物。有时可见纤维素性或脓性
6、心包炎、肝周炎与气囊炎并发。4.2 确诊 4.2.1 病原的分离与鉴定 按照 NY/T 553 执行。4.2.2 血清学检查 4.2.2.1 快速血清凝集试验(RSA)按照 NY/T 553 执行。4.2.2.2 血凝抑制试验（HI）MG 能凝集鸡的红细胞，且感染鸡的血清中具有血凝抑制抗体。见附录A。4.2.2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）见附录B。5 防治 5.1 预防 5.1.1 环境卫生 5.1.1.1 鸡场环境质量控制参照 NY/T 1167 的规定执行。5.1.1.2 坚持自繁自养，需要引种时，应按规定申报检疫。5.1.1.3 实行全进全出制，每批鸡进鸡前或出栏后应对鸡舍、笼具
7、及用具进行清洗、消毒，清理完毕后空舍至少 2 周。5.1.1.4 应符合 NY/T 5038 的要求。保证鸡舍的适宜温度，饲养密度要合理，舍内通风应良好。DB34/T 21602014 3 5.1.1.5 及时清除潮湿的垫料和粪便，按照 NY/T 1168 的规定处理。5.1.2 饮水管理 采用自由饮水，水质应符合 NY/T 5027 的要求。5.1.3 饲喂管理 饲料应符合 GB 13078 的要求。饲喂器具要定时清洗、消毒，并防止被鸡粪污染。5.1.4 免疫接种 5.1.4.1 油乳剂灭活疫苗 主要用于健康种鸡和商品蛋鸡。68 周龄首免，开产前 24 周加强免疫一次，颈部皮下或肌肉注射，0
8、.5 mL/只。5.1.4.2 弱毒疫苗 适用于各种日龄健康鸡。714 日龄首免，1016 周加免疫一次，点眼接种，0.05 mL/只。疫苗接种前 35 日、接种后至少 10 日内停用各种防治 MG 的药物，不要与其他病毒性活疫苗一起使用，两者使用间隔应在 5 日以上。5.1.4.3 弱毒疫苗配合油乳剂灭活疫苗 710 日龄用弱毒苗配合灭活苗注射，开产前用一次灭活苗，34 个月后再用灭活苗注射一次。5.2 种鸡净化 5.2.1 药物使用 按 NY 5030 的规定，对种鸡（祖代）使用抗菌药物，降低种蛋中 MG 的污染率和污染程度。5.2.2 高温处理 对种蛋（祖代）采用高温（45）经 14 小
9、时的处理，杀灭种蛋中的 MG。5.2.3 分批孵化 将来自不同种鸡（祖代）群的种蛋分开孵化，并实行小批量孵化，每批 100200 只。5.2.4 分群饲养 将后代种鸡（父母代）分小群饲养，定期进行血清学检查，一旦出现确实的阳性鸡，立即将小群淘汰。5.2.5 检疫净化 在后代种鸡（父母代）开产前全部进行血清学检查，只有全部阴性才能作种用。5.2.6 净化管理 5.2.6.1 对后代种鸡（父母代）的卫生消毒按 5.1.1 进行。5.2.6.2 对后代种鸡（父母代）的饲养管理按 5.1.2、5.1.3、5.1.4 进行。5.2.6.3 净化后的种鸡群每半年抽检一次，每次抽检 1，若血清学阳性率3则应
10、重新净化。DB34/T 21602014 4 5.3 治疗 5.3.1 药物的使用应符合 NY/T 5030 的要求。5.3.2 应进行药物敏感性测定，选用高敏药物。5.3.3 采用轮换用药，以减少抗药性产生。5.3.4 推荐使用以下敏感药物进行治疗。5.3.4.1 泰妙菌素 用法与用量：每 100 g 本品兑水 5001000 kg 或拌料 500 kg，连用 35 天。5.3.4.2 泰乐菌素 用法与用量：混饮，500 mg/L，连用 57 天。皮下或肌肉注射，513 mg/kg 体重，每天 2 次，连用 35 天。5.3.4.3 北里霉素（吉他霉素）用法与用量：混饮，125250 mg/
11、L，连用 510 天。皮下或肌肉注射，2550 mg/kg 体重，每天 2 次，连用 3 天。5.3.4.4 盐酸大观-林可霉素（比率为 2：1）用法与用量：混饮，500800 mg/L，连用 37 天。5.4 无害化处理 5.4.1 检出的阳性种鸡不能留作种用，应全部淘汰。5.4.2 对病死鸡和废弃物的处理应符合 GB 16548 的规定。DB34/T 21602014 5 A A 附 录 A（规范性附录）鸡毒支原体感染血凝抑制试验（HI）检查 A.1 血凝试验（HA）测定MG抗原血凝价 A.1.1 试验在 96 孔“V”型微量反应板上进行。A.1.2 试验使用的 MG 抗原是将幼龄的培养物
12、离心，沉淀细胞用少量磷酸盐缓冲盐水（PBS）悬浮并与等体积的甘油混合，分装后于 70保存。A.1.3 试验使用的红细胞为新鲜的 0.5鸡红细胞悬液。A.1.4 常规倍比稀释法测定 MG 抗原的血凝价。以 100凝集（红细胞呈颗粒性伞状凝集于孔底）的 MG 抗原最大稀释孔为该 MG 抗原血凝价，即 1 个血凝单位。A.2 血凝抑制试验（HI）测定MG抗体血凝抑制价 A.2.1 试验在 96 孔“V”型微量反应板上进行。A.2.2 试验使用的 MG 抗原分别含有 4 个血凝单位和 8 个血凝单位。A.2.3 试验使用的红细胞为新鲜的 0.5鸡红细胞悬液。A.2.4 去除待检血清中非特异性血凝因子：
13、按照 1 mL 稀释待检血清（1：5）加 68 滴洗涤的鸡红细胞比例，37作用 10 min 后，除去红细胞，取上清液进行检测。A.3 试验程序 A.3.1 于第 1 孔中加入 PBS 50L，再取 4 个血凝单位MG抗原依次加入 38 孔，每孔 50L，第 2 孔加含有 8 个血凝单位的 MG 抗原 50L。A.3.2 吸 1：5 稀释的待检血清 50L 于第 1 孔中，混匀后吸 50L 于第 2 孔中，依次倍比稀释至第 8 孔，最后弃去 50L。A.3.3 置微型振荡器上振荡 1 miin。A.3.4 放室温下（1820）作用 20 min。A.3.5 滴加 50L 0.5鸡红细胞悬液于各
14、孔中，振荡混合后，室温下静置 3040 min，判定结果。A.4 结果判定 A.4.1 以 100抑制红细胞凝集的待检血清最大稀释度为该血清 MG 抗体血凝抑制价。A.4.2 血凝抑制价1：80 以上判为 MG 感染阳性，1：40 时可疑，21 天后再采血检测。DB34/T 21602014 6 B B 附 录 B（规范性附录）鸡毒支原体感染酶联免疫吸附试验（ELISA）检查 B.1 材料和试剂 B.1.1 主要仪器 含 650 nm 波长酶标仪，37恒温设备，可调微量移液器。B.1.2 主要试剂 包被板，阳性对照，阴性对照，酶结合物（酶标羊抗鸡抗体-辣根过氧化物酶），样品稀释缓冲液，TMB底
15、物液，终止液。B.2 样品准备 检测前用样品稀释液将样品作 500 被稀释，如：1L 的样品可以用样品稀释液稀释至 500L。B.3 操作步骤 B.3.1 各组分放置室温（1825），颠倒摇动混合均匀。B.3.2 取出包被板，在表上记录样品位置。B.3.3 加 100L 不需稀释的阴性对照至 A1 和 A2 孔。加 100L 不需稀释的阳性对照至 A3 和 A4 孔。加 100L 稀释好的样品至相应的孔。所有被检样品即可采用双孔测定又可采用单孔测定。B.3.4 在室温（1825）孵育 30 min。B.3.5 充分甩去各孔中的液体，用大约 350L蒸馏水或去离子水洗涤微孔共 35 次。B.3.
16、6 每孔加入 100L酶标羊抗鸡抗体。B.3.7 在室温（1825）孵育 30 min。重复B.3.5。B.3.8 每孔加 100L底物溶液。在室温（1825）孵育 15 min。每孔加 100 L 终止液终止反应。B.3.9 在空气中读空白数。在 650 nm，A（650）测量和记录吸光值。B.4 结果判定 B.4.1 只有在阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得值的均值（PCX-NCX）大于 0.075 时，阴性对照孔所得值的均值小于或等于 0.150 时，测定结果才有效。B.4.2 样品的 S/P 值小于或等于 0.5，判为阴性。样品的 S/P 值大于 0.5（滴度大于 1076，），判为阳性，表明感染过 MG。B.5 计算 阴性对照平均值（NCX）=【A1孔A（650）+A2孔A（650）】/2 DB34/T 21602014 7 阳性对照平均值（PCX）=【A3孔A（650）+A4孔A（650）】/2 S/P值=【样品A（650）NCX】/【PCX-NCX】_