1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB21 辽宁省地方标准 DB21/T 35962022 蛹虫草试管菌种检验规范 Testing Specification for Tube strain of Cordyceps militaris 2022-06-30 发布 2022-07-30 实施 辽宁省市场监督管理局 发 布 DB21/T 35962022 I 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件结构和起草规则 的规定起草。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁省海洋水产科学研究院,辽宁省农产品加工流通中心。本文件主要起草
2、人：孟楠，李亚洁，温志新，都兴范，李学军，米锐，孙永欣，马淑慧，李树英，王弘，杨远，李世轩。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（辽宁省沈阳市和平区太原北街2号），邮编：110001，联系电话：02423447862。文件起草单位通信地址：辽宁省海洋水产科学研究院（大连市沙河口区黑石礁街50号），联系电话：041184671027。DB21/T 35962022 1 蛹虫草试管菌种检验规范 1 范围 本文件规定了蛹虫草试管菌种的质量要求、描述了试验
3、方法、检验规则等要求。本文件适用于蛹虫草试管菌种质量的检验。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 2828.1 计数抽样检验程序 第1部分：按接收质量限（AQL）检索的逐批检验抽样计划 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB/T 12728 食用菌术语 NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 1846 食用菌菌种检验规程 DB21/
4、T 3187 蛹虫草贮藏技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 试管菌种 tube strain 以玻璃试管为培养容器和使用单位的菌种。3.2 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物,也称一级种。3.3 原种 mother spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，移植、扩大次数不超过4代，也称二级种。3.4 角变 sectoring DB21/T 35962022 因菌丝体局部变异或感染病毒而导致菌丝变细、生长缓慢、菌丝体表面特征成角状异常的现象。3.5 生物学效率 biological efficie
5、ncy 单位质量培养料的风干物质所培养产生出的子实体或菌丝体质量（鲜重），常用百分数表示，如风干料100kg产生了新鲜子实体50kg，即为生物学效率50%。3.6 种性 characters of variety 蛹虫草的品种特性是辨别蛹虫草菌种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状。4 仪器设备 应符合NY/T 1846-2010中规定。5 抽样 应符合GB/T 2828.1-2003中规定。试管菌种抽样方案见附录A。6 检验内容和方法 6.1 感官检测 6.1.1 容器 肉眼观察试
6、管有无破损。6.1.2 棉塞或胶塞 手触是否干燥；肉眼观察是否洁净，对光源仔细观察是否有粉状物；松紧度以手提起棉塞（或胶塞）或拔出棉塞（或胶塞）的状况检查；棉塞（或胶塞）透气性和滤菌性以及观察塞入试管口内或漏出试管口外棉塞（或胶塞）的长度检查。6.1.3 培养基灌入量 肉眼观察培养基灌入量多少。6.1.4 斜面长度 用卡尺测量斜面顶端到试管口的距离。6.1.5 接种量 用卡尺测量接种块大小。6.1.6 菌种外观及菌丝生长状态 肉眼观察菌丝生长量、菌丝体特征、菌丝表面状态、菌丝表面有无分泌物，菌落表面是否整齐，有无其他色泽及异常，必要时用5倍放大镜观察。DB21/T 35962022 3 6.1
7、.7 气味 在无菌条件下拔出棉塞（或胶塞），将试管口置于距鼻5cm10cm处，屏住呼吸，用清洗干净、酒精棉球擦拭过得手在试管口上方轻轻煽动，顺风鼻闻。6.2 菌种生物学检验 6.2.1 杂菌和害虫 用放大倍数不低于10 40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每一检样应观察不少于50个 视野。6.2.2 细菌 应将检验样本按无菌操作接种于GB/T 4789.28中规定的营养琼脂培养基或PDA培养基中，（371）培养24h，培养基浑浊或表面出现细菌菌落者为有细菌污染。6.2.3 霉菌 应将检验样本按无菌操作接种于PDA培养基中，（281）培养2d3d，培养基上出现霉菌菌落者为受霉菌污染，必要时
8、进行水封片镜检。用显微镜检测培养基中有霉菌分生孢子者为受霉菌污染。6.3 菌丝生长速度 用直径90mm的无菌培养皿，在无菌条件下倒入CPDA培养基20ml，自然凝固制成平板。取斜面上位于一半处3mm5mm3mm5mm菌种一块，菌丝朝上接种于平板中央，接种平板5个，至于（201）下培养，记录菌丝长满平皿天数。6.4 菌种栽培性状 将试管菌种用PDA培养基制成液体菌种。用附录B中配方，制作蛹虫草45瓶。接种后平均分三组进行常规管理，根据表1所列项目，做好栽培记录，统计检验结果。同时将该菌种的出发菌株设为对照，亦做同样处理。对比二者的检验结果。表1 菌种栽培性状检验记录 检验项目 检验结果 检验项目
9、 检验结果 试管菌种长满所需时间，d 总产，g 液体菌种达到所需浓度时间，d 平均单产，g 液体菌种接种至铺满菌所需天数，d 生物学效率，%液体菌种接种至转色所需天数，d 子实体形态、色泽 液体菌种接种至子实体生长成熟所需时间，d 子实体直径、长度，mm 7 质量要求 7.1 试管菌种感官要求 应符合表2规定。DB21/T 35962022 表2 试管菌种感官质量要求 项目 要求 容器 完整，无损 棉塞或硅胶塞（母种用胶塞）干燥、洁净、松紧适度，能满足透气和滤菌要求 培养基灌入量 为试管总容积的三分之一至四分之一 培养基斜面长度 顶端距管口60 mm80 mm 接种量（接种块大小）（35）mm
10、（35）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面 菌丝体特征 表面分生孢子层均匀、橘黄色 菌丝体表面 均匀、平整、无角变，菌丝分泌物 无 菌落边缘 整齐 气味 有虫草菌特有的香味，无酸、臭、霉等异味 7.2 生物学要求 试管菌种生物学要求应符合表3规定。表3 试管菌种生物学要求 项目 要求 杂菌 无 螨虫 无 细菌 无 霉菌 无 7.3 菌丝生长速度 按照6.3方法，菌丝一般10d15d长满平皿。具体的生长速度也与培养基配方、菌株品种有关，天数也可根据具体情况进行调节。7.4 栽培性状 对照6.4操作后，以时间计的检验项目中，被检试管菌种的任何一项时间较对照菌株推迟5d以上（含5天）者，为栽培性状
11、不合格；产量显著低于对照菌株者，为栽培性状不合格；子实体外观形态与对照明显不同或畸形者，为栽培性状不合格。8 判定规则 菌种的感官要求，生物学要求、生长速度以及栽培性状均符合要求的，为合格菌种。其中任何一项不符合要求，均为不合格菌种。DB21/T 35962022 5 附 录 A（资料性）蛹虫草菌种抽样方案 采用一般检验水平的一次抽样方案，方案规定的 AQL（不合格品百分数）为 0.5%。一次抽样方案由样本量 n、接收数 Ac 和拒收数 Re 组成。Re=Ac+1。一次抽样检验方案表现为N，n，Ac 或（n，Ac），（n，Ac，Re）等。其中：N 交验批的批量；n 样本大小；Ac 合格判定数。当样本中检出的不合格数dAc，判批合格；当dRe，判批不合格。DB21/T 35962022 附 录 B（资料性）液体菌种常用培养基及其配方 B.1 植物培养基（小麦培养基）小麦30g，营养液4.5ml。B.2 添加营养液 葡萄糖 20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生素B2 2mg，水 1000ml，pH 值自然。_