1、ICS 65.020B 15团体标准T/JAASS 5-2020蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法Determination of Parathion-methyl in Vegetablesby Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay20201012 发布20201012 实施江苏省农学会江苏省农学会发 布全国团体标准信息平台T/JAASS 5-2020目次前言.1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂与材料.16试样制备.27测定.28结果判定与表述.29 检测限和特异性.2全国团体标准信息平台III前言本文件按照 GB/T 1.1-202
2、0 给出的规则起草。本文件由江苏省农业科学院提出。本文件由江苏省农学会归口。本文件起草单位：江苏省农业科学院、南京农业大学、浙江大学、华南农业大学、广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司。本文件主要起草人：刘凤权、王利民、郭逸蓉、徐振林、华修德、王鸣华、张存政、石松、孙远明。全国团体标准信息平台T/JAASS 5-20201蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法1范围本文件规定了蔬菜中甲基对硫磷农药的酶联免疫快速检测方法的原理、试剂与材料、试样制备、测定、结果判定与表述、检测限和特异性。本文件适用于蔬菜中甲基对硫磷农药残留的快速检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件
3、必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法3术语和定义本文件无术语和定义。4原理采用间接竞争ELISA方法，在微孔板上包被甲基对硫磷包被抗原，检测样品中残留的甲基对硫磷农药与微孔板上的包被抗原竞争甲基对硫磷抗体，加入酶标羊抗鼠二抗后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪测定450 nm处吸光度，吸光值与检测样品中的甲基对硫磷残留量成负相关。5试剂与材料5.1 甲基对硫磷酶联免疫检测试剂盒，试剂盒中包括阳
4、性参考品、阴性参考品、甲醇、样品处理液、检测液、甲基对硫磷抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液和包被有甲基对硫磷包被源的可拆卸96 孔板，96 孔板使用铝箔袋真空干燥密封包装。5.2 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，所有实验用水为 GB/T 6682 中规定的二级水。5.3 天平 百分之一电子天平5.4 滤纸 9 cm 双圈定性滤纸5.5 微量移液器10 L-200 L、100 L-1000 L全国团体标准信息平台T/JAASS 5-202025.6 离心管 10 mL 离心管5.7 容量瓶 10 mL 容量瓶6试样制备称取1.0 g 0.01 g大米样品，粉碎后，加入1 mL甲醇（5
5、.1），静置15 min。加入5 mL样品处理液（5.1），充分混匀后，利用滤纸（5.4）进行固液分离。滤液转移至10 mL容量瓶（5.7）并定容至10 mL（样品处理液冲洗滤纸中的样品）。样品滤液由检测液（5.1）进行2.5倍稀释。7测定7.1 撕开铝箔袋，根据检测样品数取出一定量的检测微孔板。7.2 用检测液将抗体溶液 100 倍稀释，并与样品处理液等体积混合后，按照 50 uL/孔加样，同时设置两孔阴性参考品（5.1）、两孔阳性参考品（5.1）对照，并设一孔空白（检测液）对照。37 孵育 45 min，并洗板。7.3 用检测液将酶标二抗溶液 100 倍稀释，按照 50 uL/孔加样。37
6、 孵育 30 min，并洗板。7.4 按照 50 uL/孔加样，加入底物溶液。7.5 按照 25 uL/孔加样，加入终止溶液，并在 5 min 之内测定 OD450 值。8结果判定与表述对照阳性参考品 OD450 平均值、阴性参考品 OD450 平均值和空白孔的结果，根据竞争免疫法的原理及微孔板 OD450 值，按照如下原则进行结果判定：无效：阳性参考品显色 OD450 平均值0.8 或阴性参考品 OD450 平均值0.1；阳性：样品 OD450 值与阳性参考品显色 OD450 平均值的比值0.2；阴性：样品 OD450 值与阳性参考品显色 OD450 平均值的比值0.2。9检测限和特异性9.1 检测限：蔬菜中甲基对硫磷的检测限为 0.02 mg/kg，符合 GB 2763 要求。9.2 特异性：试纸条对杀螟硫磷、甲基毒死蜱、三唑磷、甲基立枯磷等农药的交叉反应均小于 1%。全国团体标准信息平台T/JAASS 5-2020江苏省农学会团体标准蔬菜中甲基对硫磷残留的测定蔬菜中甲基对硫磷残留的测定酶联免疫法酶联免疫法版权专有版权专有不得翻印不得翻印全国团体标准信息平台