1、NY/T1422-2007前言本标准修改采用DF79B:1991乳粉、冰淇淋粉和加工干酪中乳糖含量测定一酶法（英文版）。本标准根据DF79B:1991重新起草。考虑到我国国情，本标准与该国际标准的主要差异如下：一试剂部分增加酸度调节剂氢氧化钠、硫酸以及酶试剂硫酸铵的配制方法；一增加试样制备一章，包括液体、固液体、固体试样的制备：分析步骤中增加标准曲线的绘制，由试液吸光度测定与标准系列比较定量，不采用国际标准中摩尔吸光系数计算定量；以试剂空白和试液空白扣除干扰组分和葡萄糖本底值，不采用国际标准中吸光度减量计算；免去国际标准中预试验和试验报告章条；一增加附录A,规定酶的技术要求、试验方法及判定规则
2、；-编写格式、用语遵照我国标准GB/T1.1一2000（标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T20001.4一2001标准编写规则第4部分：化学分析方法。本标准的附录A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国科学院沈阳应用生态研究所农产品安全与环境质量检测中心。本标准主要起草人：王颜红、林桂凤、王世成、张红、杨玉兰、齐伟。INY/T1422-20077分析步骤7.1试液制备用分析天平(5.1)称取试样，放置于100mL玻璃烧杯中，固液体试样或液体试样称取2g,固体试样称取0.2g,均精确到0.1mg。加入约20
3、mL4050热水，搅匀成乳浊状或悬浊状试料，转移至250mL容量瓶中。用刻度移液管依次加入5.0L亚铁氰化钾溶液(4.1)，5.0mL、硫酸锌溶液(4.2)和10.0mL4g/L氢氧化钠溶液(4.4)，每次加入后均应充分摇匀。定容，混匀，静置30min,过滤，弃去最初滤液约30mL。吸取5.00mL滤液于100mL容量瓶中，定容，即为试液。7.2标准曲线绘制用微量移液管吸取0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL乳糖标准溶液(4.12)，分别置于10mL比色管(5.2)中，各加人0.20mL柠檬酸缓冲溶液(4.7)，0.05mLB-GLS(NH4)2S04悬浊液(4.10
4、)，摇匀，于361恒温水浴锅(5.4)中恒温15min。取出后加人1.00 mLNADP+-ATP-TEA缓冲溶液(4.9),0.05mLHK-G6PDH-(NH)2S04铵悬浊液(4.11)，摇匀，于361恒温水浴锅中恒温60min。取出后，冷却至室温，用水定容至5.00mL,摇匀，放置5min。用1cm比色皿，以乳糖标准溶液含量为0.00的试剂溶液作参比，在波长340m处测定各比色管内溶液的吸光度。以乳糖含量为纵坐标，以吸光度值为横坐标，绘制标准曲线。7.3试液的测定用微量移液管吸取1.00mL试液(7.1)，置于10mL比色管中，加入0.20L柠檬酸缓冲溶液，1.00 mL NADP+-
5、ATP-TEA缓冲溶液，0.05mLHK-G6PDH(NH)2SO4悬浊液，摇匀，于361恒温水浴锅中恒温60min,取出，冷却至室温，用水定容至5.00mL,摇匀。此溶液即为空白溶液。用微量移液管吸取1.00mL试液(7.1)，置于10mL比色管中。以下按7.2“各加人0.20mL柠檬酸缓冲溶液(4.7)用1cm比色皿”操作，以空白溶液作参比，在波长340nm处测定比色管内试液的吸光度，在标准曲线上查出对应的乳糖含量。8结果计算乳及乳制品中乳糖的含量，数值以克每百克(g/100g)表示，按下式计算：cVIV3X=10000mV2V4式中：X一乳及乳制品中乳糖的含量，单位为克每百克(g/100g);c一标准曲线上查出的试液中乳糖的含量，单位为微克(g);m试料的质量，单位为克(g);V1一试料经脱蛋白处理后的定容体积，250mL;V2一吸取滤液体积，5.00mL:V3一滤液定容体积，100mL;V4吸取试液体积，1.00mL。两个平行样测定算术平均值的计算结果保留3位有效数字。9精密度9.1重复性在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值算术平均值的6%。3