1、书 书 书?犛犖犜?犇犲 狋 犲 狉犿 犻 狀 犪 狋 犻 狅 狀狅 犳狋 犲 狋 狉 犪 犮 狔 犮 犾 犻 狀 犲犪 狀 狋 犻 犫 犻 狅 狋 犻 犮 狊犻 狀犮 狅 狊犿犲 狋 犻 犮 狊?书 书 书?（）?（）?：（）?：?书 书 书前言本标准按照 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：黄超群、谢文、侯建波、史颖珠、陈玲玲、楼成杰、帅大尧、孙成琪。犛犖犜 化妆品中四环素类抗生素的测定范围本标准规定了化妆品中二甲胺四
2、环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素等种四环素类抗生素测定的高效液相色谱（）和液相色谱质谱质谱（）检测方法。本标准适用于爽肤水、润肤乳、面膜、香皂、洗面奶、祛痘霜中种四环素类抗生素的测定。本标准的液相色谱质谱质谱法为仲裁法。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法第一法高效液相色谱法方法提要以甲醇草酸溶液为溶剂，超声提取、离心、过滤，用配有二极管阵列检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。
3、试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，所用水为符合 规定的一级水。乙腈：液相色谱纯。甲醇：液相色谱纯。草酸：优级纯。甲酸：液相色谱纯。氨水。磷酸：优级纯。磷酸溶液：移取 磷酸（），用水定容至 。草酸溶液：称取 草酸（），用水溶解并定容至 。甲醇草酸溶液（，体积比）：量取 甲醇（）与 草酸溶液（）混合。二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素标准品：纯度大于或等于，参见附录中表。标准储备溶液：分别称取经折算适量标准品（），分别用甲醇溶解并定容，溶液浓度为 ，该标准储备液贮存于 以下，有效期个月。混合标准中间溶液：分别准确移取 二甲胺
4、四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、犛犖犜 甲烯土霉素、强力霉素，差向脱水四环素、脱水四环素标准储备溶液（），用甲醇定容至 ，配制成二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素浓度为，差向脱水四环素、脱水四环素浓度为 的混合标准中间溶液。该标准中间溶液贮存于 以下。混合标准工作溶液：根据需要，将混合标准中间溶液（）用甲醇草酸溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液。微孔滤膜：，有机相。仪器和设备 液相色谱仪：配二极管阵列检测器。分析天平：感量 和 。涡旋混合器。超声波清洗器。台式离心机：转速不低于 。计。测定步骤 样品处理准确称取均匀试样（精确至 ），置入 塑料离
5、心管中，加入约 甲醇草酸溶液（），涡旋混匀后，用甲酸（）或氨水（）调节至，超声提取 ，以 离心。上清液转移至 容量瓶，用甲醇定容。过 滤膜（），供高效液相色谱仪测定。测定 液相色谱条件 色谱柱：，（内径），或相当者；流动相：乙腈 磷酸溶液，梯度洗脱程序见表；检测波长：程序可变波长，为 ，为 ；柱温；流速：；进样量：；后运行时间：。表液相色谱法梯度洗脱程序时间 乙腈 磷酸 犛犖犜 液相色谱测定根据样品中被测物的含量，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中各种四环素抗生素的响应值均应在仪器的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定，在上述色谱条件下，各目标化合物的参考保留时间参
6、见附录中表。标准溶液的液相色谱图参见附录中图。空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述用色谱数据处理机或按式（）计算试样中四环素类抗生素的含量，计算结果须扣除空白值：犡犻犮犻犞 犿 （）式中：犡犻 试样中待测物质的含量，单位为毫克每千克（）；犮犻 从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为微克每毫升（）；犞 样液最终定容体积，单位为毫升（）；犿 最终样液所代表的试样质量，单位为克（）；测定低限和回收率 测定低限本标准对于化妆品中二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素的测定低限均为 ，差向脱水四环素和脱水四环素的测定低限为 。回收率本标准的添加
7、浓度与回收率范围参见附录中表。第二法液相色谱质谱质谱法 方法提要以甲醇草酸溶液为溶剂，超声提取、离心、过滤，液相色谱质谱质谱仪测定，外标法定量。试剂和材料除特殊注明外，所用试剂和材料均同 ，。甲酸溶液：。移取 甲酸（），用水定容至 。混合标准中间溶液：分别准确移取 土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素，甲烯土霉素，二甲胺四环素标准储备溶液（），用甲醇定容犛犖犜 至 ，配制成土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素浓度为，甲烯土霉素浓度为，二甲胺四环素浓度为 的混合标准中间溶液。该标准中间溶液贮存于 以下。混合标准工作溶液：根据
8、需要，将混合标准中间溶液（）用甲醇草酸溶液（）稀释成适当浓度的标准工作溶液。仪器和设备除特殊注明外，所用仪器和设备均同 。液相色谱质谱质谱仪：配有电喷雾离子源（）。测定步骤 样品处理准确称取 均匀试样（精确至 ），置入 塑料离心管中，加入约 甲醇草酸溶液（），涡旋混匀后，用甲酸（）或氨水（）调节至，超声提取 ，以 离心。上清液转移至 容量瓶，用甲醇定容。过 滤膜（），供液相色谱质谱质谱仪测定。测定 色谱条件 色谱柱：，（内径），或相当者；柱温：；进样量：；流动相：甲醇 甲酸溶液，梯度洗脱程序见表；流速：。表液相色谱质谱质谱法梯度洗脱程序时间 甲醇 甲酸 质谱条件 离子源：电喷雾离子源；犛犖犜
9、扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；鞘气、辅助气均为高纯氮气；碰撞气为高纯氩气；使用前应调节各参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录；监测离子对见附录中表。液相色谱质谱质谱测定 定量测定根据试样中被测样液的含量，选定浓度相近的混合标准溶液，待测物的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合标准溶液及样液等体积参插进样测定，如果含量超过标准曲线范围，应稀释到适当浓度后分析。在上述色谱条件下，各目标化合物的参考保留时间参见附录中表。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录中图。定性测定按照上述仪器条件测定样品和标准工作溶液，如果样品与标准工作液中待测物质色谱峰相对保留时间在 范围内；定性离子
10、对的相对丰度与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许误差不超过表规定的范围，则可判断样品中存在相应的被测物。表相对离子丰度最大容许误差相对离子丰度（基峰）最大容许误差 空白试验除不加试样外，均按上述操作步骤进行。结果计算和表述同第章。测定低限和回收率 测定低限本标准对于化妆品中土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、强力霉素、差向脱水四环素和脱水四环素的测定低限均为 ，甲烯土霉素的测定低限为 ，二甲胺四环素的测定低限为 。回收率本标准的添加浓度与回收率范围参见附录中表。犛犖犜 附录犃（规范性附录）标准物质信息表犃 标准物质犆犃犛号、分子式及相对分子质量化合物英文名称号分子式相对分子质量
11、二甲胺四环素盐酸盐 土霉素盐酸盐 四环素盐酸盐 去甲金霉素盐酸盐 金霉素盐酸盐 甲烯土霉素盐酸盐 强力霉素盐酸盐 差向脱水四环素盐酸盐 脱水四环素盐酸盐 犛犖犜 附录犅（资料性附录）参考保留时间表犅 九种四环素类抗生素的参考保留时间化合物法参考保留时间 法参考保留时间 二甲胺四环素 土霉素 四环素 去甲金霉素 金霉素 甲烯土霉素 强力霉素 差向脱水四环素 脱水四环素 犛犖犜 附录犆（资料性附录）高效液相色谱图与液相色谱质谱质谱法多反应监测色谱图图犆 九种四环素类抗生素标准溶液的液相色谱图（二甲胺四环素、土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、甲烯土霉素、强力霉素：犵犿犔；差向脱水四环素、脱水四环素
12、：犵犿犔）犛犖犜 图犆 九种四环素类抗生素标准溶液的多反应监测（犕犚犕）色谱图（土霉素、四环素、去甲金霉素、金霉素、强力霉素、差向脱水四环素、脱水四环素：犵犿犔：甲烯土霉素：犵犿犔；二甲胺四环素、犵犿犔）犛犖犜 附录犇（资料性附录）液相色谱质谱质谱法仪器参数与监测离子）参数与监测离子：）电喷雾电压：；）离子源温度：；）鞘气压力：；）辅助气压力：；）毛细管温度：；）碰撞气压力：；）监测离子对信息、碰撞能量等参数见表。表犇 九种四环素类抗生素的监测离子对和碰撞能量化合物母离子（犿狕）子离子（犿狕）碰撞能量二甲胺四环素 土霉素 四环素 去甲金霉素 金霉素 甲烯土霉素 强力霉素 差向脱水四环素 脱水四
13、环素 注：带为定量离子。）非商业性声明：附录所列参考质谱条件是在 液质联用仪上完成的，此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。犛犖犜 附录犈（资料性附录）高效液相色谱法与液相色谱质谱质谱法回收率数据表犈 化妆品中四环素类抗生素添加浓度及回收率试验数据（犎犘犔犆法）化合物添加浓度 回收率范围爽肤水润肤乳面膜香皂洗面奶祛痘霜二甲胺四环素 土霉素 四环素 去甲金霉素 金霉素 甲烯土霉素 强力霉素 差向脱水四环素 脱水四环素 犛犖犜 书 书 书犛犖犜 表犈 化妆品中四环素类抗生素添加浓度及回收率试验数据（犔犆 犕犛犕犛法）化合物添加浓度 回收率范围爽肤水润肤乳面膜香皂洗面奶祛痘霜二甲胺四环素 土霉素 四环素 去甲金霉素 金霉素 甲烯土霉素 强力霉素 差向脱水四环素 脱水四环素 犜犖 犛书号：定价：元