1、ICS 65.120 B 46 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 17812013 饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测 毛细管电泳法 Determination of some kinds of sedatives in feeds High performance capillary electrophoresis-HPCE 2013-09-05 发布 2013-09-30 实施河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 河 北 省 标 准 化 管 理 委 员 会 发 布 DB13/T 17812013 I 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标
2、准主要起草单位：河北省产品质量监督检验院 本标准主要起草人：罗强、王涛、韩光、吕国强、张红玲、田宝勇、白新方 DB13/T 17812013 1 饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测 毛细管电泳法 1 范围 本标准规定了饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的检测方法。本标准适用于饲料中苯巴比妥、艾司唑仑、地西泮以及盐酸氯丙嗪的毛细管电泳检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂
3、及制品的制备 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 样品经乙腈振荡提取后，试液经毛细管电泳，用紫外检测器或二极管阵列检测器在波长257 nm处检测，外标法计算各组分含量。4 仪器设备 仪器设备包括：a)分析天平 感量为 0.0001g b)毛细管电泳仪，配有二极管阵列检测器或紫外检测器 c)超纯水机 d)旋涡混合器 e)恒温水浴锅 f)电动离心沉淀器 g)超声波清洗器 5 试剂和溶液 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水符合GB/T 6682中三级用水规定，电泳用水符合GB/T 6
4、682中一级水规定。6 采样 DB13/T 17812013 2 按照GB/T 14699.1的规定执行 7 试样制备 按照GB/T 20195制备试样，磨碎，全部通过2.8mm孔筛，装入密闭容器中，避光低温保存备用。8 试样溶液的制备 称取磨碎的饲料2.0000 g于离心管中，加30.0 mL乙腈超声提取30min，3000 r离心5min，取上层清液蒸干，然后用4.0 mL2%的冰醋酸溶液溶解，混匀，加入2.0mL正己烷，涡动30s60s，取上层清液，0.45um过滤膜过滤，蒸干，加电泳缓冲液定容至1.00ml。9 检验方法 9.1 电泳条件 柱长：37 cm；柱温：25 ；工作电压：18
5、 kV；检测波长为257 nm。缓冲液体系的pH值为8.60。缓冲液体系为44.8 mL的磷酸氢二钠，5.2 mL的磷酸二氢钠，SDS为0.4325 g，甲醇为7.5 mL，加入乙腈25 L。且每次运行前，都用0.1 mol/L的盐酸冲洗5 min，然后用二次蒸馏水冲洗2min，然后用0.1 mol/L的氢氧化钠冲洗5 min，再用二次蒸馏水冲洗10 min，最后用运行缓冲液冲洗5 min。每两次进样中间用缓冲液冲洗2 min。9.2 定量测定 按照上述电泳条件，做各标准溶液的标准曲线和样品溶液，根据外标法定量，见公式（1）。试样中各组分含量X%（P1V）/(Pm1000)100（1）式中：P1各组分对应的峰面积 V试样溶液的总体积，mL 各组分对应的标准溶液浓度，mg/mL P各组分对应的标准溶液峰面积 M试样质量，g DB13/T 17812013 3 图1 四种镇静剂药物毛细管电泳图谱 出峰顺序分别为：t苯巴比妥=3.54 min；t艾司唑仑=7.31 min；t地西泮=8.17min；t盐酸氯丙嗪=10.04min。9.3 平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字，标准偏差5%。_