1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 代替 进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法液相色谱 柱后衍生荧光检测法犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犪 狉 犫 犪 狉 狔 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋 犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犎 犘 犔 犆 犳 犾 狌 狅 狉 犲 狊 犮 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 狅 狉狑 犻 狋 犺狆 狅 狊 狋 犮 狅 犾 狌 犿 狀犱 犲 狉 犻 狏 犪 狋 犻 狅 狀 发布 实施中华人民共和国国家质量监督
2、检验检疫总局发 布书书书前言本标准按照 给出的规则起草。本标准代替 出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法。本标准与 相比，主要技术变化如下：样品净化方法采用全自动凝胶渗透色谱净化方法替代原有的液液分配法；测定采用柱后衍生液相色谱 荧光检测法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准主要起草人：葛宝坤、赵孔祥、陈其勇、陈旭艳。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：。犛 犖犜 进出口肉及肉制品中甲萘威残留量检验方法液相色谱 柱后衍生荧光检测法范围本标准规定了进出口肉及肉制品中甲萘威残留量的液相色谱 柱后衍生荧光检测法。本标准适用于进出
3、口牛肉、鸡肉、虾肉、鱼肉及火腿罐头中甲萘威残留量的测定。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法制样 肉将所取全部样品，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于 ，装入清洁容器内，密封并标明标记。罐头将所取全部样品整罐倒出，充分搅碎混匀，取有代表性的样品，总量不少于 ，装入清洁容器密封并标明标记。试样保存试样应于 以下保存。在抽样和制样的操作中，应防止样品受到污染或发生含量的变化，以保证实验样品能代表总体样本。原理用丙酮 石油醚混合溶液
4、提取样品中的甲萘威残留物，经凝胶层析柱净化后，浓缩，高效液相色谱分离，经柱后衍生后，用荧光检测器检测，外标法定量。试剂和材料本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂，有机试剂为色谱纯和 中规定的三级水。乙腈。乙酸乙酯。犛 犖犜 环己烷。丙酮。石油醚：沸程 。无水硫酸钠：灼烧，在干燥器内冷却至室温，贮于密封瓶中备用。氯化钠。柱后衍生试剂。氢氧化钠溶液（，质量浓度）。邻苯二甲醛（，）。邻苯二甲醛稀释液：硼砂溶液（，质量浓度）。巯基乙醇（）。邻苯二甲醛试液的配制：溶剂储罐中注入 稀释剂，用惰性气体（氮气）吹扫至少 ，固体溶解于约 的色谱纯甲醇中，将 溶液加入除氧的 稀释剂中，溶解巯基乙
5、醇固体于 稀释剂中，加入到储罐中，盖上瓶盖，打开气流，再不断的吹扫几分钟，关闭排气阀，轻轻地搅动溶剂以使其完全混合。乙酸乙酯 环己烷混合溶液（，体积比）。尼龙滤膜。甲萘威：分子式 ，编号 ，纯度大于 。甲萘威标准储备液：准确称取适量的甲奈威标准品，以乙腈溶解，冰箱保存，有效期为个月。甲萘威标准工作液：取一定量的标准储备液，用乙腈稀释至适当浓度，冰箱保存，有效期为周。仪器和设备 液相色谱仪：配有荧光检测器和柱后衍生单元。全自动凝胶色谱仪（配有馏分收集浓缩器）。旋转蒸发装置。氮吹仪。组织匀浆机。振荡器。分析步骤 提取及净化 样品的提取称取试样（精确到 ），于 具塞三角瓶中，加水（视样品水分含量加水
6、使总水量约，肉通常在 左右，加水），加 丙酮，匀浆 ，加氯化钠，充分摇匀，再加 石油醚，振摇 。取 有机层上清液，经无水硫酸钠滤于旋转蒸发瓶中，浓缩至约，加 乙酸乙酯 环己烷（）溶液再浓缩，如此重复次。乙酸乙酯 环己烷（）定容为，滤膜过滤，待净化。样品的凝胶色谱（）净化 凝胶色谱净化条件 净化柱：，或相当者。犛 犖犜 流动相：乙酸乙酯 环己烷（）。流速：。样品定量环：。馏分收集段：。净化柱平衡时间：。凝胶色谱浓缩条件 样品浓缩条件见表。表馏分浓缩条件浓缩时间段浓缩杯区域温度真空度 样品浓缩过程区 区 区 浓缩终点到达过程区 区 浓缩终点判定：液位传感模式。溶剂替换：乙腈，重复两次。定容体积：。
7、凝胶色谱净化步骤将 待净化液按 和 规定的条件进行净化与浓缩，最后得到 净化液待测定。测定 液相色谱条件 色谱柱：，或相当者。柱温：。荧光检测器：，。流动相：乙腈水（，体积比）。流速：。进样量：。柱后衍生 衍生试剂：水解试剂，的氢氧化钠溶液，流速 。衍生试剂：试剂，流速 。反应器温度：水解温度为 ，衍生温度为室温。色谱测定根据样液中被测甲萘威的含量情况，选定浓度相近的标准工作液，其响应值应在方法检测的线性范围内。在上述液相色谱条件下，甲萘威保留时间为 ，色谱图参见图 。空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。犛 犖犜 结果计算按式（）计算试样中甲萘威的含量：犡犃犮犞犃犿（）式中：犡 试样中甲萘
8、威的含量，单位为毫克每千克（）；犃 试样中甲萘威的色谱峰面积；犮 标准工作溶液中甲萘威的浓度，单位为微克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犃 标准工作溶液中甲萘威的色谱峰面积；犿 最终样液所代表的量，单位为克（）。测定低限、回收率 测定低限本方法的测定低限：。回收率肉及肉制品添加回收率见表。表肉及肉制品添加回收率样品添加水平 回收率范围鱼肉 牛肉 鸡肉 样品添加水平 回收率范围火腿 虾肉 犛 犖犜 附录犃（资料性附录）甲萘威标准色谱图图 犃 甲萘威标准的液相色谱图（犵犿 犔）犛 犖犜 犉 狅 狉 犲 狑 狅 狉 犱犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪
9、 犳 狋 犲 犱 犻 狀犪 犮 犮 狅 狉 犱 犪 狀 犮 犲狑 犻 狋 犺狋 犺 犲犌 犅犜 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狉 犲 狆 犾 犪 犮 犲 犱犛 犖 犕 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉 犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳 犮 犪 狉 犫 犪 狉 狔 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋 犳 狅 狉 犲 狓 狆 狅 狉 狋犆 狅 犿 狆 犪 狉 犲 犱狑 犻 狋 犺犛 犖 ，狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狅 犳犿 犪 犼 狅 狉犿 狅 犱 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狊犪 狊犳 狅 犾 犾 狅 狑
10、狊：犕 狅 犱 犻 犳 犻 犲 犱狋 犺 犲狊 犪 犿 狆 犾 犲狆 狌 狉 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犿 狅 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉犪 狌 狋 狅 犿 犪 狋 犻 犮犵 犲 犾 犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔；犆 犺 犪 狀 犵 犲 犱狋 犺 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犳 狅 狉 犾 犻 狇 狌 犻 犱犮 犺 狉 狅 犿 犪 狋 狅 犵 狉 犪 狆 犺 狔 犳 犾 狌 狉 犲 狊 犲 狀 犮 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 狅 狉狑 犻 狋 犺狆 狅 狊 狋 犮 狅 犾 狌 犿 狀犱 犲 狉 犻 狏 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱
11、犪 狉 犱狑 犪 狊狆 狉 狅 狆 狅 狊 犲 犱犫 狔犪 狀 犱狑 犪 狊狌 狀 犱 犲 狉 狋 犺 犲犮 犺 犪 狉 犵 犲狅 犳犆 犲 狉 狋 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犃 犮 狉 狉 犲 犱 犻 狋 犪 狋 犻 狅 狀犃 犱 犻 犿 犻 狀 狊 狋 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犜 犻 犪 狀 犼 犻 狀犈 狀 狋 狉 狔 犈 狓 犻 狋 犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀犪 狀 犱犙 狌 犪 狉 犪 狀
12、狋 犻 狀 犲犅 狌 狉 犲 犪 狌狅 犳犘 犲 狅 狆 犾 犲狊犚 犲 狆 狌 犫 犾 犻 犮狅 犳犆 犺 犻 狀 犪 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狑 犪 狊犿 犪 犻 狀 犾 狔犱 狉 犪 犳 狋 犲 犱犫 狔犌 犲犅 犪 狅 犽 狌 狀，犣 犺 犪 狅犓 狅 狀 犵 狓 犻 犪 狀 犵，犆 犺 犲 狀犙 犻 狔 狅 狀 犵，犆 犺 犲 狀犡 狌 狔 犪 狀 犜 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狉 犲 狆 犾 犪 犮 犲 犱狋 犺 犲狆 狉 犲 狏 犻 狅 狌 狊狏 犲 狉 狊 犻 狅 狀狅 犳 狋 犺 犲狉 犲 犾 犲 犪 狊 犲狅 犳 狋 犺 犲狊 狋 犪 狀
13、犱 犪 狉 犱犪 狊犳 狅 犾 犾 狅 狑 狊：犛 犖 犛 犖犜 犇 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳犮 犪 狉 犫 犪 狉 狔 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犎 犘 犔 犆 犳 犾 狌 狅 狉 犲 狊 犮 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 狅 狉狑 犻 狋 犺狆 狅 狊 狋犮 狅 犾 狌 犿 狀犱 犲 狉 犻 狏 犪 狋 犻 狅 狀犛 犮 狅 狆 犲犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱狆 狉 狅 狏 犻 犱 犲 狊犪犱 犲 狋 犲
14、狉 犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 犮 犪 犫 犪 狉 狔 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲 狊 犻 狀犿 犲 犪 狋 犪 狀 犱犿 犲 犪 狋狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 狊 犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋犫 狔犎 犘 犔 犆 犳 犾 狌 狅 狉 犲 狊 犮 犲犱 犲 狋 犲 犮 狋 狅 狉狑 犻 狋 犺狆 狅 狊 狋犮 狅 犾 狌 犿 狀犱 犲 狉 犻 狏 犪 狋 犻 狅 狀 犜 犺 犲狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犻 狊狌 狊 犲 犱狋 狅犱 犲 狋 犲 狉 犿 犻 狀 犲犮 犪 犫 犪 狉 狔 犾 狉 犲 狊 犻 犱 狌 犲
15、 狊 犻 狀犮 犺 犻 犮 犽 犲 狀，犳 犻 狊 犺，犫 犲 犲 犳，狋 犺 狉 犻 犿 狆犪 狀 犱犺 犪 犿犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犖 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊犜 犺 犲犳 狅 犾 犾 狅 狑 犻 狀 犵狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狊犮 狅 狀 狋 犪 犻 狀狆 狉 狅 狏 犻 狊 狅 狀 狊狑 犺 犻 犮 犺，狋 犺 狉 狅 狌 犵 犺狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 犻 狀狋 犺 犻 狊狋 犲 狓 狋，犮 狅 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狆 狉 狅 狏 犻
16、 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱 犉 狅 狉犱 犪 狋 犲 犱狉 犲 犳 犲 狉 犲 狀 犮 犲 狊，狊 狌 犫 狊 犲 狇 狌 犲 狀 狋犪 犿 犲 狀 犱 犿 犲 狀 狋 狊狋 狅，狅 狉 狉 犲 狏 犻 狊 犻 狅 狀 狊狅 犳，犪 狀 狔狅 犳 狋 犺 犲 狊 犲狆 狌 犫 犾 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀 狊犱 狅狀 狅 狋犪 狆 狆 犾 狔 犎 狅 狑 犲 狏 犲 狉，狆 犪 狉 狋 犻 犲 狊狋 狅犪 犵 狉 犲 犲 犿 犲 狀 狋 狊犫 犪 狊 犲 犱狅 狀狋 犺 犻 狊狊 狋 犪 狀 犱 犪 狉 犱犪 狉 犲犲 狀 犮 狅 狌 狉 犪 犵 犲 犱狋 狅 犻 狀 狏 犲 狊 狋 犻 犵 犪 狋 犲 狋 犺 犲狆 狅 狊 狊 犻 犫 犻 犾 犻 狋 狔狅 犳 犪 狆 狆 犾 狔 犻 狀 犵 狋 犺 犲犿 狅 狊 狋 狉 犲 犮 犲 狀 狋 犲 犱 犻 狋 犻 狅 狀 狊狅 犳 狋 犺 犲狀 狅 狉 犿 犪 狋 犻 狏 犲犱 狅 犮 狌 犿 犲 狀 狋 狉 犲 犳 犲 狉 狉 犲 犱狋 狅犪 狆 狆 犾 犻 犲 狊 犌 犅犜 犠 犪 狋