1、ICS 11.220 B 41 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 18922013 规模鸭场鸭坦布苏病毒病防控技术规程 Technology specification on prevention and treatment of duck tembusu disease in large scale duck farm 2013-05-10 发布 2013-06-10 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 18922013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。鸭坦布苏病毒病（duck tembusu virus disease）是由鸭坦布苏病
2、毒（duck tembusu virus）引起的一种鸭的急性传染病，除鸭外，鹅和鸡也可感染。主要引起种鸭、蛋鸭产蛋大幅下降，肉鸭、育成鸭发生神经症状为特征的疾病，该病传播迅速，蔓延范围广，给我国养鸭业造成了巨大经济损失。为预防、控制和消灭鸭坦布苏病毒病，依据中华人民共和国动物防疫法和其它相关法律法规，制定本标准。本标准主要根据中华人民共和国动物防疫法和有关兽医防疫标准而制定。本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出并起草。本标准由安徽省农业标准化委员会归口。本标准由安徽省质量技术监督局批准。本标准主要起草人：赵瑞宏、张丹俊、潘孝成、戴银、胡晓苗、侯宏艳、周学利、刘慧芳、沈学怀、朱传民、夏生林
3、、伋兆法、汲方嵘。DB34/T 18922013 1 规模鸭场鸭坦布苏病毒病防控技术规程 1 范围 本标准规定了鸭坦布苏病毒病的诊断、疫情处理、预防和控制措施。本标准适用于规模鸭场鸭坦布苏病毒病的预防和控制。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 农业部2010年第7号令 动物防疫条件审查办法 中华人民共和国动物防疫法 中华人民共和国兽药典 消毒技术规范
4、 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 鸭坦布苏病毒 黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群的一个成员。主要引起产蛋鸭卵巢出血和产蛋下降。4 诊断 依据流行病学、临床症状和病理变化等作出初步诊断，确诊需要进行病毒分离或分子生物学试验。4.1 流行特点 主要危害蛋鸭、种鸭。受感染鸭群里的鸭只几乎均可发病，死亡率为 530不等。4.2 临床症状 以产蛋鸭突发采食量和产蛋量急剧下降为特点，即：鸭群发病后 12 周内，采食量下降 30以上，产蛋率由 80以上下降至 1030甚至 10以下，严重者停产，产蛋率平均下降为 5060。随后，产蛋率可逐渐回升，从发病至产蛋率恢复到高峰，约需 3050 天。
5、病鸭发热，精神欠佳，草绿色下痢，站立不稳，双腿瘫痪、向后或侧面伸展。DB34/T 18922013 2 4.3 病理变化 4.3.1 剖检病变 病变主要见于卵巢，表现为卵巢发育不良，卵泡变性、变形，卵泡膜充血、出血，子宫及输卵管粘膜未见异常，部分病例可见卵黄性腹膜炎。4.3.2 组织学病变 卵泡变性出血、卵泡闭锁和破裂，脑组织损伤，表现为脑膜水肿、血管充血，皮质层神经胶质细胞增生、嗜酸性粒细胞浸润和软化坏死，部分发病鸭还可能出现肝脏变性或坏死，胆汁淤滞、胆管扩张，血管周围浸润炎性细胞；心肌纤维坏死或钙化，炎症细胞浸润；脾脏淋巴细胞坏死、数量减少，伴有异嗜性粒细胞浸润，且血管扩张充血，肺出血，并
6、有嗜异性粒细胞浸润。4.4 实验室诊断 4.4.1 病原分离鉴定 4.4.1.1 鸭胚选择 选SPF鸭群（或健康无病鸭群）的新鲜受精蛋。鸭胚对坦布苏病毒应无免疫力，因其抗体可由母鸭经卵黄传给胚胎。一般选白壳蛋，以便照蛋时易于观察。4.4.1.2 病料的处理和接种 采集发病鸭或死后数小时内鸭的卵巢、心血、肝脏或脑组织，将所采集的病变组织器官在研钵中剪切成小块，研磨至乳状再加少量灭菌 PBS 稀释，分装入冻存管，反复冻融 3 次，用 0.22 um 一次性滤器过滤除菌（在研磨、离心取上液等过程中要注意无菌操作）。4.4.1.3 鸭胚接种 将接种物注射进鸭胚尿囊腔，每个胚注射 0.20.5 ml，用
7、熔化的石蜡封闭小孔，置孵育箱中继续孵育。每天照蛋 12 次，24 小时内死亡鸭胚舍去。4.4.1.4 尿囊液收集 收获接种后 3672 h 死亡的鸭胚尿囊液，冷冻保存。4.4.1.5 产蛋鸭接种 取产蛋鸭 20 只，分为两组，每组 10 只，中和组经肌肉注射接种鸭胚尿囊液毒+鸭坦布苏病毒抗血清，对照组接种鸭胚尿囊液毒，接种剂量均为 1 ml/只。观察攻毒组和对照组鸭在接种后的采食、产蛋等变化。在接种后 6 d 从攻毒组和对照组分别取 3 只鸭扑杀，剖检并观察病变。4.4.1.6 结果观察和判定 接种后对照组产蛋鸭采食量和产蛋量急剧下降，中和组正常，剖检可见对照组卵巢发育不良，卵泡变性、变形，卵
8、泡膜充血、出血，中和组正常，即可诊断为鸭坦布苏病毒病。4.4.2 分子生物学诊断 4.4.2.1 病毒核酸的提取 DB34/T 18922013 3 取 100 l 死亡胚尿囊液，加入 Trizol Reagent 提取病毒总 RNA。4.4.2.2 RT-PCR 检测 引物：上游引物：5-GGATGCGTCGTACGTGCT-3，下游引物：5-CGTCGTTCCCAGATTCCA-3。以病毒 RNA 为模板进行 RT-PCR，RT 反应条件为：725 min，4230 min，983 min。PCR 反应条件：94预变性 5 min；94变性40 s，56退火 40 s，72延伸 1 min
9、，35 个循环；72延伸 10 min。4.4.2.3 结果分析和判定 取 PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后，取出凝胶板置于凝胶成像系统中打开紫外灯观察。当阳性对照出现 348 bp 扩增带，阴性对照未出现目的带时，实验结果成立。被检样品出现 348 bp 扩增带时，该样品判定为阳性。4.5 结果判定 4.5.1 符合 4.1、4.2 和 4.3 的，临床诊断为疑似鸭坦布苏病毒病。4.5.2 符合结果判定 4.5.1，且符合 4.4.1 或 4.4.2 时，可确诊为鸭坦布苏病毒病。5 疫情处理 根据流行病学特点、临床症状、剖检病变，结合病原分离鉴定或分子生物学检测做出的诊断结果可作为
10、疫情处理的依据。当疫病呈爆发性流行时，依照中华人民共和国动物防疫法进行处理。6 预防与控制 6.1 预防措施 6.1.1 引种检疫 国内异地引入种鸭及其精液、种蛋时，应取得原产地动物防疫监督机构的检疫合格证明。到达引入地后，种鸭必须隔离饲养 7 天以上，并由引入地动物防疫监督机构进行检测，合格后方可混群饲养。6.1.2 饲养管理 饲养场实行全进全出饲养方式，减少各种应激因素，如鸭舍温度、湿度的突然变化、光照的骤变、噪音、惊吓，日常中鸭饲料营养成分或配方的较大改变等。6.1.3 养殖环境 改善养殖环境，保持鸭舍通风、干燥、温暖，饲饮用具、饲料槽、饮水器要保持清洁干净。6.1.4 营养供给 为保证
11、鸭每日的营养供给，应根据鸭的不同生长阶段配制饲料，同时要特别注意日粮中必需氨基酸和维生素的含量应能满足鸭机体生长需要。所喂饲料必须无霉变、无杂质，以防诱发疾病。6.1.5 消毒制度 DB34/T 18922013 4 各饲养场要控制人员出入，严格执行清洁和消毒程序，圈舍、饲饮用具、饲料槽、饮水器等要定期清洗消毒。6.1.6 基础防疫工作 按照科学的程序做好鸭瘟、鸭病毒性肝炎、鸭传染性浆膜炎等疫病的免疫接种。6.1.7 药物预防 在免疫空白期，应用提高机体免疫力和修复免疫器官的中药制剂（如黄芪多糖等），有助于控制发病和减少死亡 6.2 控制措施 6.2.1 隔离、消毒措施 发生本病后，要隔离病鸭，对鸭舍、环境、用具等严格消毒处理，消毒药的使用遵照中华人民共和国兽药典的规定。6.2.2 药物治疗措施 该病目前无特效治疗药物，在发生该病时可投喂一些抗病毒中草药（如板蓝根、黄连、金银花及连翘等），为了防止继发感染大肠杆菌病，应在治疗过程中辅助添加广谱抗生素（如：氟派酸、阿莫西林、庆大霉素等）6.2.3 病死禽无害化处理措施 对病死禽只进行无害化处理，按照 GB 16548 进行无害化处理；对粪便及其它可能被污染的物品，按 NY/T 1168 进行无害化处理；对环境和设施进行消毒，按消毒技术规范进行。_