1、ICS 11.120C 25T中国医药保健品进出口商会团体标准T/CCCMHPIE 1.212016植物提取物 虾青素油Plant extractAstaxanthin Oil2017-06-21 发布2017-07-01 实施中国医药保健品进出口商会 发 布前 言本标准按照 GB/T 1.1-2009 和 GB/T 20004.1-2016 给出的规则起草。本标准由中国医药保健品进出口商会提出。本标准由中华人民共和国商务部归口。本标准起草单位：北京绿色金可生物技术股份有限公司。本标准主要起草人：姚军芳、侯翔燕、李艳梅、张培楠、吴启林、李春华。T/CCCMHPIE 1.2320161植物提取物
2、 虾青素油1范围本标准规定了虾青素油的的技术要求、检验方法、检验规则和标签、包装、运输、贮存及保质期要求。本标准适用于以人工培养的红球藻属雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）为原料经提取精制后，得到的虾青素油。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GGB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0832 水分测定法中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0821 重金属检查法中华人民
3、共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法3技术要求3.1工艺要求3.1.1植物原料雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）为人工养殖，在培养成熟后，收获而得到。3.1.2工艺过程雨生红球藻超临界二氧化碳萃取或溶剂提取纯化产品3.2产品要求3.2.1感官要求应符合表 1 的规定。表 1 感官要求项 目要 求色泽深红色气味藻类特殊气味状态油状物3.2.2理化要求应符合表
4、 2 的规定。T/CCCMHPIE 1.2320162表 2理化要求项目指标鉴别符合规定虾青素含量/%5.0游离虾青素含量(面积归一化法)/%5.0水分/%0.5重金属（以 Pb 计）/(mg/kg)10铅（Pb）/(mg/kg)1.0镉（Cd）/(mg/kg)1.0砷（As）/(mg/kg)2.0汞（Hg）/(mg/kg)1.03.2.3微生物要求应符合表 3 规定。表 3 微生物指标项目指标细菌总数/(cfu/g)1000霉菌及酵母菌数/(cfu/g)100大肠埃希氏菌不得检出沙门氏菌不得检出3.2.4其他污染物其他污染物限量要求，依据不同要求，应符合我国相关法规的规定。对于出口产品，应符
5、合出口目的国相关法规的规定。4检验方法4.1感官检验启开试样后，立即嗅其气味；另取试样适量置于无色50mL比色管中，在自然光线下，观察其色泽、外观，并检查有无异物。4.2理化检验4.2.1鉴别按第 A.2 章中规定的检验方法进行测定，所得供试品谱图中的三个主要的峰分别与对照品谱图中的 13-顺式虾青素，全反式虾青素和 9-顺式虾青素的保留时间一致。4.2.2虾青素含量按第 A.2 章中规定的检验方法进行测定。4.2.3游离虾青素含量按第 A.3 章中规定的检验方法进行测定。4.2.4水分T/CCCMHPIE 1.2320163按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0832 水分测定法中
6、第一法进行测定。4.2.5重金属（以 Pb 计）按按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 0821 重金属检查法中第二法进行测定。4.2.6铅按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.7镉按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.8砷按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子吸收分光光度法进行测定。4.2.9汞按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法中原子
7、吸收分光光度法进行测定。4.3微生物检验4.3.1细菌总数按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验。4.3.2霉菌及酵母菌数按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中规定的方法检验4.3.3大肠埃希氏菌按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。4.3.5沙门氏菌按中华人民共和国药典（2015 年版）第四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法中规定的方法检验。5检验规则5.1组批同品种、同等
8、级、同一批投料生产的产品，以同一生产日期为一检验批次。5.2出厂检验5.2.1产品须逐批检验，检验合格并签发合格证后产品方可出厂。5.2.2出厂检验项目：外观、水分、虾青素含量、游离虾青素含量、重金属及有害元素、菌落总数、霉菌及酵母菌数、大肠埃希氏菌、沙门氏菌。5.3型式检验5 3.1型式检验项目包括本标准中规定的全部项目。T/CCCMHPIE 1.23201645.3.2正常生产时每年应进行一次型式检验。5.3.3有下列情况之一时，应进行型式检验。a）原料来源变动较大时；b）正式投产后，如配方、生产工艺有较大变化，可能影响产品质量时；c）出厂检验与上一次型式检验结果有较大差异时；d）产品停产
9、 6 个月以上,恢复生产时；e）食品安全监督部门提出进行型式检验的要求时。5.4判定规则5.4.1检验结果全部项目符合本标准规定时，判该批产品为合格品。5.4.2检验结果不符合本标准要求时，可以在原批次产品中双倍抽样复检一次，判定以复检结果为准。复检后仍有一项或一项以上不符合标准时，判该批产品为不合格品。6包装、标签、运输、贮存和保质期6.1包装包装材料应符合 GB 9685 食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准的要求。6.2标签包装标签上应标注：产品名称、产品批号、产品规格、净含量、生产日期、保质期、生产厂名、厂址、产地。标签内容清晰可见，标签应粘贴牢固。6.3运输运输时必须轻装轻卸，不得
10、与有毒、有害和易污染物品混装载运，严防雨淋、暴晒。6.4贮存产品应存放在干燥、通风、阴凉、避光、清洁的地方，堆码距墙壁和地面 20cm 以上、并有垫隔物。避免与有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。6.5保质期在符合规定的贮运条件、包装完整、未经开启封口的情况下，保质期为 24 个月。T/CCCMHPIE 1.2320165A.1一般规定本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 规定的三级水。实验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2虾青素含量测定A.2.1方法提要虾青素油主要含有虾青素单酯、虾青素二酯和游离虾青素。虾青素酯经胆固醇酯酶酶
11、解后，都转化成游离虾青素。虾青素含量以游离虾青素计。A.2.2仪器和用具A.2.2.1分析天平，感量为 0.01mg。A.2.2.2超声波清洗仪。A.2.2.3高效液相色谱仪（附紫外检测器）。A.2.2.40.45m 微孔滤膜，有机相。A.2.2.5棕色容量瓶（100mL）。A.2.2.6离心机。A.2.2.7涡旋混合器。A.2.2.8恒温箱。A.2.2.9氮吹仪。A.2.3试剂和溶液A.2.3.1甲醇，色谱纯。A.2.3.2叔丁基甲醚，色谱纯。A.2.3.3磷酸，优级纯。A.2.3.4三羟甲基氨基甲烷。A.2.3.5石油醚（60-90）。A.2.3.6丙酮。A.2.3.7纯水，GB/T 66
12、82 规定的二级水。A.2.3.8十水硫酸钠。A.2.3.9无水硫酸钠。A.2.3.10盐酸A.2.3.11内标：反式-阿朴-8-胡萝卜醛（Trans-beta-apo-8-carotenal），Sigma货号10829或其他等同品。A.2.3.12对照品：USP Astaxanthin Esters from Haematococcus pluvialis RS（注：该对照品为雨生红球藻来源的虾青素酯混合物，含有 13-顺式虾青素、全反式虾青素和 9-顺式虾青素的脂肪酸酯，标示的总虾青素含量以酶解后游离虾青素计约 10%）。A.2.3.13胆固醇酯酶（Cholesterol esterase
13、），Wako Pure Chemicals 货号 037-11221，Sigma 货号 C9281 或其他等同品。A.2.3.140.05mol/L Tris-HCl（pH7.0）缓冲液的配制：精确称取三羟甲基氨基甲烷 0.606g，用 75mL 去离子附录 A（规范性附录）检验方法T/CCCMHPIE 1.2320166水溶解，用 1mol/L 盐酸调 pH7.0，用水稀释至 100mL。A.2.3.15胆固醇酯酶溶液的配制：精确称取胆固醇酯酶适量到 25mL 容量瓶中，用 0.05mol/L Tris-HCL（pH）缓冲液溶解，配成浓度为 4 个酶活单位/mL 的酶溶液，现用现配。A.2.
14、4色谱条件及系统适用性A.2.4.1色谱条件a)色谱柱：YMCTM Carotenoid S-5（4.6250mm，5m）或同类型色谱柱。b)流动相：A 相为甲醇，B 相为甲基叔丁基醚，C 相为 1%磷酸水。梯度条件见表 A.1。表 A.1梯度条件时间/minA/%B/%C/%0-1581 6615 30415-2366 1630 80423-271680427-2816 8180 15428-3581154c)检测波长：474nm。d)柱温：25e)流速：1.0mL/minf)进样量：20LA.2.4.2系统适用性理论塔板数按全反式虾青素计应不低于 5000，13-顺式虾青素与全反式虾青素的
15、分离度应不小于 2.0。A.2.5操作方法A.2.5.1内标溶液的制备：取反式-阿朴-8-胡萝卜醛适量，精密称定，用丙酮溶解并配制成 0.18mg/mL 的溶液。A.2.5.2对照品储备溶液的制备：取虾青素酯对照品约 30mg，精密称定，到 10mL 干燥小烧杯中，用丙酮溶解并转移到 100mL 容量瓶中，丙酮定容，摇匀，即得（每 1mL 含全反式虾青素对照品 27g）。A.2.5.3对照品溶液的制备：准确吸取 2.0mL 对照品贮备液、1.0mL 内标溶液和 3.0mL 胆固醇酯酶溶液于10mL 玻璃具塞离心管中，倒置混合均匀。将离心管置于 37的恒温箱中反应 45min，每 10min 缓
16、慢倒置混合一次。反应后，向管中加入 1g 十水硫酸钠、2mL 石油醚，涡旋混合 30 秒，然后置于离心机中在 3000rpm下离心 3min。吸取石油醚层于另一只 10mL 玻璃离心管（管中事先加入 1g 无水硫酸钠）。在室温下用氮气吹干石油醚，加入 3mL 丙酮，超声溶解，过滤，滤液即为对照品溶液。A.2.5.4供试品储备溶液的制备：将供试品置于 50-60水浴中避光保温 30min，每隔 10 分钟摇一次。称取供试品约 60mg，精密称定，于 10mL 干燥小烧杯中，丙酮溶解并完全转移至 100mL 容量瓶中，用丙酮定容至刻度，摇匀。可根据供试品的含量适当调节称样量，如供试品含量为 10%，则称样量为 30mg。A.2.5.5供试品溶液的制备：准确吸取 2.0mL 供试品贮备液和 1.0mL 内标溶液于 10mL 玻璃具塞离心管中，按“对照品溶液”项下操作，即得。A.2.5.6测定方法分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液 20L，依次注入高效液相色谱仪，测定，计算含量。A.2.6结果计算虾青素油中虾青素含量以游离虾青素的质量分数 计，数值以%表示，按公式（A.1）计算：T/CCCMH