1、NY 82.111988 中华人民共和国农牧渔业部部标准中华人民共和国农牧渔业部部标准 果汁测定方法果汁测定方法 果胶的测定果胶的测定 NY 82.111988 本标准等效采用国际果汁联盟本标准等效采用国际果汁联盟 IFJU 分析法。No.26（1964）果胶的测定。分析法。No.26（1964）果胶的测定。1 原理原理 果胶物质是一种植物胶，用乙醇作为沉淀剂，可使其沉淀分离。全部沉淀用作果胶总量的测定，或经适当提取后，测定水溶性果胶。果胶物质是一种植物胶，用乙醇作为沉淀剂，可使其沉淀分离。全部沉淀用作果胶总量的测定，或经适当提取后，测定水溶性果胶。果胶的水解产物半乳糖醛酸在强酸中与咔唑发生缩
2、合反应。然后对其紫红色溶液进行比色定量。果胶的水解产物半乳糖醛酸在强酸中与咔唑发生缩合反应。然后对其紫红色溶液进行比色定量。2 试剂试剂 21 乙醇（乙醇（GB 6791980）：分析纯，）：分析纯，95%溶液。溶液。22 乙醇（乙醇（GB 6791980）：分析纯，）：分析纯，63%溶液。溶液。100mL 蒸馏水与蒸馏水与 200mL95%乙醇（乙醇（2.1）混合。）混合。23 精制乙醇：精制乙醇：1 升升 95%乙醇（乙醇（2.1）与）与 4g 锌粉和锌粉和 2mL 浓硫酸共煮沸，置恒温水浴中回流浓硫酸共煮沸，置恒温水浴中回流 10 小时，用全玻璃仪器蒸馏。每小时，用全玻璃仪器蒸馏。每 1
3、000mL 馏出液中，加入锌粉和氢氧化钾（馏出液中，加入锌粉和氢氧化钾（GB 23061980，分析纯）各，分析纯）各 4g，进行重蒸馏。，进行重蒸馏。24 氢氧化钠（氢氧化钠（GB 6291981）：分析纯，）：分析纯，1M 溶液。溶液。25 浓硫酸（浓硫酸（GB 6251977）：分析纯，与咔唑溶液不应产生颜色。）：分析纯，与咔唑溶液不应产生颜色。26 咔唑（指示剂级）：咔唑（指示剂级）：0.1%咔唑乙醇（咔唑乙醇（2.3）溶液。用）溶液。用 0.1g 经升华提纯的咔唑溶解于精制乙醇（经升华提纯的咔唑溶解于精制乙醇（2.3）中，并稀释至）中，并稀释至 100mL。27 无水半乳糖醛酸（理论
4、分子量为无水半乳糖醛酸（理论分子量为 194）。）。3 仪器仪器 31 分光光度计。分光光度计。32 实验室常用电动离心机：约实验室常用电动离心机：约 3000r/min。备有。备有 50mL 刻度离心管。刻度离心管。33 恒温水浴：恒温水浴：30100。34 电动搅拌器。电动搅拌器。35 容量瓶：容量瓶：100mL。36 吸量管：吸量管：1mL、5mL、10mL。37 试管：试管：25200mm。4 测定程序测定程序 41 果胶质的沉淀果胶质的沉淀 将将 15mL 果汁（或果汁（或 4g 浓缩汁加浓缩汁加 12mL 水）置于水）置于 50mL 刻度离心管（刻度离心管（3.2）中，加入）中，加
5、入 95%热（热（75）乙醇溶液 25mL，在 85水浴中加热 10min，充分搅拌。再加 95%乙醇使总体接近 50mL，离心 15min，弃去上清液。在 85水浴上再用 63%乙醇洗涤沉淀。离心分离，弃去上清液。此步骤反复操作，直至清液中不再产生糖反应为止。）乙醇溶液 25mL，在 85水浴中加热 10min，充分搅拌。再加 95%乙醇使总体接近 50mL，离心 15min，弃去上清液。在 85水浴上再用 63%乙醇洗涤沉淀。离心分离，弃去上清液。此步骤反复操作，直至清液中不再产生糖反应为止。42 果胶总量提取液的制备 42 果胶总量提取液的制备 将将 4.1 制备出的果胶沉淀，全部洗入制
6、备出的果胶沉淀，全部洗入 100mL 容量瓶中。加入容量瓶中。加入 5mL1M 氢氧化钠溶液，用水稀释至刻度，混匀。至少放置氢氧化钠溶液，用水稀释至刻度，混匀。至少放置 15min，并不时摇荡。过滤后，滤，并不时摇荡。过滤后，滤中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 NY 82.111988 液用于比色测定。液用于比色测定。43 水溶性果胶的提取水溶性果胶的提取 如欲测定水溶性果胶，可在如欲测定水溶性果胶，可在 4.1 制备的果胶沉淀离心管中，加入制备的果胶沉淀离心管中，加入 5mL 水
7、，充分搅拌。补加水使总体积为水，充分搅拌。补加水使总体积为 35mL。用搅拌器强烈搅拌。离心分离。用搅拌器强烈搅拌。离心分离 15min。将提取液转移入。将提取液转移入 100mL 容量瓶中。重复水提取过程，再把水提取液并入同一容量瓶中。加入容量瓶中。重复水提取过程，再把水提取液并入同一容量瓶中。加入 5mL1M 氢氧化钠溶液，用水稀释至刻度。用于比色测定。氢氧化钠溶液，用水稀释至刻度。用于比色测定。44 比色测定比色测定 取大试管（取大试管（25200mm），吸移入），吸移入 1mL 提取液（提取液（4.2）或（）或（4.3）。在试样中，加入）。在试样中，加入 0.5 mL 0.1%咔唑乙醇
8、溶液，并产生白色絮状沉淀，不断摇动试管，再加入咔唑乙醇溶液，并产生白色絮状沉淀，不断摇动试管，再加入6mL 浓硫酸。立刻将试管放入浓硫酸。立刻将试管放入 85水浴里水浴里 5min，再使之冷却，再使之冷却 15min。然后立刻用分光光度计在。然后立刻用分光光度计在 525nm 波长处，用波长处，用 2cm 比色皿测量吸光值。用试剂空白调零。比色皿测量吸光值。用试剂空白调零。45 标准曲线的绘制标准曲线的绘制 451 准确称取半乳糖醛酸准确称取半乳糖醛酸 100mg，溶解于水中，加入，溶解于水中，加入 0.5ml1M 氢氧化钠溶液，并定容至氢氧化钠溶液，并定容至 100mL，混匀。得，混匀。得
9、1mg/mL 的半乳糖醛酸原液。的半乳糖醛酸原液。452 移取上述原液移取上述原液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，分别注入，分别注入 100mL容量瓶中，稀释至刻度，即得一组浓度为容量瓶中，稀释至刻度，即得一组浓度为 10、20、30、40、50、60、70g/mL的半乳糖醛酸标准溶液。的半乳糖醛酸标准溶液。453 用上述标准溶液，分别按（用上述标准溶液，分别按（4.1）方法步骤测量。以测得的吸光值为纵坐标，每毫升标准溶液中的半乳糖醛酸的含量为横坐标，绘制标准曲线。）方法步骤测量。以测得的吸光值为纵坐标，每毫升标准溶液中的半乳糖醛酸的含量为横坐标，绘制标准曲线。5
10、 结果的表示和计算结果的表示和计算 果胶的含量以果胶的含量以 mg/L 或或 mg/kg 为单位表示（不留小数位）。为单位表示（不留小数位）。半乳糖醛酸简称半乳糖醛酸简称 GA，其含量可从标准曲线中查得，单位是，其含量可从标准曲线中查得，单位是g/mL。按下式计算：按下式计算：在果汁中：在果汁中：gGA100 mgGA/L=15 在浓缩果汁中：在浓缩果汁中：gGA100 mgGA/kg=4 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 NY 82.111988 附录附录 A 注意事项注意事项（
11、补充件）（补充件）A1 当果胶沉淀从果汁提取液里被离心分离时，往往在悬浮液里还剩有少许不溶性固体微粒。为了避免这一点，在第一次提取时，在离心管里加入大约当果胶沉淀从果汁提取液里被离心分离时，往往在悬浮液里还剩有少许不溶性固体微粒。为了避免这一点，在第一次提取时，在离心管里加入大约 1/2茶匙的滤纸悬浮物。茶匙的滤纸悬浮物。A2 加硫酸所用的时间是非常严格的。如果在加硫酸所用的时间是非常严格的。如果在 7 秒钟内加入秒钟内加入 6mL，溶液的温度才能达到，溶液的温度才能达到 85，此时可以立即直立安放在，此时可以立即直立安放在 85的水浴里。而且应预料到易变的颜色深度。的水浴里。而且应预料到易变
12、的颜色深度。A3 应用咔唑反应比色测定果胶时，其试样的提取液必须是不含糖分的提取液。糖分的存在干扰测定。应尽量洗涤除去糖分。A3 应用咔唑反应比色测定果胶时，其试样的提取液必须是不含糖分的提取液。糖分的存在干扰测定。应尽量洗涤除去糖分。A 4 提取液中是否含糖可用糖分的穆立虚反应法检验。方法是：取提取液 0.5mL注入小试管中，加入 5%萘酚的乙醇溶液 23 滴，充分混和，此时溶液稍有白色浑浊。然后，使试管稍稍倾斜，用吸管沿管壁慢慢加入浓硫酸 1mL（注意水层与浓硫酸不可混和）。将试管稍予静置后，若在两液层的界面产生紫红色色环，则证明提取液中含有糖分。A 4 提取液中是否含糖可用糖分的穆立虚反应法检验。方法是：取提取液 0.5mL注入小试管中，加入 5%萘酚的乙醇溶液 23 滴，充分混和，此时溶液稍有白色浑浊。然后，使试管稍稍倾斜，用吸管沿管壁慢慢加入浓硫酸 1mL（注意水层与浓硫酸不可混和）。将试管稍予静置后，若在两液层的界面产生紫红色色环，则证明提取液中含有糖分。附加说明：附加说明：本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准由北京农业工程大学负责起草。本标准主要起草人:孙晓光。本标准主要起草人:孙晓光。中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施 中华人民共和国农牧渔业部 19880127 发布 19880801 实施