1、ICS 11.220 B 41 DB37 山东省地方标准 DB37/T 40542020 麻杏石甘口服液中添加盐酸溴己新的测定 超高效液相色谱法 Determination addition of bromhexine hydrochloride in maxing shigan mixtureUltra performance liquid chromatography 2020-07-09 发布 2020-08-09 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 40542020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂或材料.1 5 仪器设
2、备.1 6 试验步骤.2 6.1 试样制备.2 6.2 标准曲线制备.2 6.3 超高效液相色谱仪参考条件.2 6.4 测定.2 7 数据处理.3 8 精密度.3 附录 A（资料性附录）盐酸溴己新典型色谱图.4 DB37/T 40542020 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：张传津、魏秀丽、张志民、章安源、陈志强、刘霄飞。DB37/T 40542020 1 麻杏石甘口服液中添加盐酸溴己新的测定 超高效液相色谱法 1 范围 本标
3、准规定了麻杏石甘口服液中盐酸溴己新的超高效液相色谱测定方法。本标准适用于麻杏石甘口服液中盐酸溴己新的测定。本方法检出限为1.5 mg/mL，定量限为5 mg/mL。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理 麻杏石甘口服液中添加的盐酸溴己新提取后经UPLC分离，二极管阵列检测器测定，依据保留时间和紫外光谱图定性，外标法定量。4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为优级纯。4.1 水符合 GB/T 66
4、82 一级水的规定。4.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.3 冰醋酸（CH3COOH）：优级纯。4.4 三乙胺（(C2H5)3N）：优级纯。4.5 流动相（5%冰醋酸）：量取冰醋酸（4.3）50 mL，加水稀释至 1 000 mL，加三乙胺（4.4）适量调节 pH 至 4.0，脱气备用。4.6 对照品：盐酸溴己新，纯度95.0%。4.7 盐酸溴己新标准储备液：精密称取盐酸溴己新对照品（4.6）10 mg，加甲醇（4.2）溶解后转移至10 mL 容量瓶中，再加甲醇（4.2）稀释至刻度，摇匀，得 1 mg/mL 的标准储备液。-18 冰箱保存，有效期 3 个月。4.8 有机微孔滤膜：0.22 m
5、。4.9 初始流动相：量取 5%冰醋酸（4.5）250 mL 与甲醇（4.2）250 mL，混匀，备用。5 仪器设备 5.1 超高效液相色谱仪,配备二极管阵列（PDA）检测器。5.2 天平：感量 0.000 01 g。DB37/T 40542020 2 5.3 酸度计。5.4 离心机：5 000 rpm。5.5 超声波清洗机。6 试验步骤 6.1 试样制备 准确吸取麻杏石甘口服液试样1.0 mL，置50 mL离心管中，加24.0 mL甲醇（4.2）充分混匀，超声10 min，5 000 rpm离心10 min，准确吸取上清液1.0 mL，置20.0 mL容量瓶中，加初始流动相（4.9）稀释至刻
6、度，摇匀，用有机微孔滤膜过滤，待测。同时做试样空白，同法处理。6.2 标准曲线制备 准确吸取盐酸溴己新标准储备液（4.7）5.0 mL，置50 mL容量瓶中，加初始流动相（4.9）稀释至刻度，摇匀，得100 g/mL的对照品溶液，分别吸取100 g/mL的对照品溶液适量，用初始流动相（4.9）倍比稀释，得1 g/mL、2 g/mL、5 g/mL、10 g/mL、20 g/mL、40 g/mL的对照品系列工作液。6.3 超高效液相色谱仪参考条件 色谱柱：C18，50 mm2.1 mm；粒径1.7 m，或性能相当者。流动相A：5%冰醋酸。流动相B：甲醇。流速：0.3 mL/min。进样量：10 L
7、。柱温：35。PDA检测器，波长扫描范围：190 nm400 nm。定量最大吸收波长：248 nm。液相色谱梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 min 流动相 A%流动相 B%50 50 1.2 50 50 2.5 30 70 4.0 30 70 4.5 50 50 5.0 50 50 6.4 测定 6.4.1 定性测定 试样溶液色谱图的保留时间与对照品溶液色谱图的保留时间相对偏差不大于2.5%，且试样溶液的光谱图与对照品溶液的光谱图一致，则判定试样中存在盐酸溴己新。DB37/T 40542020 3 6.4.2 定量测定 取试样溶液和对照品溶液各10 L注入超高效液相色谱仪
8、，在上述色谱条件下进行测定，记录色谱图，外标法定量。盐酸溴己新典型色谱图参见附录A.1A.3。7 数据处理 试样中盐酸溴己新的含量按下式计算：11000CVX=V.(1)式中：X 试样中盐酸溴己新的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；C 试样溶液中盐酸溴己新的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V1 试样溶解总体积500（两次稀释25X20=500），单位为毫升（mL）；V 试样的体积，单位为毫升（mL）；1000 用于单位换算。结果保留小数点后两位。8 精密度 在重复性条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。DB37/T 40542020 4 A A 附 录 A（资料性
9、附录）盐酸溴己新典型色谱图 40 g/mL盐酸溴己新对照品溶液特征色谱图见图A.1。图A.1 40 g/mL 盐酸溴己新对照品溶液特征色谱图 10 mg/mL阳性添加盐酸溴己新麻杏石甘口服液样品溶液特征色谱图见图A.2。图A.2 10 mg/mL 阳性添加盐酸溴己新麻杏石甘口服液样品溶液特征色谱图 DB37/T 40542020 5 阴性空白麻杏石甘口服液样品溶液特征色谱图见图A.3。图A.3 阴性空白麻杏石甘口服液样品溶液特征色谱图 盐酸溴己新光谱图见图A.4。2.458 提取的222.5248.2316.4AU-0.050.000.050.100.150.20纳米220.00240.00260.00280.00300.00320.00340.00360.00380.00400.00 图A.4 盐酸溴己新光谱图 _