1、 ICS 65.020.20 CCS B 61 46 海南省地方标准 DB 46/T 5542021 油棕组培苗繁育技术规程 Technical code of practice for propagation of oil palm tissue culture seedling 2021-09-16 发布 2021-11-01 实施 海南省市场监督管理局 发 布 DB 46/T 5542021 I 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 组培工厂要求.1 5 培养基.2 6 胚性愈伤组织诱导培养.2 6.1 外植体采集与处理.2 6.2 外植体接种
2、.2 6.3 培养条件.2 6.4 胚性愈伤组织诱导.2 7 体细胞胚诱导培养.2 7.1 培养条件.2 7.2 体细胞胚诱导.2 8 次生胚团诱导与增殖培养.3 8.1 次生胚诱导与增殖接种.3 8.2 培养条件.3 8.3 继代周期.3 8.4 次生胚团质量要求.3 8.5 继代培养代数.3 9 丛芽诱导培养.3 9.1 接种.3 9.2 培养条件.3 9.3 丛芽诱导.3 10 生根培养.3 11 组培瓶苗筛除.3 11.1 组培瓶苗基本要求.3 11.2 需淘汰的组培瓶苗.4 12 瓶苗移栽与管理.4 12.1 设施.4 12.2 出瓶苗木规格.4 12.3 育苗容器.4 12.4 育
3、苗基质.4 12.5 育苗容器与基质的消毒.4 12.6 栽植操作.4 DB 46/T 5542021 II 12.7 移栽管理.4 13 袋装苗培育.5 13.1 苗圃地条件与设施.5 13.2 育苗容器.5 13.3 育苗基质.5 13.4 移植.5 13.5 管护.5 13.6 袋装苗筛除.6 13.7 出圃标准.6 14 苗木档案.6 附录A （资料性）油棕侏儒株、直立株、宽节株形态.7 附录B （规范性）油棕组培苗各阶段培养基配方表.8 附录C （资料性）正常形态和异常形态的油棕瓶苗.10 附录D （规范性）油棕瓶苗移栽阶段病虫鼠害及其防治方法.11 DB 46/T 5542021
4、III 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由海南省林业局提出并归口。本文件起草单位：中国热带农业科学院橡胶研究所。本文件主要起草人：潘登浪、李炜芳、邹积鑫、曾精、曾宪海、林位夫、谢贵水、刘钊、李哲。DB 46/T 5542021 1 油棕组培苗繁育技术规程 1 范围 本文件规定了油棕（Elaeis guineensis Jacq.）组培苗繁育技术的术语和定义、组培工厂要求、培养基、胚性愈伤组织诱导培养、体细胞胚诱导培养、次生胚团诱导与增殖培
5、养、丛芽诱导培养、生根诱导培养、组培瓶苗筛除、瓶苗移栽与管理、袋装苗培育、苗木档案等技术要求。本文件适用于油棕组培苗的繁育。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 LY/T 2280 林木种苗生产经营档案 LY/T 2428 杉木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306 花卉种苗组培快繁技术规程 DB46/T 316 油棕种苗繁育技术规程 3 术语和定义
6、 下列术语和定义适用于本文件。3.1 侏儒株 juvenile form 叶片发育生长迟缓，持续无羽状复叶出现的植株，其形态见附录A中图A.1。3.2 直立株 upright form 叶片与茎干夹角小，不弯曲，呈直立状的植株，其形态见附录A中图A.2。3.3 宽节株 wide internode 小叶节间距离显著宽于同龄正常植株，其形态见附录A中图A.3。4 组培工厂要求 按照NY/T 2306的相关规定执行。DB 46/T 5542021 2 5 培养基 各阶段培养基配方按照附录B的规定执行，培养基配制及其灭菌方法按照LY/T 1882的相关规定执行。6 胚性愈伤组织诱导培养 6.1 外植
7、体采集与处理 6.1.1 外植体采集 选择生长健壮、无病虫害、性状优良的成龄油棕植株为母株，并逐株编号。在一周内无雨时上午采集外植体。取材前，铲除母株生长点附近一侧的叶片，用铲刀将纵向距生长点20 cm100 cm的包裹在多层叶鞘内的心叶连同外部叶鞘整段切下，剥除其最外2层叶鞘后，用75%酒精对其表面擦拭1遍，待其表面干燥之后装入经75%酒精擦拭1遍并晾干的封闭容器内，带回实验室备用。6.1.2 外植体无菌处理 用湿布擦拭包裹着心叶的叶鞘段（见6.1.1）表面污垢，接着用75%酒精擦拭外层叶鞘及两端切口，然后将心叶块置于超净工作台上，再用蘸75%酒精的纱布反复均匀擦拭外层叶鞘2 min后，剥去
8、外层，依照此方法层层消毒，最后选留心叶块中较嫩的心叶块作为外植体。用刀将心叶块切分成长5 cm6 cm的小段并装入无菌组培瓶中备用。6.2 外植体接种 将经处理的心叶块（见6.1.2）切成长宽为 1 cm2 cm的薄片，接种到装有愈伤组织诱导培养基的培养皿（直径为90 mm）或250 mL组培瓶中，每皿或瓶接种5片。6.3 培养条件 培养温度为（281），光照条件为黑暗。6.4 胚性愈伤组织诱导 接种后，每60 d更换1次愈伤组织诱导培养基，出现愈伤组织后，继代培养12次，获得淡黄色或米色瘤状的胚性愈伤组织。7 体细胞胚诱导培养 7.1 培养条件 培养温度为（281）；光照强度为3000 lx
9、，每天光照时间12 h。7.2 体细胞胚诱导 将淡黄色或米色瘤状胚性愈伤组织（见6.4）转接到体细胞胚诱导培养基中，培养30 d后，开始获得体细胞胚。接种后每 60 d 用体细胞胚诱导培养基继代培养未长体胚的愈伤组织1次。DB 46/T 5542021 3 8 次生胚团诱导与增殖培养 8.1 次生胚诱导与增殖接种 选未萌芽的初生胚（见7.2）接种到次生胚诱导与增殖培养基，在250 mL培养瓶中接种5团。8.2 培养条件 培养条件同 7.1。8.3 继代周期 体细胞胚接种到次生胚诱导培养基培养60 d90 d后可形成次生胚团，次生胚团切成1 cm团块转到次生胚诱导与增殖培养基继续增殖培养，之后每
10、30 d继代一次。8.4 次生胚团质量要求 次生胚团乳白色或浅绿色，鲜亮；无褐化和水浸状；无污染。8.5 继代培养代数 次生胚团继代应控制在10代以内。9 丛芽诱导培养 9.1 接种 将次生胚团增殖中产生的类似芽组织团切离次生胚团，转到芽诱导培养基，在250 mL培养瓶中接种5团。9.2 培养条件 培养条件同 7.1。9.3 丛芽诱导 每 60 d更换培养基1次，培养180 d左右形成丛生芽，丛芽中多数单芽具23片叶。将超过2片叶片健壮的芽切离丛芽转入生根诱导培养，较小较弱的芽继续转到丛芽诱导培养基进行壮苗或废弃。10 生根培养 将长势健壮且具2片以上绿色全展叶片的芽切离丛芽，转接到生根培养基
11、；250 mL组培瓶每瓶接种量为57个单芽或每支试管（规格18 mm200 mm）接种一个芽；培养60 d左右可获得生根苗；培养条件为温度（281），光照强度3000 lx，每天光照16 h。11 组培瓶苗筛除 11.1 组培瓶苗基本要求 DB 46/T 5542021 4 根、茎、叶形态正常（见附录C中图C.1），具3片全展叶，有次级侧根的生根苗可出瓶（管）移栽。11.2 需淘汰的组培瓶苗 组培瓶苗阶段有以下形态之一的苗应作淘汰：全展叶新叶比老叶小或大小相似，其形态见附录 C 中图 C.2；叶片厚、肉质且硬脆，其形态见附录 C 中图 C.3；植株顶端开花，其形态见附录 C 中图 C.4；根肉
12、质粗短且僵褐，无次级侧根，其形态见附录 C 中图 C.5；假茎弯卷植株，其形态见见附录 C 中图 C.6。12 瓶苗移栽与管理 12.1 设施 炼苗移栽阶段的圃区宜建有可控温控光的温室，具双层以上可活动遮阳网，可通过活动遮阳网调控光照强度；温室内宜设有苗床或可数字化调控温湿度的育苗箱，地面铺设园艺地布，安装有微喷系统，排水良好。12.2 出瓶苗木规格 按11.1给出的要求。12.3 育苗容器 推荐育苗容器为32孔林木专用穴盘（54 cm28 cm）或一次性塑料营养杯（8 cm8 cm）。12.4 育苗基质 将腐熟椰糠和表土按体积比2:1混合均匀，填满育苗容器。12.5 育苗容器与基质的消毒 用
13、50%百菌清可湿性粉剂或50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液喷淋消毒育苗容器和基质。12.6 栽植操作 将瓶苗取出组培瓶或试管，用清水漂洗3次，再用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液消毒5 min，轻轻取出经消毒后的组培苗，将根部全部埋于基质中，基质埋至根与茎连接处上方大约1 cm处，穴盘每孔或每个营养杯栽植1株，栽植时避免根部损伤和弯折，栽植后淋透定根水。12.7 移栽管理 12.7.1 环境条件 栽植后的环境条件管理按照表1的规定执行。DB 46/T 5542021 5 表1 瓶苗移栽环境条件要求 栽植后时间 温度 光照 空气湿度 15 d 30 d 20 32 遮光度均为 75%的遮阳网双
14、层遮荫 75%30 d 60 d 20 32 遮光度均为 75%的遮阳网双层遮荫 自然湿度 60 d 90 d 20 32 遮光度为 50%的遮阳网单层遮荫 自然湿度 12.7.2 水肥管理 栽植30 d内，结合环境和叶面保湿喷水，维持基质湿度；如植株叶片发黄，可叶面喷施尿素和磷酸二氢钾（质量比为13）混合物的稀释2000倍液。之后，结合基质补水，每2周淋稀释8001000倍的复合肥（15-15-15，氯离子的含量3.0%）溶液1次。12.7.3 病虫鼠害防治 期间有叶疫病、苗枯病、炭疽病、红蜘蛛、鳞翅目幼虫、蝗虫、蜗牛、鼠等危害。要求定期查看苗木病虫鼠害发生情况，及时发现和防治。防治方法按附
15、录D的规定执行。13 袋装苗培育 13.1 苗圃地条件与设施 苗圃地条件要求按照 LY/T 1000的相关规定执行。相关设施主要是：圃区地面宜铺园艺地布，安装有喷灌或滴管系统，排水良好。13.2 育苗容器 育苗容器规格为25 cm25 cm，或根据育苗目标规格适当增减容器大小。13.3 育苗基质 表土或用炼苗移栽阶段育苗基质，配置方法按12.4给出的要求。13.4 移植 栽植前，用基质填满容器，并按90 cm90 cm90 cm等边三角形排列方式，露天摆放成行。当总全展叶56片时，将小苗从穴盘或营养袋中带土（尽量保持土球完整不散）取出，栽植于育苗容器中，土球全部埋于基质中，每容器栽植1株，栽植
16、后淋透定根水。13.5 管护 13.5.1 水肥管理 及时查看基质湿度，表面发白即补水保湿。每30 d60 d在容器内距离植株5 cm处穴施复合肥（15-15-15，氯离子的含量3.0%）50 g100 g，施肥后淋水。施肥时应避免肥料粘在叶片上。13.5.2 杂草控制 每月人工拔除育苗容器中杂草，拔草后及时淋水。DB 46/T 5542021 6 13.5.3 病虫鼠害防治 按照DB46/T 316的规定执行。13.6 袋装苗筛除 随时淘汰以下形态的种苗：全展叶新叶比老叶小或大小相相似，树冠呈扁平状；叶片厚、肉质且硬脆；叶片锯齿状、部分小叶天然脱落；植株顶端开花；剔除侏儒株、直立株、宽节株。13.7 出圃标准 羽状复叶8片、苗高80 cm、健壮无病虫害、容器未损坏且基质结团。14 苗木档案 苗木档案内容及其管理按照LY/T 2280和LY/T 2428的相关规定执行。DB 46/T 5542021 7 附录A （资料性）油棕侏儒株、直立株、宽节株形态 油棕侏儒株、直立株、宽节株形态分别见图 A.1、图 A.2、图 A.3。图 A.1 侏儒株 图 A.2 直立株 图 A.3 宽节株 A