1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 20452020 甜菜组培快繁技术规程 Technical code of practice of culture and rapid propagetion on sug arbeet 2020-12-24 发布 2021-01-24 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 20452020 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SA
2、M/TC 20）归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本文件主要起草人：白晨、李晓东、张惠忠、张自强、王良、韩平安、张必周、赵尚敏、付增娟、鄂圆圆、郑文哲、张辉。DB15/T 20452020 1 甜菜组培快繁技术规程 1 范围 本文件确立了培养基、外植体的获取、灭菌与萌发、无菌苗获取、甜菜组培扩繁和移栽等技术要求。本文件适用于甜菜组培快繁技术操作的全过程。2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 种球 bulb 甜菜的果实。3.2 腋芽 axillary bud 发生于叶的近轴面与茎的夹角处的定芽。3.3 花序 inflore
3、scence 花序轴及其着生在上面的花的通称。4 培养基 4.1 琼脂粉培养基 用于甜菜种球的萌发。成分为（1 L）：琼脂粉7.5 g。4.2 诱导分化培养基 用于甜菜无菌苗诱导分化培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA（萘乙酸）0.7 mg，KT（激动素）1.2 mg，琼脂粉7.5 g。4.3 继代培养基 DB15/T 20452020 2 用于甜菜无菌苗的继代培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74 g，蔗糖30 g，NAA 0.5 mg，KT 0.4 mg，琼脂粉7.5 g。4.4 生根培养基 用于甜菜无菌苗的生根培养。成分为（1 L）：MS培养基4.74
4、 g，蔗糖30 g，NAA 1.2 mg，琼脂粉7.5 g。5 外植体的获取 5.1 种球的获取+选取健康、籽粒饱满、外观完好的甜菜种球。5.2 腋芽的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取幼嫩主枝或侧枝。5.3 花序的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取现蕾花序的末端约20 cm。6 灭菌与萌发 6.1 灭菌前准备 制备无菌水、75%酒精，0.1%升汞，80%次氯酸钠。6.2 种球消毒 将甜菜种球磨光，用百菌清（烟剂型）密闭熏蒸24 h后，在超净工作台中移至灭过菌的三角瓶中，随后用75%酒精消毒2 min，无菌水漂洗3 次，接
5、着用0.1%的升汞处理20 min，无菌水漂洗3 次，最后将消毒后的种子接种于琼脂粉培养基上，每三角瓶（100 ml）25粒。6.3 腋芽消毒 取回的主枝或侧枝剪成保留12个腋芽小段，装入烧杯放在自来水下冲洗1 h，冲洗后在超净工作台上用75%酒精消毒1 min，无菌水洗3 次，接着用80%次氯酸钠消毒12 min，无菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中，每三角瓶（100 ml）6个小段。6.4 花序消毒 室外取回的花序放入烧杯中，放到自来水下冲洗花序1 h，冲洗后将花序切成1.5 cm左右长度的花序小段，在超净工作台上将花序小段首先用75%酒精消毒1 min，无菌水洗3
6、次，接着用80%次氯酸钠消毒2 min3 min，无菌水洗3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中，每三角瓶（100 ml）6个小段。7 无菌苗获取 7.1 种球成苗 DB15/T 20452020 3 置于组培室培养，23 条件下进行培养，7 d10 d即可萌发。待芽长 2.0 cm2.5 cm时，带子叶一起切下，接种到新的继代培养基中。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。培养20 d25 d成苗。7.2 腋芽成苗 在组培室内培养，培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。腋芽培养20 d25 d即可长出新芽，切下新芽接种到新的继代
7、培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。7.3 花序成苗 在组培室内培养，培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间13 h。花序培养30 d40 d即可长出新芽。切下新芽接种到新的继代培养基上，约20 d可得到健壮无菌苗。8 甜菜组培扩繁 8.1 诱导分化培养 在超净工作台上，选取健壮无菌苗，接种于分化培养基中进行分化诱导培养。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时长为14 h。8.2 继代培养 当诱导的丛生芽长到约1 cm2 cm，在超净工作台中将丛生芽分切为单苗，接种于继代培养基中进行继代培养。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。8.3 生根培养 将生长健壮的丛生芽分切成1 cm2 cm单芽，接种到生根培养基中。培养环境：温度23，光照强度3000 Lux，光照时间14 h。20 d30 d即可诱导出新生根。9 移栽 9.1 炼苗 去掉封口膜，在组培室锻炼2 d3 d。9.2 室内移栽 选择根系生长健壮的组培苗从三角瓶中移出，用自来水浸泡根部12 h，洗净根部残留培养基，移栽到花盆中（育苗土由蛭石和田园土构成，二者比例为1:1），并遮阳，定期浇水，室内培养7 d14 d。9.3 大田移栽 待盆栽幼苗生长至4-6片真叶时，平均气温稳定在10 以上时，选择早上或者傍晚移入大田。