1、NY/T3321-20183.4样品按GB/T14699.1的规定采集样品。选取有代表性饲料样品至少500g,按GB/T20195的规定制备样品。3.5试验步骤3.5.1提取称取预混合饲料试样2g(精确至0.01g),置于100mL容量瓶中，加入80mL水，混合后置于振荡器上刷烈振荡或超声提取30min,静置10min,定容，离心或过滤，用水稀释使其浓度在2ug/mLl00g/mL,过0.45m滤膜，上机测定。3.5.2测定3.5.2.1色谱条件色谱柱：非抑制型阳离子交换分离柱（长250mm,内径4mm)或性能相当的其他分析柱。流速：l.0mL/min。柱温：40。进样量：25L。检测器：电导
2、检测器。3.5.2.2测定待IC分析仪基线平稳后，连续注入L肉碱标准溶液，直至得到峰面积能够重现的色谱峰。依次注入标准、试样溶液，以色谱峰的保留时间定性、峰面积积分值定量，用标准系列进行单点或多点校准。样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。3.6试验数据处理试样中L-肉碱含量以质量分数X表示，单位为毫克每千克(mg/kg),按式(1)和式(2)计算。X,=CXVXnx1000X0.815（1m1000式中：C试样溶液中L-肉碱浓度，单点校准时由式(2)计算得到，多点校准时从标准曲线查得，单位为微克每毫升(ug/mL)；V试样的提取液总体积，单位为毫升(mL):稀释倍数；m试样的质量，单位为克(g);0.815一L-肉碱与L-肉碱盐酸盐的换算关系。C C.XA(2)式中：C。混合标准工作液中L-肉碱浓度，单位为微克每毫升(g/mL);A,试样溶液中L-肉碱的峰面积；A。混合标准工作液中L-肉碱的峰面积。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。如需分析饲料中L肉碱是否含有D-肉碱成分，可参考附录A的方法进行分离鉴别。3.7精密度在重复性条件下，获得的2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不得超过算术平均值的10%。以大于10%的情况不超过5%为前提。4第二法液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)4.1原理2
