1、ICS 67.050Z备案号：全联农业产业商会标全联农业产业商会标准准T/CAICC-02-2021生乳中啶虫脒的快速检测胶体金免疫层析法Rapid detection of acetamiprid in raw milk Colloidal gold immunochromatography2021-12-31 发布2022-01-01 实施全全联联农农业业产产业业商商会会发发布布全国团体标准信息平台I目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13原理.14试剂与材料.15仪器与设备.26分析步骤.27结果判定.28结果确认.39性能指标.310其他.4附录 A（规范性附录）快速检测方法性能
2、指标计算.5全国团体标准信息平台II前言本文件按照GB/T 1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由全联农业产业商会提出。本文件起草单位：全联农业产业商会、北京勤邦生物技术有限公司、北京三元食品股份有限公司。本文件主要起草人：郭树、万宇平、王兆芹、王春花、吴小胜、刘继超、董硕。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台1生乳中啶虫脒的快速检测 胶体金免疫层析法1范围本方法规定了生乳中啶虫脒的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于生乳中啶虫脒的快速测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用
3、文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法食药监办科201743号食品快速检测方法评价技术规范3原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的啶虫脒经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和试纸条中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对样品中啶虫脒进行定性判定。4试剂与材料4.1试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中二级水的要求。4.1.1甲醇（CH3OH）。4.1.2参考物质：啶虫脒参
4、考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量见表 1，纯度98%。表 1啶虫脒参考物质的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS 登录号分子式相对分子质量啶虫脒Acetamiprid160430-64-8C10H11ClN4222.68注：或等同可溯源物质。4.2溶液配制4.2.1啶虫脒标准储备液（100 g/mL）：准确称取啶虫脒参考物质（4.1.2）1 mg，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 100 g/mL 的啶虫脒标准储备液。4避光保存，有效期 6 个月。全国团体标准信息平台24.
5、2.2啶虫脒标准工作液（1 g/mL）：精密移取啶虫脒标准储备液（100 g/mL）（4.2.1）0.1 mL，置于 10 mL 容量瓶中，用甲醇（4.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为 1 g/mL 的啶虫脒标准工作液。临用新配。4.3材料啶虫脒胶体金免疫层析试纸条，适用基质为生乳。需在阴凉、干燥、避光条件下保存。4.3.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。4.3.2试纸条。5仪器与设备5.1电子天平：感量为 0.01 g。5.2移液器：10 L200 L、100 L1000 L。5.3迷你金属浴。6分析步骤6.1试样制备取适量有代表性样品充分混匀。6.2试样提取以生乳为基质的样品可直
6、接上样检测或根据产品说明书稀释后检测。6.3测定步骤吸取200 L样品待测液于金标微孔（4.3.1）中，抽吸510次使混合均匀，35温育5 min，将检测试纸条（4.3.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，35温育5 min，取出试纸条，对结果进行判定。注 1：测定步骤建议按照试纸条说明书。注 2：结果判定建议使用读数仪，读数仪的具体使用参照仪器使用说明书。6.4质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。6.4.1空白试验称取空白试样，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。6.4.2加标质控试验准确移取空白试样10 mL放入离心管中，加入0.1 mL啶虫脒标准工作液（1 g/mL）（4.
7、2.2），使试样中啶虫脒浓度为10 g/L，按照6.2和6.3步骤与样品同法操作。7结果判定全国团体标准信息平台37.1读数仪测定按读数仪说明书要求操作，直接读数并进行结果判定。7.2目视判定通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视判定示意图见图1。7.2.1无效质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，表明操作不正确或试纸条已失效，检测结果无效。7.2.2阳性结果质控线（C线）显色，检测线（T线）不显色或颜色浅于质控线（C线），表明样品中啶虫脒含量高于方法检出限，判定为阳性。7.2.3阴性结果质控线（C线）显色，检测线（T线）颜色深于质控线（C线）或与质控线
8、（C线）颜色基本一致，表明样品中啶虫脒含量低于方法检出限，判定为阴性。图 1目视判定示意图7.3质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。8结果确认当检测结果为阳性时，应按照GB 2763指定方法标准进行确证。9性能指标9.1检出限：10 g/L。9.2灵敏度：95%。9.3特异性：90%。全国团体标准信息平台49.4假阴性率：5%。9.5假阳性率：10%。注：性能指标计算方法见附录A。10其他本方法所述试剂、试纸条信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规定的各项性能指标的试剂、试纸条。全国团体标准信息平台
9、5AA附录A（规范性附录）快速检测方法性能指标计算A.1快速检测方法各个性能指标计算见表A.1。表 A.1快速检测方法性能指标计算表样品情况样品情况a检测结果检测结果b总数总数阳性阳性阴性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或 N.1+N.2显著性差异（2）2=(N12-N21-1)2/(N12+N21)，自由度（df）=1灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c(N11+N22)/(N1.+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11 表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2 表示所有的第二列；N12 表示第一行，第二列。C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。_全国团体标准信息平台