1、NY 82.141998 中华人民共和国农牧渔业部部标准中华人民共和国农牧渔业部部标准 果汁测定方法果汁测定方法 柠檬酸的测定柠檬酸的测定 NY 82.141988 本标准等同采用国际果汁联盟本标准等同采用国际果汁联盟 IFJU 分析法。No.22（1973）柠檬酸的测定。分析法。No.22（1973）柠檬酸的测定。1 原理原理 将各种有机酸以它们的钡盐形式分离以后，利用柠檬酸与重氮化的磺胺酸（即对氨基苯磺酸）的特效反应，于将各种有机酸以它们的钡盐形式分离以后，利用柠檬酸与重氮化的磺胺酸（即对氨基苯磺酸）的特效反应，于 420nm 波长处比色测定。波长处比色测定。2 试剂试剂 21 柠檬酸（柠
2、檬酸（HG 311081981）：分析纯。分子式：）：分析纯。分子式：C6H8O7H2O。22 浓氨水（浓氨水（GB 6311977）：密度）：密度204=0.910，分析纯。，分析纯。23 乙醇（乙醇（GB 6791980）：分析纯，）：分析纯，95%溶液。溶液。24 冰乙酸（冰乙酸（GB 6761978）：分析纯。）：分析纯。25 氢化钡（氢化钡（GB 16171979）：分析纯，）：分析纯，20%溶液。将溶液。将 20g 纯的纯的 BaC122H2O用水溶解，定容至用水溶解，定容至 100mL。26 洗涤液：将洗涤液：将 140mL 蒸馏水与蒸馏水与 30mL（2.3）96%乙醇混合。乙
3、醇混合。27 硫酸钠（京硫酸钠（京 Q/HG 1022711982）：分析纯，）：分析纯，7.1%溶液。将溶液。将 71g 无水硫酸钠用水溶解，稀释至无水硫酸钠用水溶解，稀释至 1L。28 活性炭。活性炭。29 乙酸钠（乙酸钠（GB 6941981）：分析纯，）：分析纯，27%溶液。将溶液。将 270g 无水乙酸钠用水溶解，稀释至无水乙酸钠用水溶解，稀释至 1 升。升。210 亚硝酸钠（亚硝酸钠（GB 6331977）：分析纯，）：分析纯，2%溶液。将溶液。将 2g 亚硝酸钠用水溶解，稀释至亚硝酸钠用水溶解，稀释至 100mL，贮于棕色玻璃瓶中。，贮于棕色玻璃瓶中。211 磺胺酸：分析纯，将磺
4、胺酸：分析纯，将 1.5g 磺胺酸溶解于磺胺酸溶解于 50mL 冰乙酸中，再用水稀释至冰乙酸中，再用水稀释至250mL。剧烈摇荡。放置过夜。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。剧烈摇荡。放置过夜。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。212 四乙酸铅（四乙酸铅（HG 39741976，分析纯）饱和溶液：在具塞玻璃瓶中，加入，分析纯）饱和溶液：在具塞玻璃瓶中，加入 50g 四乙酸铅（在加入时用冰乙酸润湿）和约四乙酸铅（在加入时用冰乙酸润湿）和约 250mL 冰乙酸。摇荡。静置到未溶解的四乙酸沉降下来，得到透明的上清液。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。上清液用完后，可加入冰乙酸再配制饱和溶液。冰乙酸。摇荡。
5、静置到未溶解的四乙酸沉降下来，得到透明的上清液。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。上清液用完后，可加入冰乙酸再配制饱和溶液。213 四乙酸铅（四乙酸铅（HG 39741976）：分析纯，）：分析纯，1%溶液。吸取溶液。吸取 5.0mL 四乙酸铅饱和溶液于四乙酸铅饱和溶液于 250mL 锥形瓶中，迅速加入锥形瓶中，迅速加入 50mL10%碘化钾溶液。在淀粉指示剂存在下，立刻用碘化钾溶液。在淀粉指示剂存在下，立刻用 0.1M 硫代硫酸钠溶液滴定。用量为硫代硫酸钠溶液滴定。用量为mL。2.251000 取体积相当于取体积相当于 mL 四乙酸铅饱和溶液，用冰乙酸溶液（四乙酸铅饱和溶液，用冰乙酸溶液（2.
6、4）稀释至）稀释至 1L。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。贮于棕色玻璃瓶中，长期稳定不变。注：试剂一定要很纯，在无柠檬酸存在时，用下述方法测定空白时，不应生成沉淀或产生颜色。注：试剂一定要很纯，在无柠檬酸存在时，用下述方法测定空白时，不应生成沉淀或产生颜色。2 14 重氮盐溶液：在重氮盐溶液：在 1mL 亚硝酸钠溶液中亚硝酸钠溶液中(2.10)加入加入 5mL 磺胺酸溶液（磺胺酸溶液（2.11），），中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 NY 82.141998 搅匀。搅匀。3 仪器仪
7、器 31 分光光度计分光光度计 32 常用电动离心机。常用电动离心机。33 离心管（硼硅酸耐热硬质玻璃）：离心管（硼硅酸耐热硬质玻璃）：4050mL。34 容量瓶：容量瓶：50mL、100mL。35 移液管：移液管：1mL、5mL、10mL。4 测定程序测定程序 41 标准曲线的绘制标准曲线的绘制 将将 250mg水合柠檬酸（水合柠檬酸（2.1）溶解于）溶解于 7.1%硫酸钠溶液中，瓶稀释至硫酸钠溶液中，瓶稀释至 100mL。将上述溶液，用将上述溶液，用 7.1%硫酸钠溶液进一步稀释，其方法：硫酸钠溶液进一步稀释，其方法：5mL 稀释至稀释至 200mL 5mL 稀释至稀释至 100mL 5m
8、L 稀释至稀释至 50mL 10mL 稀释至稀释至 50mL 20mL 稀释至稀释至 50mL 这些稀释液相当于每升果汁含水量这些稀释液相当于每升果汁含水量 0.0625g、0.125g、0.250g、0.500g、1.0g水合柠檬酸（按 4.2 所述方法处理过的）。每份稀释液各取两份 2.0mL 于两个50mL 锥形瓶中，标上记号 a 和 b，再按 4.3 所述方法测定。水合柠檬酸（按 4.2 所述方法处理过的）。每份稀释液各取两份 2.0mL 于两个50mL 锥形瓶中，标上记号 a 和 b，再按 4.3 所述方法测定。曲线的零点是用 2.0mL7.1%硫酸钠溶液置于锥形瓶 a 和 b 中（
9、空白溶液，用冰乙酸；试液 b，用 1%四乙酸铅溶液）。然后按 4.3 所述同样操作程序而得到的。曲线的零点是用 2.0mL7.1%硫酸钠溶液置于锥形瓶 a 和 b 中（空白溶液，用冰乙酸；试液 b，用 1%四乙酸铅溶液）。然后按 4.3 所述同样操作程序而得到的。连接所测定的各点，可得一条稍弯曲的曲线，曲线几乎通过坐标原点。连接所测定的各点，可得一条稍弯曲的曲线，曲线几乎通过坐标原点。42 测定液的制备 42 测定液的制备 421 吸移入吸移入 5mL 试液、试液、1mL 氨溶液、氨溶液、1mL 氯化钡溶液于离心管中，用玻棒搅匀。两分钟后，加入氯化钡溶液于离心管中，用玻棒搅匀。两分钟后，加入
10、15mL 乙醇、搅匀。准确放置乙醇、搅匀。准确放置 5min，离心，离心 34min。小心地轻轻倒出上清液，再按如下方法洗涤沉淀。小心地轻轻倒出上清液，再按如下方法洗涤沉淀。用移液管吸取用移液管吸取 2mL 洗涤液，边冲洗离心管上部，边转动。用顶端包有橡皮的玻棒搅拌，使沉淀与洗涤液混匀。用从洗涤液，边冲洗离心管上部，边转动。用顶端包有橡皮的玻棒搅拌，使沉淀与洗涤液混匀。用从 2mL 移液管里有力地喷出的洗涤液洗涤两次，以冲掉粘附于橡皮头上的沉淀。移液管里有力地喷出的洗涤液洗涤两次，以冲掉粘附于橡皮头上的沉淀。再次离心，轻轻倒出上清液，再如上述方法洗涤沉淀。再次离心，轻轻倒出上清液，再如上述方法
11、洗涤沉淀。422 用大约用大约 10mL7.1%硫酸钠溶液，覆盖经洗涤的，为乙醇溶液润湿的沉淀。将离心管置于沸水浴中硫酸钠溶液，覆盖经洗涤的，为乙醇溶液润湿的沉淀。将离心管置于沸水浴中 10min，搅拌。将含有硫酸钡沉淀的溶液，趁热转移至，搅拌。将含有硫酸钡沉淀的溶液，趁热转移至 50mL 容量瓶中，用硫酸钠溶液洗涤离心管。冷却。用硫酸钠溶液定容。转移至盛有容量瓶中，用硫酸钠溶液洗涤离心管。冷却。用硫酸钠溶液定容。转移至盛有 0.2g 活性碳的活性碳的 100mL 锥形瓶中。锥形瓶中。放置放置 5min，经细密滤纸过滤。该溶液含有稀释度为，经细密滤纸过滤。该溶液含有稀释度为 1:10 的柠檬酸
12、。的柠檬酸。43 比色定量测定比色定量测定 在标记在标记 a 和和 b 的两个的两个 50mL 锥形瓶中，各吸移入锥形瓶中，各吸移入 10mL 乙酸钠溶液。在乙酸钠溶液。在 a、b 锥形瓶中各吸入锥形瓶中各吸入 20mL 测定液（测定液（4.2）。往）。往 a 瓶中加入瓶中加入 2mL 重氮盐溶液和重氮盐溶液和 5mL冰乙酸。往冰乙酸。往 b 瓶中加入瓶中加入 2mL 重氮盐溶液和重氮盐溶液和 5mL1%四乙酸铅溶液。立即将计时器准确定位在四乙酸铅溶液。立即将计时器准确定位在 13min 处。处。约约 5min 后，把后，把 a 和和 b 瓶中的内溶物用折叠滤纸快速过滤。瓶中的内溶物用折叠滤纸
13、快速过滤。在即将到达在即将到达 13min 前，将滤液转移至前，将滤液转移至 3cm 比色皿中，比色皿中，a 滤液作空白液，准确地在滤液作空白液，准确地在 13min 时，于时，于 420nm 波长处测读吸光值。波长处测读吸光值。中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 NY 82.141998 注：若吸光值太高，可将注：若吸光值太高，可将 4.1 得到的测定液用得到的测定液用 7.1%硫酸钠适当稀释后，重复测定。结果计算时要考虑稀释度。硫酸钠适当稀释后，重复测定。结果计算时要考虑稀释度。5 结果的表示和计算结果的表示和计算 柠檬酸含量（以柠檬酸含量（以 C6H
14、8O7H2O 计）可以直接由标准曲线得到。一水合柠檬酸用计）可以直接由标准曲线得到。一水合柠檬酸用 g/L 表示，保留两位小数。表示，保留两位小数。注：比色皿经常用络酸洗液清洗，因为经常使用时，比色皿内壁易吸附四乙酸铅，这层薄膜会导致不精确的结果。注：比色皿经常用络酸洗液清洗，因为经常使用时，比色皿内壁易吸附四乙酸铅，这层薄膜会导致不精确的结果。附加说明：附加说明：本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准主要起草人：张坤英。本标准主要起草人：张坤英。中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施