1、ICS 11.220 B 41 DB21 辽宁省地方标准 DB 21/T 24662015 禽流感病毒免疫层析（胶体金）检测方法 Method of the immunochromatogarphic assay for the detection of avian influenza virus 2015-04-30 发布 2015-06-30 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 24662015 I 前 言 本标准根据GB/T 1.1-2009的有关规定进行制定。本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准由辽宁省质量技术监督局发布。本标准负责
2、起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。本标准起草人：李树博、赵晓彤、金梅林、董晓辉、吴运谱、高志峰、于长泳、王志国、赵鹏、徐高原、王志勇 DB21/T 24662015 1 禽流感病毒免疫层析（胶体金）检测方法 1 范围 本标准规定了禽流感病毒免疫层析方法的材料设备、检测样品处理、检测方法、判定标准、废弃物处理。本标准适用于检测禽排泄物、组织、鸡胚尿囊液及细胞培养物中的禽流感病毒。本标准适用于生物安全二级实验室操作。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修
3、改单）适用于本文件。NY/T 541-2002 动物疫病实验室检验采样方法 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 GB/T 16569 畜禽产品消毒规范 3 材料设备 3.1 检测卡 禽流感病毒检测试纸条装在塑料卡中制成检测卡，铝箔密封，内装干燥剂，室温或冷藏保存。测试卡结构及测试部位如下图所示。图 1 3.2 样品处理液 Tris Base 24.2g、Triton-x 100 10mL，加注射用水至1000mL，调pH值至9.0，过滤除菌，无菌分装，1mL/管。样品孔（S）检测区 检测线（T）质控线（C）DB21/T 24662015 2 3.3 其他 塑料吸管、棉拭子
4、、高速冷冻离心机 4 检测样品处理 4.1 泄殖腔拭子检测样品的处理 将收集的泄殖腔棉拭子插入到含有处理液的样品管中，充分混合，使其充分洗脱，以 28，12,000r/min 离心 10min，取上清待检。4.2 组织检测样品的处理 称取组织块 0.5g，置于匀浆器中，加生理盐水 1mL，研磨完全后取出组织浸出液，然后置 28，12,000r/min 离心 10min，取上清待检。4.3 鸡胚尿囊液样品的处理 尿囊液样品以 28，12,000r/min 离心 2min，取上清待检。4.4 细胞培养样品的处理 细胞培养液可直接用于检测或者冻融一次后检测。5 检测方法 取适量的检测样品（80L120L，滴管 3 滴4 滴），缓慢滴加到样品孔中，当看到红色液体在试纸条上移动时，放慢加样速度。整个加样过程控制在 1min 内完成。加样完成后将试纸条平放在桌面上，5min30min 内观察结果。6 判定标准 阳性结果：在试纸条上出现两条红色的条带。阴性结果：在试纸条上仅在质控线处出现一条红色的条带。无效结果：在质控线不出现红色的条带。7 废弃物处理 检测过程中的废弃物，应收集后高压灭菌处理。高压灭菌后送到指定的医疗垃圾处理站销毁。_